基于呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的突变体、核酸分子、重组表达载体以及药物组合物制造技术

本申请公开了一种基于呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的突变体、核酸分子、重组表达载体以及药物组合物，所述突变体是由呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的全长或部分区域发生突变获得，所述突变包括一个或多个点突变，当所述突变包括一个点突变时，所述一个点突变发生于所述呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的弗林蛋白酶切割位点，当所述突变包括多个点突变时，所述多个点突变中的至少一个点突变发生于所述呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的弗林蛋白酶切割位点，具有免疫效果理想的优点。有免疫效果理想的优点。有免疫效果理想的优点。

【技术实现步骤摘要】
基于呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的突变体、核酸分子、重组表达载体以及药物组合物


[0001]本申请涉及生物制药领域，具体涉及一种基于呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的突变体、核酸分子、重组表达载体以及药物组合物。

技术介绍

[0002]人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,RSV)属于副黏病毒科的肺病毒属(Pneumovirus)，主要引起6个月以下婴儿患细支气管炎和肺炎等下呼吸道感染疾病，并会引起较大儿童和成人患鼻炎、感冒等上呼吸道感染疾病。RSV的形态为球形，具有包膜，直径约为120nm至300nm。RSV的基因组为单股负链RNA，主要编码10种蛋白质，即为融合糖蛋白F、黏附糖蛋白G、小疏水蛋白SH、M1基质蛋白、M2基质蛋白、N蛋白、P蛋白、L蛋白、NS1非结构蛋白和NS2非结构蛋白。融合糖蛋白F(Fusion glycoprotein,F)是激发机体产生保护性抗体的主要病毒抗原之一。
[0003]RSV是引起婴幼儿下呼吸道感染的重要病毒病原，绝大多数的婴幼儿在2岁以内感染过RSV至少一次。对于1岁以内的婴幼儿，RSV感染引起的死亡人数占总死亡人数的6.7％，仅次于疟疾。对于5岁以内的婴幼儿，RSV感染引起的死亡人数占总死亡人数的6.29％，仅次于肺炎球菌。在我国，26.5％的婴幼儿急性呼吸道感染是因RSV感染引起，老人和存在免疫缺陷的病人也易遭受RSV引起的严重感染，且有RSV感染史的人易出现肺功能异常、支气管哮喘等肺部疾病。
[0004]RSV疫苗是预防RSV感染的有效措施之一，RSV疫苗被列为二十一世纪应优先发展的疫苗之一，但目前尚无安全有效的RSV疫苗问世。目前，RSV疫苗的研发主要基于融合糖蛋白F，存在诱发机体产生中和抗体水平较低的问题。因此，有必要提供一种新型的免疫原以提高诱发机体产生中和抗体的水平，对RSV疫苗的应用与发展具有重要意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足之处，本申请提供了一种基于呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的突变体、核酸分子、重组表达载体以及药物组合物。
[0006]本申请的技术方案如下：
[0007]第一方面，本申请提供了一种基于呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的突变体，所述突变体是由呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的全长或部分区域发生突变获得，所述突变包括一个或多个点突变；
[0008]其中，当所述突变包括一个点突变时，所述一个点突变发生于所述呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的弗林蛋白酶切割位点；
[0009]当所述突变包括多个点突变时，所述多个点突变中的至少一个点突变发生于所述呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的弗林蛋白酶切割位点。
[0010]可选地，所述呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示
的氨基酸序列，或者包括与SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％相似性的氨基酸序列。
[0011]可选地，所述突变包括呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的全长或部分区域的至少一个弗林蛋白酶切割位点RRXR突变为GSAS，其中，X为任意氨基酸。
[0012]第二方面，本申请提供了一种核酸分子，所述核酸分子包括：
[0013]第一核苷酸序列，用于编码呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的全长或部分区域的氨基酸序列；和/或
[0014]第二核苷酸序列，用于编码如第一方面中任意一种所述的突变体的氨基酸序列。
[0015]可选地，所述核酸分子还包括下述核苷酸序列中的一种或多种：
[0016](a)第三核苷酸序列，用于编码信号肽的氨基酸序列；
[0017](b)第四核苷酸序列，用于编码T4纤维蛋白三聚体的氨基酸序列；
[0018](c)第五核苷酸序列，用于编码SARS
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CoV
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2跨膜区的氨基酸序列；
[0019](d)第六核苷酸序列，用于表征嵌合内含子；
[0020](e)第七核苷酸序列，用于表征土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件。
[0021]可选地，所述第一核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，或者所述第一核苷酸序列为与SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列；
[0022]和/或，所述第二核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，或者所述第二核苷酸序列为与SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列；
[0023]和/或，所述第三核苷酸序列如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6所示，或者所述第三核苷酸序列为与SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列，或者所述第三核苷酸序列为与SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列；
[0024]和/或，所述第四核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，或者所述第四核苷酸序列为与SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列；
[0025]和/或，所述第五核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示，或者所述第五核苷酸序列为与SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列；
[0026]和/或，所述第六核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示，或者所述第六核苷酸序列为与SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列；
[0027]和/或，所述第七核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示，或者所述第七核苷酸序列为与SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列。
[0028]可选地，所述核酸分子包括依序串联的第六核苷酸序列、第三核苷酸序列、第一核苷酸序列、第四核苷酸序列和第七核苷酸序列，其中，所述第三核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；
[0029]或者，所述核酸分子包括依序串联的第六核苷酸序列、第三核苷酸序列、第二核苷酸序列、第五核苷酸序列和第七核苷酸序列，其中，所述第三核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。
[0030]第三方面，本申请提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体包括载体，以及装载于载体上的如第二方面中任意一种所述的核酸分子。
[0031]可选地，所述载体为腺病毒、安卡拉牛痘病毒或水泡性口炎病毒；
[0032]优选地，所述载体为基因组中缺失E1编码区和E3编码区的AdC68型黑猩猩腺病毒；
[0033]更优选地，所述载体为基因组中缺失E1编码区和E3编码区并且将E4
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orf6区域替换为人Ad5型腺病毒的E4
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orf6区域的AdC68型黑猩猩腺病毒。
[0034]第四方面，本申请提供了一种重组病毒，所述重组病毒是将如第三方面中任意一种所述的重组表达载体转染病毒包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的突变体，其特征在于，所述突变体是由呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的全长或部分区域发生突变获得，所述突变包括一个或多个点突变；其中，当所述突变包括一个点突变时，所述一个点突变发生于所述呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的弗林蛋白酶切割位点；当所述突变包括多个点突变时，所述多个点突变中的至少一个点突变发生于所述呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的弗林蛋白酶切割位点。2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变包括呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的全长或部分区域的至少一个弗林蛋白酶切割位点RRXR突变为GSAS，其中，X为任意氨基酸。3.根据权利要求2所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％相似性的氨基酸序列。4.一种核酸分子，其特征在于，包括：第一核苷酸序列，用于编码呼吸道合胞病毒融合前F蛋白的全长或部分区域的氨基酸序列；和/或第二核苷酸序列，用于编码如权利要求1至3任一项中所述的突变体的氨基酸序列。5.根据权利要求4所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子还包括下述核苷酸序列中的一种或多种：(a)第三核苷酸序列，用于编码信号肽的氨基酸序列；(b)第四核苷酸序列，用于编码T4纤维蛋白三聚体的氨基酸序列；(c)第五核苷酸序列，用于编码SARS
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CoV
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2跨膜区的氨基酸序列；(d)第六核苷酸序列，用于表征嵌合内含子；(e)第七核苷酸序列，用于表征土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件。6.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，所述第一核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，或者所述第一核苷酸序列为与SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列；和/或所述第二核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，或者所述第二核苷酸序列为与SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列；和/或所述第三核苷酸序列如SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6所示，或者所述第三核苷酸序列为与SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列，或者所述第三核苷酸序列为与SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列至少具有80％相似性的核苷酸序列；和...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢亮，柯美强，纪敏，慕婷，吴月，王申，吴克，马涛，
申请(专利权)人：武汉博沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：