脂质体A群链球菌疫苗制造技术

适合于预防、治疗或针对A群链球菌免疫的免疫原性剂，其包含展示在脂质囊泡上的免疫原性A群链球菌细菌蛋白、其片段、变体或衍生物和位于囊泡内空隙的诸如白喉类毒素的载体蛋白。所述细菌蛋白可为M蛋白片段，如J8肽和/或SpyCEP蛋白或其片段。免疫原性剂可适合于鼻内施用且能够引起粘膜免疫应答。免疫原性剂还可包含先天免疫激活剂，如海藻糖‑6,6′‑二山嵛酸酯(TDB)和/或诸如脱氧胆酸钠的胆盐。

Liposome group A streptococcal vaccine

Suitable for the prevention, treatment or for group A Streptococcus immunogenicity agent, comprising a carrier protein displayed in immune lipid vesicles on immunogenicity of group A streptococcus bacteria protein and its fragments, or variants of derivatives and in vesicles within the voids such as diphtheria toxoid. The bacterial protein may be a M protein fragment, such as a J8 peptide and / or a SpyCEP protein or fragment thereof. Immunogenic agents are suitable for intranasal administration and can induce mucosal immune responses. Immunogenic agent can also contain innate immune activator, such as trehalose 6,6 'second Yu ester (TDB) and / or bile salts such as sodium deoxycholate.

【技术实现步骤摘要】
专利
本专利技术涉及由A群链球菌细菌导致的或者与A群链球菌细菌有关的疾病和病症的预防和治疗。更具体地，本专利技术涉及通过诱导粘膜免疫应答来治疗或预防由A群链球菌细菌导致的疾病和病症的脂质体疫苗。专利技术背景A群链球菌(GAS)主要感染人类的上呼吸道(URT)粘膜以及皮肤，导致广泛的疾病。感染可以导致中毒性休克综合征、坏死性筋膜炎以及肌炎。坏死性筋膜炎的发病率为十万分之一，致死率高达70％(1)。链球菌感染后的疾病-风湿热(RF)和风湿性心脏病(RHD)也受到高度关注。据估计，每年有1.56千万RHD的流行病例以及约40万死亡病例(2)。URT定殖后最常见的疾病是咽炎，并且RF和RHD与未治疗的原发性咽部感染密切相关(3)。GAS感染和相关的疾病在热带地区、发展中国家以及发达国家的土著群体中流行，导致每年50万死亡病例(4)，这突出表明对疫苗的迫切需求。GAS疫苗候选物可以分为基于M蛋白和非M蛋白的疫苗(5)。细胞表面M蛋白是由3个主要结构域组成的卷曲螺旋蛋白，它是主要的毒力决定簇(6)。该蛋白由高变的氨基末端和用于流行病学分子分型(emm或M分型)的A-重复结构域、B-重复结构域和保守性C-重复结构域组成(6)。处于临床研究的主要的亚单位疫苗是基于氨基末端M蛋白的多价疫苗和保守性C-重复M蛋白肽疫苗(5)。基于其在诱导全身免疫方面的成功，这些GAS疫苗候选物已经进入临床试验(7)。已经证明，全身免疫通过全身部位的血清免疫球蛋白(Ig)在预防GAS播散到深层组织以及预防疾病中是有效的，但在预防粘膜部位的定殖由此预防人与人之间的传播方面是无效的(8)。因此，全身疫苗接种对于诱导抗GAS的免疫不是最佳的途径。相比之下，经鼻给药的抗多种生物体的粘膜疫苗在诱导全身和粘膜隔室的抗原特异性免疫应答方面是有效的(9-11)。由于这种双层保护性免疫，粘膜疫苗接种对于抵抗全身性和粘膜GAS感染是理想的策略，其具有的预防粘膜定殖的益处还会抑制通过来自URT的飞沫和气溶胶的传播(7)。粘膜疫苗接种还具有经济上的优势，这是疫苗开发的一个重要的考量因素。由于通过鼻途径给予疫苗的便捷性，可以避免使用针具(7)。无痛递送有助于更好的患者依从性。专利技术概述本专利技术的目的是提供引发对A群链球菌细菌的粘膜免疫应答的免疫原性剂和递送系统。在广义上，本专利技术涉及借助还包含诸如白喉类毒素(DT)的载体蛋白的脂质囊泡，通过递送免疫原性蛋白、片段或变体，促进或诱发对A群链球菌细菌的粘膜免疫性。合适地，载体蛋白位于囊泡内空隙。本专利技术的一方面提供了适于施用于哺乳动物的免疫原性剂，所述免疫原性剂包含免疫原性A群链球菌细菌蛋白、其片段、变体或衍生物，脂质囊泡和载体蛋白。本专利技术的另一方面提供了包含前述方面的免疫原性剂的药物组合物。优选地，药物组合物包含免疫原性剂以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在实施方案中，药物组合不包含佐剂。本专利技术的另一方面提供了根据前述方面的免疫原性剂在制备用于在哺乳动物中引发针对A群链球菌的免疫应答的药物中的用途。本专利技术的另一方面提供了根据前述方面的免疫原性剂在制备用于使哺乳动物对A群链球菌免疫的药物中的用途。本专利技术的另一方面提供了根据前述方面的免疫原性剂在制备用于治疗或预防哺乳动物中A群链球菌感染的药物中的用途。本专利技术的另一方面提供了根据前述方面的免疫原性剂在制备用于治疗或预防哺乳动物中由A群链球菌感染导致的或者与A群链球菌感染相关的疾病的药物中的用途。在实施方案中，免疫原性剂可以在缺乏佐剂的情况下施用。合适地，按照前述方面，免疫原性剂能够引发粘膜免疫应答。典型地，粘膜免疫应答包括IgA保护。在优选形式中，免疫原性剂经鼻内施用。合适地，免疫原性蛋白、其片段或变体展示于脂质囊泡的表面上。合适地，载体蛋白位于囊泡中的囊泡内空隙。在优选的实施方案中，脂质囊泡是脂质体。合适地，免疫原性蛋白片段或变体是脂质化的。在某些实施方案中，在免疫原性蛋白片段或变体的N-末端的赖氨酸(K)残基是脂质化的。在优选形式中，N-末端的赖氨酸(K)残基通过<和ε氨基团被脂质化。在一些实施方案中，每一脂质是C16脂肪酸，诸如棕榈酸。优选地，N-末端的赖氨酸(K)残基位于免疫原性蛋白片段或变体的N-末端的间隔子氨基酸序列中。在一个特定实施方案中，免疫原性蛋白、其片段或变体是A群链球菌M蛋白、其片段、变体或衍生物。在另外的或可选的实施方案中，免疫原性蛋白是促进嗜中性粒细胞活性恢复或增强的试剂。在具体实施方案中，M蛋白片段为M蛋白的保守区域或者包含M蛋白的保守区域。在一个实施方案中，所述片段是免疫原性片段，其包含p145肽或者包含于p145肽中。在具体实施方案中，所述免疫原性片段位于J8肽或其变体内，或者包含J8肽或其变体。优选地，J8肽包含以下氨基酸序列或者基本由以下氨基酸序列组成：QAEDKVKQSREAKKQVEKALKQLEDKVQ(SEQIDNO:1)。在一个广泛实施方案中，促进恢复或增强嗜中性粒细胞活性的试剂是蛋白SpyCEP或其片段。在优选实施方案中，SpyCEP片段包含以下氨基酸序列或者基本由以下氨基酸序列组成：NSDNIKENQFEDFDEDWENF(SEQIDNO:2)。在一个具体实施方案中，SpyCEP片段和M蛋白片段可以融合以形成单一的嵌合肽。在一个实施方案中，所述嵌合肽为以下氨基酸序列或其变体，可包含以下氨基酸序列或其变体，或者基本由以下氨基酸序列或其变体组成：NSDNIKENQFEDFDEDWENFQAEDKVKQSREAKKQVEKALKQLEDKVQ(SEQIDNO:3)。在一些实施方案中，免疫原性剂还可以包含先天免疫的激活剂。所述先天免疫激活剂可以靶向C型凝集素，如巨噬细胞可诱导的Ca2+依赖性(C型)凝集素(“Mincle”)。非限制性实例包括糖脂，如分枝杆菌核心因子海藻糖-6,6’-二霉菌酸酯(TDM)和/或其合成的类似物海藻糖-6,6′-二山嵛酸酯(TDB)。在一些实施方案中，免疫原性剂还可以包含胆盐，如脱氧胆酸钠。除非上下文另外需要，术语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”以及“包含(comprising)”或类似的术语意图意为非排他性包含，以使叙述的元素或特征列表不单独包含阐明的或列出的那些，而可以包含未列出或阐明的其它元素或特征。在氨基酸序列的背景下，通过“基本由……组成”意为叙述的氨基酸序列以及位于N-或C-端的另外1个、2个或3个氨基酸。如本文所使用的，在此使用不定冠词‘一个/一种(a)’和‘一个/一种(an)’以指或者包含单数或复数元素或特征，并且不应被认为意为或者限定“一个/一种(one)”或“单一”元素或特征。附图简述图1.J8-Lipo-DT的理想化结构。脂质体将DT封装，同时在N端与间隔子KSS相连的J8与两个棕榈酸分子共价偶联，促进J8插入脂质体膜。图2.单只BALB/c小鼠的J8特异性抗体应答。平均抗体滴度以bar表示。A)唾液IgA滴度。B)粪便IgA滴度。C)血清IgG滴度。利用单向ANOVA进行统计分析，然后进行Tukey事后检验(ns，p>0.05；*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<本文档来自技高网...

【技术保护点】
适合于向哺乳动物施用的免疫原性剂，所述免疫原性剂包含免疫原性A群链球菌细菌蛋白、其片段、变体或衍生物，脂质囊泡以及载体蛋白。

【技术特征摘要】
2015.10.27 AU 2015904403;2016.03.18 AU 20169010261.适合于向哺乳动物施用的免疫原性剂，所述免疫原性剂包含免疫原性A群链球菌细菌蛋白、其片段、变体或衍生物，脂质囊泡以及载体蛋白。2.如权利要求1所述的免疫原性剂，其适合于鼻内施用。3.如权利要求1或2所述的免疫原性剂，其能够引起哺乳动物的粘膜免疫应答。4.如前述任一项权利要求所述的免疫原性剂，其中所述载体蛋白位于囊泡内空隙。5.如前述任一项权利要求所述的免疫原性剂，其中所述载体蛋白为白喉类毒素(DT)或其变体或片段。6.如前述任一项权利要求所述的免疫原性剂，其中所述免疫原性A群链球菌细菌蛋白片段、其片段、变体或衍生物展示在脂质囊泡表面。7.如前述任一项权利要求所述的免疫原性剂，其中所述脂质囊泡是脂质体。8.如前述任一项权利要求所述的免疫原性剂，其中所述免疫原性A群链球菌细菌蛋白、其片段或变体为A群链球菌M蛋白片段、变体或其衍生物。9.如权利要求8所述的免疫原性剂，其中所述片段位于J8肽或其变体之内，或者包含J8肽或其变体。10.如权利要求9所述的免疫原性剂，其中所述J8肽是以下氨基酸序列、包含以下氨基酸序列、或者基本由以下氨基酸序列组成：QAEDKVKQSREAKKQVEKALKQLEDKVQ(SEQIDNO:1)。11.如权利要求1-10中任一项所述的免疫原性剂，其中所述免疫原性蛋白是促进中性粒细胞活性恢复或增强的试剂。12.如权利要求11所述的免疫原性剂，其中所述促进中性粒细胞活性恢复或增强的试剂是蛋白，为SpyCEP或其片段。13.如权利要求12所述的免疫原性剂，其中所述SpyCEP片段为以下氨基酸序列，包含以下氨基酸序列，或基本由以下氨基酸序列组成：NSDNIKENQFEDFDEDWENF(SEQIDNO:2)。14.如前述任一项权利要求所述的免疫原性剂，其中所述免疫原...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔·戈德，麦福思·扎曼，
申请(专利权)人：格里菲斯大学，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU