一种预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的靶点及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的靶点及应用。本发明专利技术对筛选出的小细胞肺癌细胞耐药相关的长链非编码RNA，然后RT‑qPCR法进行验证，筛出了由HOTTIP和TUG1组成的分子标记物。裸鼠动物实验证实HOTTIP和TUG1能促进SCLC生长和增加细胞对SCLC化疗药物的敏感性。本发明专利技术通过ROC曲线分析，发现HOTTIP和TUG1标志物对于预测小细胞肺癌患者化疗药物敏感性具有较高的灵敏度和特异性。利用本发明专利技术来预测小细胞肺癌化疗药物敏感性，方法简单、时间短、效率高，可对SCLC患者进行分层，为小细胞肺癌的精准治疗提供依据。

A target for predicting the sensitivity of small cell lung cancer to chemotherapeutic drugs and its application

【技术实现步骤摘要】
一种预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的靶点及应用
本专利技术属于医学预测、诊断
，本专利技术涉及一种预测小细胞肺癌化疗药物敏感性的试剂盒，具体涉及包含长链非编码RNAHOTTIP和TUG1的组合试剂盒及其在预测小细胞肺癌一线化疗药物敏感性中的应用。
技术介绍
长链非编码RNA(longnoncodingRNA,lncRNA)为一类长度大于200个核苷酸的新型基因表达调控因子，近年来的研究表明，lncRNA以RNA的形式在表观遗传水平、转录水平和转录后水平调控基因的表达，广泛参与调控个体的生长发育以及细胞凋亡、增殖、分化等生命活动，还参与了人类癌症、心血管疾病和神经退行性疾病等病理进程，lncRNA的研究已成为现代分子生物学领域研究的重要热点。目前，lncRNA在肿瘤领域的研究主要集中其对肿瘤发生发展中的作用，而lncRNA与肿瘤耐药关系的研究报道尚很少，CUDR(cancerup-regulateddrugresistant)是第一个发现的与肿瘤耐药相关的lncRNA，CUDR基因长约2.2kb，位于染色体19p13.1上，缺乏完整的开放阅读框，在阿霉素诱导耐药的鳞癌细胞株中显著高表达，将CUDR表达质粒转染至结肠癌细胞A431和肝癌细胞HepG2后，细胞表现出对阿霉素和足叶乙苷产生耐药性，细胞凋亡明显减少，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)的表达显著降低，表明CUDR可通过抑制caspase3表达而降低癌细胞对化疗药物的敏感性。HOTAIR是另一个除与肿瘤侵袭转移有关，还与化疗药物敏感性关系密切的lncRNA，采用RNA干扰技术沉默肝癌细胞中HOTAIR的表达，细胞易被TNF-α诱发凋亡，对顺铂和阿霉素的化疗敏感性增加。结果表明某些lncRNAs可能参与了肿瘤耐药的产生。如何较好地预测小细胞肺癌患者对化疗药物的敏感性，为临床医生快速准确了解小细胞肺癌患者对化疗药物的疗效，及时采取更具个体化的防治方案提供支持，目前尚未存在有效的解决方法。
技术实现思路
为了解决上述存在的问题，本专利技术通过多方面研究发现长链非编码RNAHOTTIP和TUG1可以有效预测小细胞肺癌患者对化疗药物的敏感性，可在早期准确地预测SCLC患者对化疗药物的敏感性，帮助临床医生及时调整治疗，避免治疗不当或过度，达到较理想治疗效果；本专利技术可对肺癌患者进行分层，为小细胞肺癌的精准治疗提供依据。本专利技术的目的在于提供一种可应用于临床预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的分子标记物和试剂盒。本专利技术所采取的技术方案是：长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1作为预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的靶点的应用。定量检测长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的试剂在制备预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的试剂中的应用。进一步的，所述化疗药物选自顺铂、足叶乙甙、阿霉素。一种预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的试剂盒，该试剂盒含有定量检测长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的实时荧光定量PCR引物。降低或去除长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1含量的试剂在制备提高小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的试剂中的应用。进一步的，上述降低或去除长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1含量的试剂为长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的干涉序列。进一步的，上述长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的干涉序列选自SEQIDNO：1～2、SEQIDNO：3～4、SEQIDNO：5～6、SEQIDNO：7～8、SEQIDNO：9～10、SEQIDNO：11～12。一种提高小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的试剂盒，该试剂盒含有降低或去除长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1存在量的试剂为长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的干涉序列。进一步的，所述长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的干涉序列选自SEQIDNO：1～2、SEQIDNO：3～4、SEQIDNO：5～6、SEQIDNO：7～8、SEQIDNO：9～10、SEQIDNO：11～12。一种预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的方法，定量检测长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的表达量，该方法用于非疾病的诊断和治疗。本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术HOTTIP和TUG1作为组合分子标记物，经过临床样本验证，能较好预测小细胞肺癌患者对化疗药物的敏感性，二个分子标记物首次应用于小细胞肺癌患者化疗药物的敏感性检测试剂盒开发，可为临床医生快速准确地了解小细胞肺癌患者对化疗药物的疗效，及时采取更具个体化的防治方案提供支持。(2)本专利技术提供了相应的试剂盒运用实时荧光定量PCR方法，检测快速方便、检测灵敏度、成本低。附图说明图1是基因芯片检测结果图，A是激光扫描仪扫描芯片采集杂交图象；B是差异基因的分布图；图2是体内动物实验降低HOTTIP表达对肿瘤生长和药物敏感性的影响，A为各组肿瘤的外形，B为各组小鼠体内肿瘤的生长情况，C为各组肿瘤的重量统计，D为各组肿瘤的体积统计；图3是体内动物实验降低TUG1表达对H69AR细胞生长和药物敏感性的影响，A为各组肿瘤的外形大小，B为各组肿瘤的重量统计，C为各组肿瘤的体积统计，D为各组动物体内TUG1的表达情况；图4是采用本专利技术的试剂盒检测样本的HOTTIP及内参GAPDH的熔解曲线图；图5是采用本专利技术的试剂盒检测样本的TUG1及内参GAPDH的熔解曲线图；图6是采用本专利技术的试剂盒分别进行HOTTIP和TUG1单指标检测及联合检测化疗药物敏感性的ROC曲线图。具体实施方式长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1作为预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的靶点的应用。优选的，所述化疗药物选自顺铂、足叶乙甙、阿霉素。定量检测长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的试剂在制备预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的试剂中的应用。优选的，定量检测长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的试剂为定量检测长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的实时荧光定量PCR引物。优选的，实时荧光定量PCR引物为SEQIDNO：13～14和/或SEQIDNO：15～16。优选的，所述化疗药物选自顺铂、足叶乙甙、阿霉素。一种预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的试剂盒，该试剂盒含有定量检测长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的实时荧光定量PCR引物。优选的，实时荧光定量PCR引物为SEQIDNO：13～14和/或SEQIDNO：15～16。优选的，所述化疗药物选自顺铂、足叶乙甙、阿霉素。优选的，该试剂盒还含有逆转录酶、Randomprimers、OligodTPrimer、缓冲液、Taq酶、dNTPs、SYBRGreenI、RNAsin、无核酸酶纯水。降低或去除长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1含量的试剂在制备提高小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的试剂中的应用。优选的，上述降低或去除长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1含量的试剂为长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的干涉序列。优选的，所述长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的干涉序列选自SEQIDNO：1～2、SEQIDNO：3～4、SEQIDNO：5～6、SEQIDNO：7～本文档来自技高网...

【技术保护点】
长链非编码RNA HOTTIP和/或TUG1作为预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的靶点的应用。

【技术特征摘要】
1.长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1作为预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的靶点的应用。2.定量检测长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的试剂在制备预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的试剂中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述化疗药物选自顺铂、足叶乙甙、阿霉素。4.一种预测小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有定量检测长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的实时荧光定量PCR引物。5.降低或去除长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1含量的试剂在制备提高小细胞肺癌患者对化疗药物敏感性的试剂中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，降低或去除长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1含量的试剂为长链非编码RNAHOTTIP和/或TUG1的干涉序列。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述长链非编码RNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭琳琅，孙艳芹，牛玉春，郭琳珽，张健，朱伟良，王琼瑶，
申请(专利权)人：南方医科大学珠江医院，
类型：发明
国别省市：广东,44