一种珊瑚菌精制多糖及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于医药的技术领域，公开了一种珊瑚菌精制多糖及其制备方法与应用。所述方法为：(1)将珊瑚菌在蒸馏水中进行回流提取，采用大孔吸附树脂对提取液进行脱色处理，再采用沉淀剂进行沉淀，离心，收集沉淀物并干燥，得到珊瑚菌粗多糖；(2)将珊瑚菌粗多糖配制成多糖溶液，转入装有经过预处理的DEAE‑52树脂的层析柱中，用蒸馏水洗脱，分别收集洗脱液，检测洗脱液，测定490nm下的吸光度，绘制曲线，同一吸收峰内的洗脱液合并；浓缩，干燥，得到精制多糖。本发明专利技术的多糖具有抗氧化、抗肿瘤和免疫增强活性，且使用剂量低，在同样剂量下的毒副作用也较低。

The preparation method and application of a kind of coral polysaccharide purified polysaccharide

The invention belongs to the technical field of medicine, and discloses a kind of coral bacteria refining polysaccharide and its preparation method and application. The method is as follows: (1) the coral bacteria in distilled water extraction, macroporous resin decolorization treatment on the extract, then using precipitant precipitation, centrifugation, the precipitate was collected and dried by coral fungi polysaccharides; (2) the coral fungi polysaccharides prepared polysaccharides to a solution, after the column pretreatment DEAE 52 resin, eluted with distilled water were collected eluent, elution detection, determination of absorbance, 490nm curves, the same absorption liquid and elution peak in concentration; dry, the refined polysaccharides. The polysaccharide of the present invention has antioxidation, anti-tumor and immune enhancement activity, with low dosage and low toxic and side effects at the same dose.

【技术实现步骤摘要】
一种珊瑚菌精制多糖及其制备方法与应用
本专利技术属于医药的
，具体涉及一种珊瑚菌精制多糖及其制备方法与应用。
技术介绍
多糖是除了蛋白质和核酸以外的一类重要的生物高分子化合物。现代药理研究表明多糖具有多种生理活性，包括抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、降血脂、延缓衰老、增强免疫功能等。免疫调节作用是多糖最重要的生物活性功能，一直是人们研究的热点。免疫细菌多糖和人工合成的化合物，其不良反应和副作用已引起人们广泛注意。而大多数高等植物来源的多糖均为无不良反应的物质，不会对机体产生较大的副作用，因此，从植物中分离的多糖在生物医学上引起极大关注。目前已对百余种植物多糖进行了活性相关的研究报道。研究表明植物多糖可通过与免疫细胞表面的多种受体结合、激活不同的信号通路来调控动物机体内的免疫系统，包括：刺激巨噬细胞、T/B淋巴细胞、自然杀伤细胞的分泌或增殖；调节细胞因子的释放；促进抗体的分泌；激活补体系统等。对这些活性物质的作用机制也在不断发展，其中多糖对非特异性诱导的免疫机制更受到人们的重视。植物多糖是最理想的免疫候选药物。珊瑚菌(Ramariabotrytoides)属于多孔菌目Aphyllophorales，珊瑚菌科Clavariaceae，又名扫帚菌，含有多种氨基酸、矿质元素、维生素及碳水化合物。目前国内外对珊瑚菌的研究主要研究其挥发油、内酯、甾醇类、有机酸、萜类、以及蛋白类等成分。而对珊瑚菌多糖的研究报道几乎没有。大多数天然活性多糖是无毒副作用的天然绿色产品。随着研究的不断深入，天然多糖越来越成为食品、保健品、医药等领域的研究热点。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种珊瑚菌精制多糖的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供由上述制备方法制备得到的珊瑚菌精制多糖。本专利技术的再一目的在于提供上述珊瑚菌精制多糖的应用。本专利技术的目的通过下述方案实现：一种珊瑚菌精制多糖的制备方法，包括以下步骤：(1)将珊瑚菌(Ramariabotrytoides)在蒸馏水中进行回流提取，采用大孔吸附树脂对提取液进行脱色处理，再采用沉淀剂进行沉淀，离心，收集沉淀物并干燥，得到珊瑚菌粗多糖；(2)将珊瑚菌粗多糖配制成多糖溶液，转入装有经过预处理的DEAE-52树脂的层析柱中，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，苯酚-硫酸法跟踪检测洗脱液，测定490nm下的吸光度，绘制洗脱曲线，同一吸收峰内的洗脱液合并；然后旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，得到精制多糖，其中，蒸馏水洗脱得到的精制多糖记为RBP-I。步骤(2)中所述的DEAE-52树脂预处理的方法为：将DEAE-52树脂用水4～40℃浸泡12～24h；再用0.5mol/L的盐酸溶液浸泡0.5～2h；0.5mol/L的NaOH溶液浸泡0.5～2h，过滤，水洗至中性，得到经过预处理的DEAE-52树脂；步骤(2)中所述的旋蒸浓缩的温度为40～60℃。步骤(2)中所述层析柱为Z型层析柱。步骤(2)中所述蒸馏水进行洗脱时流速为5～10s/滴。步骤(2)中所述装有经过预处理的DEAE-52树脂的层析柱是通过以下方法装填而成：将经过预处理的DEAE-52树脂于40～60℃旋转蒸发除气泡后转入Z型层析柱中，用恒流泵泵送蒸馏水以使填料装柱均匀，平衡后流速5～10s/滴。步骤(1)中所述珊瑚菌粗多糖的具体制备方法为：(1-1)将珊瑚菌(Ramariabotrytoides)粉碎后过筛，得到珊瑚菌粗粉；向珊瑚菌粗粉中加入蒸馏水进行加热回流提取，离心，并将上清液浓缩，得到浓缩的珊瑚菌粗多糖溶液；(1-2)将珊瑚菌粗多糖溶液和经过预处理的大孔吸附树脂混合，脱色处理，过滤出多糖溶液，并用水反复洗出树脂中吸附的多糖，将脱色后的多糖溶液合并，减压浓缩，得到浓缩糖液；(1-3)向浓缩糖液中加入沉淀剂进行沉淀，离心，收集沉淀物并干燥，得到珊瑚菌多糖(RBPs)。步骤(1)和(1-1)所述加热回流的温度为75～100℃；步骤(1)和(1-1)所述的热水回流提取的时间为1～4h；步骤(1)和(1-1)中加热回流提取的次数为2～4次；步骤(1)和(1-1)中所述珊瑚菌粗粉与蒸馏水的质量比为1:20～1:40；热水回流提取多次时，珊瑚菌粗粉与每一次使用的蒸馏水的质量比为1:20～1:40。步骤(1-1)中所述浓缩为减压浓缩，浓缩的温度为40～60℃；步骤(1-2)中所述减压浓缩的温度为40～60℃。步骤(1)和(1-2)所述脱色处理的条件为于40～60℃水浴2～4h；步骤(1)和(1-2)中所述大孔吸附树脂为D354FD树脂；步骤(1)和(1-2)中所述大孔吸附树脂在使用前需进行预处理，预处理的方法为：将大孔吸附树脂依次采用蒸馏水、盐酸浸泡，洗涤至中性，再用氢氧化钠溶液浸泡，再洗涤至中性，得到经过预处理的大孔吸附树脂。所述蒸馏水浸泡的时间为12～24h，盐酸的浓度为3～5wt％，盐酸浸泡的时间为0.5～3h，氢氧化钠溶液的浓度为3～5wt％，氢氧化钠溶液浸泡的时间为0.5～3h。步骤(1)和(1-3)中所述沉淀剂为无水乙醇或体积分数为90～100％的乙醇溶液；步骤(1)和(1-3)中所述沉淀的时间为8～24h；步骤(1)和(1-3)中所述沉淀的温度为0～4℃。步骤(1-3)中所述沉淀剂的加入量为浓缩糖液体积的3～5倍；步骤(1)和(1-3)中所述离心的转速为3000～5000r/min；所述离心的时间为12～15min；步骤(1)和(1-3)中所述干燥的温度为40～60℃，干燥至恒重。步骤(1-1)中所述的离心的转速为3000～5000r/min；所述的离心的时间为8～12min；所述过滤的次数为2～4次。所述的珊瑚菌精制多糖(RBP-I)为均一组分，其分子量(Mn)为1.2×104Da；所述珊瑚菌制多糖，通过上述制备方法制备得到.所述珊瑚菌精制多糖在制备抗癌、抗氧化和/或免疫增强药物中的应用。本专利技术的原理：植物来源的多糖具有抗氧化、抗肿瘤和增强免疫功能等多种生物活性。多糖尤其能通过调节巨噬细胞的免疫功能体现出各种有益的药理作用。本专利技术通过体外实验发现和确证植物粗多糖具有抗氧化、抗肿瘤和免疫增强活性，且使用剂量低，在同样剂量下的毒副作用也较低。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本专利技术的珊瑚菌精制多糖(RBP-I)对DPPH和ABTS+·自由基具有一定的清除和抑制作用；(2)本专利技术的精制多糖(RBP-I)能显著增强RAW264.7巨噬细胞NO的释放；(3)本专利技术的珊瑚菌精制多糖(RBP-I)能显著增强RAW264.7巨噬细胞IL-6及TNF-α的释放；(4)本专利技术的珊瑚菌精制多糖(RBP-I)能显著增加RAW264.7巨噬细胞IL-6和TNF-α的表达；(5)珊瑚菌精制多糖的用药剂量比较低，而且在有效用药剂量范围内毒性较低。附图说明图1是实施例4制备得到的珊瑚菌精制多糖(RBP-I)的离子交换柱层析洗脱曲线图；图2是实施例4制备得到的珊瑚菌精制多糖(RBP-I)的高效凝胶渗透色谱(GPC)图；图3是实施例4制备得到的珊瑚菌精制多糖RBP-I的葡聚糖凝胶SephadexG-100柱层析洗脱曲线图；图4是实施例4制备得到的珊瑚菌精制多糖RBP-I红外光谱图；图5是实施例4制备的珊瑚菌粗多糖(RBP-I)对DP本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种珊瑚菌精制多糖的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将珊瑚菌在蒸馏水中进行回流提取，采用大孔吸附树脂对提取液进行脱色处理，再采用沉淀剂进行沉淀，离心，收集沉淀物并干燥，得到珊瑚菌粗多糖；(2)将珊瑚菌粗多糖配制成多糖溶液，转入装有经过预处理的DEAE‑52树脂的层析柱中，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，苯酚‑硫酸法跟踪检测洗脱液，测定490nm下的吸光度，绘制洗脱曲线，同一吸收峰内的洗脱液合并；然后旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，得到精制多糖，其中，蒸馏水洗脱得到的精制多糖记为RBP‑I。

【技术特征摘要】
1.一种珊瑚菌精制多糖的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将珊瑚菌在蒸馏水中进行回流提取，采用大孔吸附树脂对提取液进行脱色处理，再采用沉淀剂进行沉淀，离心，收集沉淀物并干燥，得到珊瑚菌粗多糖；(2)将珊瑚菌粗多糖配制成多糖溶液，转入装有经过预处理的DEAE-52树脂的层析柱中，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，苯酚-硫酸法跟踪检测洗脱液，测定490nm下的吸光度，绘制洗脱曲线，同一吸收峰内的洗脱液合并；然后旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，得到精制多糖，其中，蒸馏水洗脱得到的精制多糖记为RBP-I。2.根据权利要求1所述珊瑚菌精制多糖的制备方法，其特征在于：所述珊瑚菌粗多糖的具体制备方法为；(1-1)将珊瑚菌粉碎后过筛，得到珊瑚菌粗粉；向珊瑚菌粗粉中加入蒸馏水进行加热回流提取，离心，并将上清液浓缩，得到浓缩的珊瑚菌粗多糖溶液；(1-2)将珊瑚菌粗多糖溶液和经过预处理的大孔吸附树脂混合，脱色处理，过滤出多糖溶液，并用水反复洗出树脂中吸附的多糖，将脱色后的多糖溶液合并，减压浓缩，得到浓缩糖液；(1-3)向浓缩糖液中加入沉淀剂进行沉淀，离心，收集沉淀物并干燥，得到珊瑚菌多糖。3.根据权利要求1或2所述珊瑚菌精制多糖的制备方法，其特征在于：所述脱色处理的条件为于40～60℃水浴2～4h；所述沉淀剂为无水乙醇或体积分数为90～100％的乙醇溶液；所述沉淀的温度为0～4℃；所述大孔吸附树脂为D354FD树脂。4.根据权利要求1或2所述珊瑚菌精制多糖的制备方法，其特征在于：所述大孔吸附树脂在使用前需进行预处理，预处理的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈健，董芳，高呈琳，耿佳欢，申超群，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44