一种Bt Cry毒素广谱检测用蛋白及其编码基因与应用制造技术

本发明专利技术提供一种Bt Cry毒素广谱检测用蛋白及其编码基因与应用，该蛋白DNA序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，本发明专利技术提供的蛋白与5种Bt Cry (Cry1Ab、Cry1Ab、Cry1B、Cry1B、Cry1F)毒素均具有较好结合活性，可用于小麦样品Bt毒素广谱性检测；本发明专利技术不经动物免疫而获得的Bt Cry毒素广谱检测用单域抗体蛋白，制备周期短，氨基酸序列小，适合体外大规模生产，对开发快速检测试剂盒具有重要的科学及现实意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程抗体和免疫学检测
，特别是一种人源化重链抗体基因改造的BtCry毒素广谱检测用蛋白及其编码基因与应用。
技术介绍
Bt Cry毒素是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)芽孢形成过程中产生的一类伴胞晶体蛋白(Insecticidal crystal protein，ICP)，对鞘翅目、双翅目、鳞翅目等常见的农、林害虫具有特异性毒杀作用。目前已被发现并鉴定的Bt Cry毒素种类已经超过50种，包括Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1C、Cry1D、Cry1E、Cry1F、Cry2Aa、Cry2Ab、Cry3A、Cry3A和Cry34/Cry35在内，多达十几种Bt Cry毒素已成功实现商业化开发并推广应用，其转基因农作物涵盖水稻、玉米、小麦、大豆、土豆、棉花、烟草等世界大宗农产品，产生了巨大的经济效益。中国是世界农产品生产和消费大国，转Bt Cry农作物或Bt Cry农作物产品在我国消费市场占有相当比重。然而，随着Bt Cry毒素制剂和转Bt Cry基因作物及其产品在世界范围内的推广应用，其暴露的生物安全问题本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Bt Cry毒素毒素广谱检测用蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种Bt Cry毒素毒素广谱检测用蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.如权利要求1所述蛋白的编码基因。3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。4.如权利要求1所述蛋白在粮食作物Bt Cry毒素广谱检测中的应用。5.含有如权利要求2或3所述编码基因的重组表达载体、转基因细胞系或重组工程菌。6.扩增如权利要求2或3所述编码基因的引物对。7.根据权利要求4所示的应用，其特征在于，具体检测步骤如下：（1）将粮食作物样品干燥后磨成粉，过100目筛，加入终浓度为0.10 mol /L碳酸盐缓冲液和终浓度为0.05 %的Tween-20，pH=9.6；室温振荡4h ，以10000 g 离心10 min，取上清液；（2）取50μl上清液，加入50μl浓度为100μg/ml氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白溶液，37 ℃孵育过夜，备用；（3）分别将浓度均为2.5μg/ml的Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1B、Cry1C、Cry1F包被到96 孔板中，100μl/孔，4℃包被过夜；次日取96孔板，每孔用250μl PBST溶液洗板3次，每孔加200μl 5 %的脱脂奶粉，37℃水浴锅中封闭反应1.5 h；取...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐重新，刘贤金，张霄，刘媛，胡晓丹，仲建锋，张存政，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32