金黄色葡萄球菌富含Ser-Asp的纤维蛋白原/骨涎蛋白结合蛋白含有三个CnaB结构域，并且这些中的第三个提供针对金黄色葡萄球菌感染的显著保护。因此，有用的金黄色葡萄球菌疫苗可包括SdrE CnaB结构域。此外，已显示SdrE蛋白对于胰蛋白酶消化相对耐受，这可以与SdrE在第三CnaB结构域内含有异肽键的观察联系起来。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】金黄色葡萄球菌SDRECNAB结构域及其用于接种的用途 本申请要求2012年10月29日提交的UK临时申请1219420. 5的权益，其所有的 完整内容出于所有目的由此通过引用并入本文。
本专利技术涉及金黄色葡萄球菌免疫原的领域。
技术介绍
针对金黄色葡萄球菌的各种疫苗目前正在研宄，例如，参见参考文献1。如参考文 献2中公开的一种方法使用含有CnaB结构域的多肽。该结构域首次在金黄色葡萄球菌胶 原结合表面蛋白中被描述为不介导胶原结合的区域。参考文献2中的图28显示，来自金黄 色葡萄球菌SdrD蛋白的CnaB结构域在小鼠模型中赋予针对菌株USA300感染的保护。 本专利技术的一个目标是提供用于引发针对金黄色葡萄球菌的免疫应答的进一步且 改进的免疫原。
技术实现思路
参考文献2将金黄色葡萄球菌的SdrD蛋白鉴定为含有CnaB结构域。本专利技术人已 发现，金黄色葡萄球菌富含Ser-Asp的纤维蛋白原/骨涎蛋白结合蛋白（SdrE)含有三个 CnaB结构域（' CnaBEl'、' CnaBE2'和' CnaBE3'），并且这些结构域中的第三个提供针对金黄 色葡萄球菌感染的显著保护，如肾脓肿形成的减少所表明。此外，本专利技术人已显示甚至针对 不表达SdrE的菌株的交叉保护。此外，已显示SdrE蛋白对于胰蛋白酶消化相对耐受，这可 以与SdrE在其第三CnaB结构域内（即CnaBE3内）含有异肽键的观察联系起来。 在第一个方面，本专利技术提供包含SdrE CnaBE3结构域的多肽，其中所述多肽不包含 全长SdrE蛋白。 在第二个方面，本专利技术提供包含SdrE CnaBE3结构域的多肽，其中所述多肽具有少 于500个氨基酸。 在第三个方面，本专利技术提供包含金黄色葡萄球菌SdrE蛋白的片段的多肽，其中： (a)所述片段包括SdrE CnaBE3结构域；且（b)所述多肽不包含全长SdrE蛋白。 在第四个方面，本专利技术提供包含金黄色葡萄球菌CnaB结构域的多肽，其中所述 CnaB结构域包括异肽键。所述CnaB结构域优选为CnaBE3。 在第五个方面，本专利技术提供包含突变体金黄色葡萄球菌SdrE CnaBE3结构域的多 肽，其中，在其中天然金黄色葡萄球菌SdrE CnaBE3结构域具有天冬酰胺残基的一个或多个 氨基酸位置，突变体具有（i)氨基酸缺失或（ii)氨基酸取代。 类似地，本专利技术提供包含突变体金黄色葡萄球菌SdrE CnaBE3结构域的多肽，其 中，在其中天然金黄色葡萄球菌SdrE CnaBE3结构域具有天冬氨酸残基的一个或多个氨基 酸位置，突变体具有（i)氨基酸缺失或（ii)氨基酸取代。 类似地，本专利技术提供包含突变体金黄色葡萄球菌SdrE CnaBE3结构域的多肽，其 中，在其中天然金黄色葡萄球菌SdrE CnaBE3结构域具有赖氨酸残基的一个或多个氨基酸 位置，突变体具有（i)氨基酸缺失或（ii)氨基酸取代。 在第六个方面，本专利技术提供包含至少两个CnaB结构域的多肽，其中：(a) CnaB结构 域中的至少一个是CnaBE3结构域且至少一个CnaB结构域不是SdrE CnaB结构域；或（b) 所述多肽包含至少两个CnaBE3结构域。此类多肽可包含如参考文献2 (例如，参见其中第 9-13页）中公开的氨基酸序列A (LB)n，条件是至少一个A和/或B是CnaBE3结构域。 本专利技术的这些多肽可用作用于引起免疫应答例如以保护免于金黄色葡萄球菌感 染的免疫原性组合物的组分。 SdrE 金黄色葡萄球菌SdrE蛋白是富含Ser-Asp的纤维蛋白原/骨涎蛋白结合蛋白，如参 考文献3-8中更详细地讨论。在金黄色葡萄球菌细菌中，其被锚定在细胞壁中。在Newman NWMN_0525菌株中，其氨基酸序列是SEQ ID N0:1 : 来自许多更多菌株的SdrE序列是本领域已知的。在申请时搜索 NCBI多肽序列数据库中的金黄色葡萄球菌SdrE序列揭示73次命中，并且使 用SEQ ID NO: 1的BLINK搜索给出至少以下菌株的SdrE序列：COL (序列登录号 BLINK命中具有1131-1166个氨基酸，其中该长度变异的大部分源自Ser-Asp重复 的长度差异。除了该变异和5聚体PSTSE序列（SEQ ID N0:44)的存在或不存在以外，该序 列另外在许多菌株之间是非常高度保守的。因此，新生序列通常可以如下代表： |SEQ ID ND; 21-Xs-ISEQIDNO; 3|-X'-[SEQ ID NO:4J (式 ） 其中： SEQ ID N0:2 为：X1是任选的PSTSE序列（SEQ ID NO: 44)，且 X2是20-250个氨基酸长且或者是（i) SD的多个重复或（ii) SD和AD序列两者的混 合物。 因此，SEQ ID NO: 1是式'A'的实例，其中X1存在且X 2是SD的83个重复。 本专利技术可以使用任何这些已知的SdrE序列。通常，本专利技术使用的SdrE将包含与 SEQ ID NO: 3具有至少90%同一性（例如，之91%同一性，之92%同一性，之93%同一性，之94% 同一性，295%同一性，296%同一性，297%同一性，298%同一性，299%同一性，或100%同一 性）的序列，并且，当施用于人或小鼠时，将引发抗体，所述抗体识别作为SEQ ID N0:1表达 的野生型金黄色葡萄球菌蛋白。 当本专利技术的一个实施方案利用金黄色葡萄球菌SdrE蛋白的片段时，该片段将通 常是与SEQ ID N0:3具有至少90%同一性（例如，之91%同一性，之92%同一性，之93%同一性， >94%同一性，295%同一性，》96%同一性，297%同一性，》98%同一性，299%同一性，或100% 同一性）的序列的片段。包含所述片段的多肽，当施用于人或小鼠时，将引发抗体，所述抗 体识别作为SEQ ID NO: 1表达的野生型金黄色葡萄球菌蛋白。 金黄色葡萄球菌SdrE的一种有用片段包括CnaBE3结构域（参见下文），但包括少 于20个Ser-Asp重复。 当本专利技术的一个实施方案不利用全长SdrE蛋白时，它不利用具有式'A'的蛋白。 此外，本专利技术的多肽通常将不包含式'B'的氨基酸序列，其中式'B'为：SEQ ID N0:3 为：X1是任选的PSTSE序列（SEQ ID NO:44)(优选存在），且 X2是20-250个氨基酸长且或者是（i) SD的多个重复或（ii) SD和AD序列两者的混 合物（且其中优选的X2是由SD的83个重复组成的166聚体（mer))。 因此，式'B'的优选实例是SEQ ID NO:7,1076聚体：所以，本专利技术的多肽通常将不包含SEQ ID N0:7。 CnaB 结构域 CnaB结构域是公认的具有希腊钥匙拓扑学的两个折叠（sheets)中七股的前白蛋白 样夹心折叠的蛋白结构。SCOP数据库包括"Cna蛋白B型结构域"作为家族 (49479)和超家族（49478)两者。在Pfam数据库中，CnaB结构域是条目PF05738。 尽管CnaB结构域基于二级蛋白结构定义，但该结构源于容易分析的氨基酸模式，并且一个 CnaB结构域的存在可以仅仅基于氨基酸序列相对容易地预测，并且它们通过保守结构域搜 索例如使用CD本文档来自技高网...
【技术保护点】
包含SdrE CnaBE3结构域的多肽，其中所述多肽不包含(i)全长SdrE蛋白或(ii)式‘B’的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：AGO马内蒂，L菲亚希，M贝切雷利，P朴拉琪，M比亚吉尼，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE
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