抗金黄色葡萄球菌LUKGH(LUKAB)毒素的抗体和抗体序列制造技术

本发明专利技术提供了一种抗体，包括至少一个特异性结合至LukGH复合物的结合位点，该抗体包括至少一抗体重链可变区(VH)，其包括列于表1的CDR1至CDR3序列中的任何序列，或它的功能活性CDR变体。

Antibody and antibody sequence against Staphylococcus aureus LUKGH (LUKAB) toxin

The present invention provides an antibody binding site includes at least one specific binding to the LukGH complex, the antibody comprises at least one heavy chain variable region (VH), which are listed in table CDR1 to any sequence of 1 CDR3 sequences in the functional activity of CDR or its variants.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及抗金黄色葡萄球菌细胞毒素LukGH(也称为LukAB)的抗体，其特点是具有特定的氨基酸序列。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(S.aureus)是最重要的人类病原体之一，引发人类从无症状定植和轻度皮肤感染到严重的深度组织感染、肺炎、血液感染和败血症(sepsis)等范围广泛的各种感染。这种病原体利用多种致病机制引发疾病和干扰宿主防御。它最有效的毒力因子之一是专门杀死白细胞特别是吞噬细胞的杀白细胞素。LukGH(也称为LukAB)是最近被鉴定出来的杀白细胞素，其能够溶解多形核细胞(PMN)、单核细胞和树突状细胞(Dumont et al,2011,Feb；79(3):814-25；Ventura et al.PLoS One.2010Jul 16；5(7):e11634)，及还可以激活它们，产生促炎细胞因子。LukGH是一种类似于HlgAB、HlgCB、LukED和LukSF(PVL)的双组分溶细胞素。LukH(S-组分)和LukG(F-组分)分别与上文提到的双组分杀白细胞素的S组分和F组分具有大约30％和40％的氨基酸同源性。LukGH是最多变的双组分金黄色葡萄球菌毒素。虽然LukSF、LukED和HlgABC在不同的金黄色葡萄球菌菌株中高度保守，但是，LukGH具有高达14％的氨基酸变化。这种氨基酸差异水平几乎接近在两种不同毒素(如HlgC相对于LukS或LukS相对于HlgAC或LukE)之间观察到的水平(～16％差异性)。关于LukGH的作用的数据很少，而且数据都是采用彼此几乎相同的来自Newman菌株和LAC菌株(USA300)的两个序列得到的。人们不知道其它变体对人体细胞是否有活性，特别是来自两种金黄色葡萄球菌基因组的两个序列，即MRSA252(EMR SA16)和MSHR1132(“银”金黄色葡萄球菌)，它们被认为与USA300和其它金黄色葡萄球菌克隆复合物是最不相同。根据金黄色葡萄球菌培养上清液的PMN溶解活性，LukGH似乎是人类天生细胞最有效的白细胞毒素之一(Dumont et al,Infect Immun.2013May；81(5):1830-41；Malachowa et al.J Infect Dis.2012Oct；206(8):1185-93)。因此，有理由认为，在金黄色葡萄球菌疾病期间，通过中和抗体抑制LukGH的毒素作用具有积极的效果，并且通过减少迁移到感染部位的吞噬细胞支持宿主防御。我们的目的是利用能中和LukGH毒素的单克隆抗体，开发出预防和治疗人类金黄色葡萄球菌感染的人类治疗剂。根据文献，双组分杀白细胞素中的S组分识别细胞表面受体，及这种相互作用诱导构象变化，导致F组分结合和LukSF和HlgAB的八聚体跨膜孔隙结构的形成(Colin,Infect Immun,1994:3184；Meunier,Biochim Biophys Acta,1997:275)。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抗金黄色葡萄球菌细胞毒素LukGH(也称为LukAB)的抗体，这种抗体与这种毒素的不同变体可交叉反应，并提供交叉中和效力。特别地，本专利技术目的指的是，与特异性结合单独的LukG或LukH抗原但结合LukGH复合物程度较低的抗体相比，对体外的LukGH具有高的中和效力和改进的保护的抗体。本专利技术的目的通过本专利技术的主题达到。本专利技术提供类了一种包括至少一个结合位点(特别是结合至LukGH复合物)的抗体，该抗体包括至少一抗体重链可变区(VH)，其包括列于表1的任何CDR1至CDR3序列，或它们的功能活性CDR变体。具体地，抗体是单克隆抗体。具体地，抗体选自由组员i)至viii)组成的组，其中i)A)是一抗体，其包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 2或SEQ ID 15的氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 4的氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由SEQ ID 6的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 2或SEQ ID 15的氨基酸序列组成；和/或b)亲本CDR2，由SEQ ID 4的氨基酸序列组成；和/或c)亲本CDR3，由SEQ ID 6的氨基酸序列组成；ii)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 26、SEQ ID 36或SEQ ID 38中的任何氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 28、SEQ ID 37、SEQ ID 39或SEQ ID 40中的任何氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由氨基酸序列SEQ ID 30组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 26、SEQ ID 36或SEQ ID 38中的任何氨基酸序列组成；和/或b)亲本CDR2，由SEQ ID 28、SEQ ID 37、SEQ ID 39或SEQ ID 40种的任何氨基酸序列组成；和/或c)亲本CDR3，由SEQ ID 30的氨基酸序列组成；iii)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 47、SEQ ID 55、SEQ ID 57、SEQ ID 59、SEQ ID 61、SEQ ID 63或SEQ ID 64中的任何氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 49、SEQ ID 56、SEQ ID 58、SEQ ID 60、SEQ ID 62、SEQ ID 65或SEQ ID 66中的任何氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由SEQ ID 51的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 47、SEQ ID 55、SEQ ID 57、SEQ ID 59、SEQ ID 61、SEQ ID 63或SEQ ID 64中的任何氨基酸序列组成；和/或b)亲本CDR2，由SEQ ID 49、SEQ ID 56、SEQ ID 58、SEQ ID 60、SEQ ID 62、SEQ ID 65或SEQ ID 66中的任何氨基酸序列组成；和/或c)亲本CDR3，由SEQ ID 51的氨基酸序列组成；iv)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 71、SEQ ID 77、SEQ ID 79、SEQ ID 81、SEQ ID 83或SEQ ID 85中的任何氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 72、SEQ ID 78、SEQ ID 84或SEQ ID 4中的任何氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由SEQ ID 73的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 71、SEQ ID 77、SEQ ID 79、SEQ ID 81、SEQ ID 83或SEQ ID 85中的任何氨基酸序列组成；和/或b)亲本CDR2，由SEQ ID 72、SEQ ID 78、SEQ ID 84或SEQ ID 4中的任何氨基酸序列组成；和/或c)亲本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体，包括至少一个特异性结合至LukGH复合物的结合位点，该抗体包括至少一个抗体重链可变区(VH)，其包括列于表1的CDR1至CDR3序列中的任何序列，或它的功能活性CDR变体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.19 EP 13198484.11.一种抗体，包括至少一个特异性结合至LukGH复合物的结合位点，该抗体包括至少一个抗体重链可变区(VH)，其包括列于表1的CDR1至CDR3序列中的任何序列，或它的功能活性CDR变体。2.根据权利要求1所述的抗体，其选自由组员i)至viii)组成的组，其中i)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 2或SEQ ID 15的氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 4的氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由SEQ ID 6的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 2或SEQ ID 15的氨基酸序列组成；或b)亲本CDR2，由SEQ ID 4的氨基酸序列组成；或c)亲本CDR3，由SEQ ID 6的氨基酸序列组成；ii)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 26、SEQ ID 36或SEQ ID 38中的任何氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 28、SEQ ID 37、SEQ ID 39或SEQ ID 40中的任何氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由氨基酸序列SEQ ID 30组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 26、SEQ ID 36或SEQ ID 38中的任何氨基酸序列组成；或b)亲本CDR2，由SEQ ID 28、SEQ ID 37、SEQ ID 39或SEQ ID 40中的任何氨基酸序列组成；或c)亲本CDR3，由SEQ ID 30的氨基酸序列组成；iii)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 47、SEQ ID 55、SEQ ID 57、SEQ ID 59、SEQ ID 61、SEQ ID 63或SEQ ID 64中的任何氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 49、SEQ ID 56、SEQ ID 58、SEQ ID 60、SEQ ID 62、SEQ ID 65或SEQ ID 66中的任何氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由SEQ ID 51的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 47、SEQ ID 55、SEQ ID 57、SEQ ID 59、SEQ ID 61、SEQ ID 63或SEQ ID 64中的任何氨基酸序列组成；或b)亲本CDR2，由SEQ ID 49、SEQ ID 56、SEQ ID 58、SEQ ID 60、SEQ ID 62、SEQ ID 65或SEQ ID 66中的任何氨基酸序列组成；或c)亲本CDR3，由SEQ ID 51的氨基酸序列组成；iv)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 71、SEQ ID 77、SEQ ID 79、SEQ ID 81、SEQ ID 83或SEQ ID 85中的任何氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 72、SEQ ID 78、SEQ ID 84或SEQ ID 4中的任何氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由SEQ ID 73的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 71、SEQ ID 77、SEQ ID 79、SEQ ID 81、SEQ ID 83或SEQ ID 85中的任何氨基酸序列组成；或b)亲本CDR2，由SEQ ID 72、SEQ ID 78、SEQ ID 84或SEQ ID 4中的任何氨基酸序列组成；或c)亲本CDR3，由SEQ ID 73的氨基酸序列组成；v)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 87、SEQ ID 97、SEQ ID 99或SEQ ID 101中的任何氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 88、SEQ ID 98、SEQ ID 100或SEQ ID 102中的任何氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由SEQ ID 89的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下结构的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 87、SEQ ID 97、SEQ ID 99或SEQ ID 101中的任何氨基酸序列组成；或b)亲本CDR2，由SEQ ID 88、SEQ ID 98、SEQ ID 100或SEQ ID 102中的任何氨基酸序列组成；或c)亲本CDR3，由SEQ ID 89的氨基酸序列组成；vi)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 104、SEQ ID 110、SEQ ID 112、SEQ ID 38、SEQ ID 114、SEQ ID 119或SEQ ID 120中的任何氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 105、SEQ ID 109、SEQ ID 111、SEQ ID 113、SEQ ID 102、SEQ ID 115或SEQ ID 121中的任何氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由SEQ ID 106的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 104、SEQ ID 110、SEQ ID 112、SEQ ID 38、SEQ ID 114、SEQ ID 119或SEQ ID 120的氨基酸序列组成；或b)亲本CDR2，由SEQ ID 105、SEQ ID 109、SEQ ID 111、SEQ ID 113、SEQ ID 102、SEQ ID 115或SEQ ID 121的氨基酸序列组成；或c)亲本CDR3，由SEQ ID 106的氨基酸序列组成；vii)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 125的氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 126的氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由SEQ ID 127的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 125的氨基酸序列组成；或b)亲本CDR2，由SEQ ID 126的氨基酸序列组成；或c)亲本CDR3，由SEQ ID 127的氨基酸序列组成；及viii)A)是一抗体，包括a)一CDR1，包括或由SEQ ID 134的氨基酸序列组成；及b)一CDR2，包括或由SEQ ID 135的氨基酸序列组成；及c)一CDR3，包括或由SEQ ID 137的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR1，由SEQ ID 134的氨基酸序列组成；或b)亲本CDR2，由SEQ ID 135的氨基酸序列组成；或c)亲本CDR3，由SEQ ID 137的氨基酸序列组成；其中任何功能活性CDR变体包括至少一个位于亲本CDR序列的点突变，和包括或由与亲本CDR序列具有至少60％的序列一致性的氨基酸序列组成。3.根据权利要求2所述的抗体，其是组员iv)的抗体或它的功能活性变体，其中a)在VH CDR1的7位，氨基酸残基选自S、A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、T、V、W和Y，优选是E、F、H、I、K、L、M、R、V、W或Y中的任何一个，及更优选的是E、F、M、W或Y中的任何一个；b)在VH CDR2的1位，氨基酸残基选自N、A、D、E、F、H、L、S、T、V和Y，优选是F、H或Y中的任何一个；c)在VH CDR2的3位，氨基酸残基选自Y、H、T和W；d)在VH CDR2的5位，氨基酸残基选自S、A、E、F、H、I、K、L、M、N、Q、R、T、V、W和Y，优选是N、R或W中的任何一个，及更优选的是N或W；e)在VH CDR2的7位，氨基酸残基选自S、D、F、H、K、L、M、N、R和W；f)在VH CDR2的9位，氨基酸残基选自Y、D、E、F、N、S和W，优选是D或H，及更优选的是H；g)在VH CDR3的4位，氨基酸残基选自R、A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、S、T、V和W，优选是D或H；h)在VH CDR3的5位，氨基酸残基选自G、A、F和Y；i)在VH CDR3的6位，氨基酸残基选自M、E、F、H和Q，优选是F或H；和/或j)在VH CDR3的7位，氨基酸残基选自H、A、D、E、F、G、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、W和Y，优选是E、K、Q、R、W或Y中的任何一个，及更优选的是W或Y。4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中，功能活性CDR变体包括以下的至少一个a)1、2或3个点突变，该点突变在亲本CDR序列上；或b)1或2个点突变，该点突变在亲本CDR序列的4个C-端或4个N-端或4个中心氨基酸位置上的任一处。5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其选自由以下组成的组：a)一抗体，包括a.SEQ ID 38的CDR1序列；及b.SEQ ID 39的CDR2序列；及c.SEQ ID 30的CDR3序列；b)一抗体，包括a.SEQ ID 47的CDR1序列；及b.SEQ ID 49的CDR2序列；及c.SEQ ID 51的CDR3序列；c)一抗体，包括a.SEQ ID 83的CDR1序列；及b.SEQ ID 84的CDR2序列；及c.SEQ ID 73的CDR3序列；d)一抗体，包括a.SEQ ID 104的CDR1序列；及b.SEQ ID 105的CDR2序列；及c.SEQ ID 106的CDR3序列；和e)一抗体，包括a.SEQ ID 114的CDR1序列；及b.SEQ ID 115的CDR2序列；及c.SEQ ID 106的CDR3序列。6.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，包括a)一VH氨基酸序列，选自如图2中所描述的任何VH序列；b)一抗体重链(HC)氨基酸序列，选自由SEQ ID 147、SEQ ID 149、SEQ ID 151、SEQ ID 153、SEQ ID 155、SEQ ID 157、SEQ ID 159、SEQ ID 161、SEQ ID 163、SEQ ID 165、SEQ ID 167、SEQ ID 169和SEQ ID 171组成的组；c)一抗体重链(HC)氨基酸序列，选自由SEQ ID 147、SEQ ID 149、SEQ ID 151、SEQ ID 153、SEQ ID 155、SEQ ID 157、SEQ ID 159、SEQ ID 161、SEQ ID 163、SEQ ID 165、SEQ ID 167、SEQ ID 169和SEQ ID 171组成的组，进一步包括C-端氨基酸的删除和/或Q1E点突变，如果VH序列的第一氨基酸是Q。7.根据权利要求1-6中任一项所述的抗体，该抗体进一步包括抗体轻链可变区(VL)，其包括列于表1中的CDR4至CDR6序列中的任何一个序列或它的功能活性CDR变体。8.根据权利要求7所述的抗体，其选自由组员i)至viii)组成的组，其中i)A)是一抗体，包括a)一CDR4，包括或由SEQ ID 9或SEQ ID 19的氨基酸序列组成；及b)一CDR5，包括或由SEQ ID 11、SEQ ID 16或SEQ ID 21中的任何氨基酸序列组成；及c)一CDR6，包括或由SEQ ID 13、SEQ ID 17、SEQ ID 23或SEQ ID 24中的任何氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR4，由SEQ ID 9或SEQ ID 19的氨基酸序列组成；或b)亲本CDR5，由SEQ ID 11、SEQ ID 16或SEQ ID 21中的任何氨基酸序列组成；或c)亲本CDR6，由SEQ ID 13、SEQ ID 17、SEQ ID 23或SEQ ID 24中的任何氨基酸序列组成；ii)A)是一抗体，包括a)一CDR4，包括或由SEQ ID 32的氨基酸序列组成；及b)一CDR5，包括或由SEQ ID 33或SEQ ID 41的氨基酸序列组成；及c)一CDR6，包括或由SEQ ID 35、SEQ ID 42、SEQ ID 43或SEQ ID 45中的任何氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR4，由SEQ ID 32的氨基酸序列组成；或b)亲本CDR5，由SEQ ID 33或SEQ ID 41的氨基酸序列组成；或c)亲本CDR6，由SEQ ID 35、SEQ ID 42、SEQ ID 43或SEQ ID 45中的任何氨基酸序列组成；iii)A)是一抗体，包括a)一CDR4，包括或由SEQ ID 53、SEQ ID 67或SEQ ID 19中的任何氨基酸序列组成；及b)一CDR5，包括或由SEQ ID 21的氨基酸序列组成；及c)一CDR6，包括或由SEQ ID 54、SEQ ID 68、SEQ ID 69或SEQ ID 70中的任何氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR4，由SEQ ID 53、SEQ ID 67或SEQ ID 19中的任何氨基酸序列组成；或b)亲本CDR5，由SEQ ID 21的氨基酸序列组成；或c)亲本CDR6，由SEQ ID 54、SEQ ID 68、SEQ ID 69和/或SEQ ID 70中的任何氨基酸序列组成；iv)A)是一抗体，包括a)一CDR4，包括或由SEQ ID 75或SEQ ID 32的氨基酸序列组成；及b)一CDR5，包括或由SEQ ID 41的氨基酸序列组成；及c)一CDR6，包括或由SEQ ID 76或SEQ ID 86的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR4，由SEQ ID 75或SEQ ID 32的氨基酸序列组成；或b)亲本CDR5，由SEQ ID 41的氨基酸序列组成；或c)亲本CDR6，由SEQ ID 76或SEQ ID 86的氨基酸序列组成；v)A)是一抗体，包括a)一CDR4，包括或由SEQ ID 92的氨基酸序列组成；及b)一CDR5，包括或由SEQ ID 94的任何氨基酸序列组成；及c)一CDR6，包括或由SEQ ID 96或SEQ ID 103的氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR4，由SEQ ID 92的氨基酸序列组成；或b)亲本CDR5，由SEQ ID 94的氨基酸序列组成；或c)亲本CDR6，由SEQ ID 96或SEQ ID 103的氨基酸序列组成；vi)A)是一抗体，包括a)一CDR4，包括或由SEQ ID 92或SEQ ID 116的氨基酸序列组成；及b)一CDR5，包括或由SEQ ID 94或SEQ ID 117的氨基酸序列组成；及c)一CDR6，包括或由SEQ ID 108、SEQ ID 118或SEQ ID 123中的任何氨基酸序列组成；或B)是一抗体，其是抗体A的功能活性变体，包括至少一种以下构造的功能活性CDR变体a)亲本CDR4，由SEQ ID 92或SEQ ID 116的氨基酸序列组成；或b)亲本CDR5，由SEQ ID 94或SEQ ID 117的氨基酸序列组成；或c)亲本CDR6，由SEQ ID 108、SEQ ID 118或SEQ ID 123中的任何氨基酸序列组成；vii)A)是一抗体，包括a)一CDR4，包括或由SEQ ID 32的氨基酸序列组成；及b)一CDR5，包括或由SEQ ID 41的氨基酸序列组成；及c)一CDR6，包括或由SEQ ID 129、SEQ ID 130、SEQ ID 131或SEQ ID 13...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·纳吉，A·巴达罗，H·劳哈，I·米尔基娜，M·B·巴托斯，L·M·沃克，N·尼尔森，S·J·图沙尔，
申请(专利权)人：阿尔萨尼斯生物科学有限责任公司，
类型：发明
国别省市：奥地利;AT