肺炎球菌‑百白破联合疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种肺炎球菌‑百白破联合疫苗，联合疫苗包括肺炎球菌疫苗和百白破疫苗，具体为：肺炎球菌疫苗为肺炎球菌荚膜糖与肺炎球菌蛋白结合物及百白破疫苗包括无细胞百日咳疫苗、白喉类疫苗和破伤风类疫苗；其中：肺炎球菌蛋白为肺炎球菌表达的高保守性并具有免疫原性的蛋白，与具有免疫原性的肺炎球菌荚膜糖自发缀合；无细胞百日咳疫苗为百日咳疫苗原液、白喉类疫苗为白喉类毒素和破伤风类疫苗为破伤风类毒素。采用该种联合疫苗首创的实现了可同时实现四种疾病的免疫，其中肺炎球菌疫苗的蛋白‑荚膜糖结合体可在不同的血清型间起到诱导交叉免疫保护作用，并能避免与其他疫苗如白喉疫苗、破伤风疫苗在体内产生免疫冲突。

Pneumococcal vaccine DPT

The invention relates to a pneumococcal vaccine DPT vaccine, including pneumococcal vaccine and DPT vaccine, specifically: pneumococcal vaccine for pneumococcal capsular polysaccharide and pneumococcal protein conjugates and DPT vaccine including acellular pertussis vaccine, diphtheria and tetanus vaccine vaccine; the highly conserved protein expression of pneumococcal pneumococcal and has immunogenic protein, and immunogenicity of pneumococcal capsular polysaccharide conjugates spontaneously; acellular pertussis vaccine for pertussis vaccine diphtheria vaccine for the kind of solution, diphtheria toxoid and tetanus vaccine for tetanus toxoid. The first realization of the combined vaccine can achieve four kinds of immune diseases at the same time, the protein capsular sugar combination of pneumococcal vaccine can induce cross protective immunity in different serotypes, and can avoid with other vaccines such as diphtheria, tetanus vaccine in vivo immune conflict.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疫苗生产制备领域，尤其涉及联合疫苗，具体是指一种肺炎球菌-百白破联合疫苗。
技术介绍
肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)简称肺炎球菌(Pneumococcus)，寄居于正常人的鼻咽腔中，是细菌性大叶性肺炎、脑膜炎、中耳炎、肺炎、支气管炎的主要病原菌。肺炎球菌导致的疾病一直是全球严重的公共卫生问题，在全世界范围内有较高的发病率和病死率，尤其是对2岁以下的儿童和老人。目前已上市的肺炎球菌荚膜糖疫苗和荚膜糖蛋白质结合疫苗，其设计都基于肺炎球菌荚膜糖，涵盖了导致肺炎球菌性疾病的最常见血清型。但肺炎球菌荚膜糖为胸腺非依赖性抗原(Thymus independent antigen，TI-Ag)，抗体反应主要依赖于其重复单位组成的线性表位，在无T淋巴细胞辅助的情况下直接与B淋巴细胞表面的IgM受体交联，所诱导的抗体主要为IgM和IgG2，缺少较好的补体活化能力，抗体水平不能维持足够长的时间，且不能诱导免疫记忆，无法在2岁以下幼儿中产生免疫保护。荚膜糖复杂的结构导致每一个血清型的免疫原性不同，无法产生有效的免疫应答。肺炎球菌结合疫苗包括血清型别多，各型别用于结合的特异性结构不同，导致其每个型别的结合方法相异。对荚膜糖的修饰及与载体蛋白的结合要在保证荚膜糖特异基团不丢失、抗原性和免疫原性不受影响的前提下进行，同时为了避免糖链的过度交联和结合物除菌过滤的要求，对荚膜糖及结合物分子的大小应当有一定控制。7价疫苗于2000年2月在美国获准使用。由于肺炎球菌型别多，在结合疫苗的制作过程需要结合蛋白成分，因蛋白成分可以引起局部反应，所以生产包含12个型别以上的结合疫苗就很困难。结合疫苗在初次免疫后活的抗体浓度仅能维持几个月，随后就会下降到免疫前水平；并且结合疫苗的整个工艺过程中需要加入多种化学试剂参与反应，并且荚膜糖蛋白结合疫苗的血清型覆盖率低和非疫苗血清型肺炎球菌感染性疾病的增加使得更多研究者开始关注其他方向的肺炎球菌疫苗开发。百白破疫苗是我国现行的免疫规划程序规定的针次最多、使用最广泛的疫苗，包括无细胞百白破及全细胞百白破两种联合疫苗，近年来无细胞百白破联合疫苗由于其良好的免疫原性和安全性取代了全细胞百白破联合疫苗而广泛用于儿童的预防接种，已被纳入许多国家的常规免疫计划中。但百白破疫苗由于其疫苗本身的性质导致其具有多种副作用，难以与其他疫苗进一步联合使用。赛诺菲巴斯德公司生产的五联疫苗一度成为免疫学历史上的新高度，其中包括百白破疫苗及脊髓灰质炎病毒及b型流感嗜血杆菌荚膜糖。肺炎球菌蛋白疫苗已成为近十年来肺炎疫苗的研发主流，具有种属特异性抗原为基础的疫苗广受研发人员的重视，吸引了大量的目光。但由于蛋白本身的结构及理化性质的限制，很多肺炎球菌蛋白无法直接用于人体免疫，需要花费大量的人力和物力进行研究及临床验证。蛋白疫苗利用生物工程技术合成蛋白抗原，蛋白抗原由于其选用的均为高度保守的肺炎球菌特异性蛋白，从而消除了不同血清型之间的免疫差异，并且由于不需要其他类型的通用蛋白载体，消除了现有的肺炎球菌疫苗不能与通用载体蛋白同类型的疫苗同时联合使用的障碍；其蛋白抗原本身也可以作为载体蛋白与肺炎球菌荚膜糖进行自发性缀合，因此免疫效果更好，实现了特异性免疫与广泛免疫的联合实现。肺炎球菌由于其血清型多，导致其抗原本身的抗原结构大稳定性差，难以与其他疫苗联合共存使用，并且现有的肺炎球菌荚膜糖蛋白结合疫苗均用白喉或破伤风类毒素作为蛋白载体，这种疫苗的主要成分为血清型特异性的荚膜糖，对未包含在疫苗内的其他血清型肺炎球菌感染无效，即缺乏交叉免疫保护效果；并将与已在儿童常规免疫接种中使用的白喉及破伤风疫苗产生干扰，破坏现有的免疫效果。故不以肺炎球菌自身的蛋白抗原作为蛋白载体，肺炎球菌与破伤风疫苗基本上不可能联合使用，而这四种抗原所引起的疾病类型有很多的重叠并且在很多情况下会相互影响，在接种一种疫苗并间隔很长一段时间后才可以接种第二种疫苗会制约疾病的免疫效果，延误病情或错过最佳治疗时机。因此研究一款自身免疫原性够好能够稳定存在并能与百白破疫苗联合起效的肺炎球菌-百白破联合疫苗成为了疫苗研发领域的当务之急。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服了上述现有技术的缺点，提供了一种能够实现四种疾病同时预防的肺炎球菌-百白破联合疫苗。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术的肺炎球菌-百白破联合疫苗，包括肺炎球菌疫苗和百白破疫苗，具体为：a.肺炎球菌疫苗为肺炎球菌荚膜糖PS与肺炎球菌蛋白结合物；b.百白破疫苗包括无细胞百日咳疫苗、白喉类疫苗和破伤风类疫苗；其中：肺炎球菌蛋白为肺炎球菌表达的高保守性并具有免疫原性的蛋白，与具有免疫原性的肺炎球菌荚膜糖自发缀合；无细胞百日咳疫苗为百日咳疫苗原液、白喉类疫苗为白喉类毒素和破伤风类疫苗为破伤风类毒素，且百白破疫苗为悬混液。肺炎球菌荚膜糖的血清型中包括：1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19F、19A、20、22F、23F和/或33F；更优选地肺炎球菌荚膜糖的血清型中包括：4、6B、9V、14、18C、19F和23F。肺炎球菌荚膜糖与肺炎球菌蛋白的每种血清型与蛋白之间的质量比为1.5～4.5:1，优选地质量比为2:1。肺炎球菌蛋白包括：肺炎球菌溶血蛋白及其改性衍生物，优选地为肺炎球菌溶血蛋白Ply、改性肺炎球菌溶血蛋白ΔA146Ply、肺炎球菌溶血蛋白衍生物PlyD1、肺炎球菌溶血蛋白衍生物PlyD B、肺炎球菌溶血蛋白衍生物PlyD T；肺炎球菌表面蛋白及其改性衍生物，优选地为肺炎球菌表面蛋白C；肺炎球具表面黏附蛋白及其改性衍生物，优选地为肺炎球菌表面黏附蛋白A、肺炎球菌表面黏附蛋白C；肺炎球菌三组氨酸蛋白家族及其改性衍生物，优选地为肺炎球菌三组氨酸蛋白D和/或肺炎球菌黏附毒力因子，优选地为肺炎球菌黏附毒力因子A。肺炎球菌-百白破联合疫苗还包括蔗糖，用于作为肺炎球菌疫苗的冻干制剂的冻干保护剂。优选地，蔗糖的初始浓度不小于60％，优选为大于70％。优选地，蔗糖在冻干原液中的初始质量百分含量为不大于20％；较佳地，为4～20％；作为一种较佳的实施方式，根据所需制备的疫苗的不同为7～10％、8～10％、10～15％或12～15％；最佳为7％、8％、10％或12％。优选地，蔗糖选用工业级分析纯或药用级。作为一种优选的实施方式，肺炎球菌荚膜糖与肺炎球菌蛋白的结合物包括：血清型4、6B、9V、14、18C、19F及23F与蛋白ΔA146Ply结合物。优选地，肺炎球菌荚膜糖与肺炎球菌蛋白的结合物为冻干制剂，冻干保护剂为蔗糖。优选地，肺炎球菌多疫苗的血清抗体水平≥0.35μg/mL。优选地，无细胞百日咳疫苗效价≥4.0IU；白喉疫苗效价≥30IU；破伤风疫苗效价≥40IU。优选地，联合疫苗在临用前将百白破悬混液加入肺炎球菌荚膜糖与肺炎球菌蛋白结合物冻干制剂中，将肺炎球菌荚膜糖与肺炎球菌蛋白结合体复溶，混合均匀后肌肉注射。作为一种优选的实施方式，本专利技术的联合疫苗为：包括由肺炎球菌荚膜糖4、6B、9V、14、18C、19F及23F与肺炎球菌蛋白ΔA146Ply结合物组成的肺炎球菌疫苗；及百白破疫苗包括无细胞百日咳疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺炎球菌‑百白破联合疫苗，其特征在于，联合疫苗包括肺炎球菌疫苗和百白破疫苗，具体为：a.肺炎球菌疫苗为肺炎球菌荚膜糖与肺炎球菌蛋白结合物；b.百白破疫苗包括无细胞百日咳疫苗、白喉类疫苗和破伤风类疫苗；其中：肺炎球菌蛋白为肺炎球菌表达的高保守性并具有免疫原性的蛋白，与具有免疫原性的肺炎球菌荚膜糖自发缀合；无细胞百日咳疫苗为百日咳疫苗原液、白喉类疫苗为白喉类毒素和破伤风类疫苗为破伤风类毒素，且百白破疫苗为悬混液。

【技术特征摘要】
1.一种肺炎球菌-百白破联合疫苗，其特征在于，联合疫苗包括肺炎球菌疫苗和百白破疫苗，具体为：a.肺炎球菌疫苗为肺炎球菌荚膜糖与肺炎球菌蛋白结合物；b.百白破疫苗包括无细胞百日咳疫苗、白喉类疫苗和破伤风类疫苗；其中：肺炎球菌蛋白为肺炎球菌表达的高保守性并具有免疫原性的蛋白，与具有免疫原性的肺炎球菌荚膜糖自发缀合；无细胞百日咳疫苗为百日咳疫苗原液、白喉类疫苗为白喉类毒素和破伤风类疫苗为破伤风类毒素，且百白破疫苗为悬混液。2.根据权利要求1所述的肺炎球菌-百白破联合疫苗，其特征在于，肺炎球菌荚膜糖的血清型中包括：1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19F、19A、20、22F、23F和/或33F。3.根据权利要求1所述的肺炎球菌-百白破联合疫苗，其特征在于：肺炎球菌荚膜糖与肺炎球菌蛋白的每种血清型与蛋白之间的质量比为1.5～4.5:1。4.根据权利要求3所述的肺炎球菌-百白破联合疫苗，其特征在于，肺炎球菌蛋白包括：肺炎球菌溶血蛋白及其改性衍生物、肺炎球菌表面蛋白及其改性衍生物、肺炎球具表面黏附蛋白及其改性衍生物、肺炎球菌三组氨酸蛋白家族及其改性衍生物和/或肺炎球菌黏附毒力因子。5.根据权利要求4所述的肺炎...

【专利技术属性】
技术研发人员：史晋，艾智武，张凡，陈煜，
申请(专利权)人：武汉博沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42