抗猪链球菌感染的疫苗组合物制造技术

本发明专利技术描述了一种疫苗组合物，其包含有效量的至少一种多肽，所述多肽选自IdeSsuis、rIdeSsuis、其类似物或片段，或编码它们的多核苷酸。该疫苗组合物用于猪或人的猪链球菌感染的预防性、间免性或治疗性治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及疫苗组合物及其在哺乳动物(特别是猪和人)免疫和保护中的用途，其抗猪链球菌(Streptococcussuis)。
技术介绍
猪链球菌(S.suis)定植在猪的呼吸道、消化道和生殖道。猪链球菌也是最重要的猪病原体之一，引起不同的病变如脑膜炎、败血病、关节炎和心内膜炎。猪链球菌感染导致全世界猪业中的高生产损失。通常使用抗生素治疗猪链球菌感染。但是复发性感染常常发生，以及正在进行的关于减少抗生素使用的讨论强调了对替代控制措施的需要。在欧洲，没有可用的许可疫苗，但通常使用自体菌苗。主要缺点是这些疫苗仅防御同源血清型的事实。但猪链球菌是一种非常多样的生物体，并且不同的血清型导致仔猪发病。尤其是血清型2菌株在全世界仔猪的疾病中扮演着重要的角色。猪链球菌血清型2已经被鉴定在亚洲的成人中引起脑膜炎，但是迄今为止还没有检测到猪链球菌在人之间的传播。通常，感染引起早期抗原特异性免疫球蛋白M(IgM)的响应，导致亲和力成熟和同型转换(isotopeswitching)。此外，IgM抗体在感染之前存在，其是天然存在的，在将天然免疫与获得性免疫相关联中是重要的。在猪中，IgM作为单体膜IgM(mIgM)是尤其重要的，因为它是唯一出现的B细胞受体，因为猪中缺少IgD。此外，新生仔猪中IgM的合成比IgG和IgA的合成早得多。初乳中的IgM对病原体的防御至关重要，病原体的防御通过补体介导的杀伤来进行。因此，IgM抗体在防御不同病原体中是重要的。已经鉴定了猪链球菌血清型2的各种毒力或毒力相关因子，在荚膜中，其是迄今为止唯一已知的保护病原体免受吞噬作用的必需毒力因子。猪链球菌血清型2的许多表面相关和分泌蛋白表现出与其它致病性链球菌的同源因子相同或非常相似的功能。各种人或动物的病原体如化脓性链球菌、马链球菌马亚种和马链球菌兽疫亚种表达彼此同源的特异性IgG内肽酶。具有猪链球菌独有功能的表面相关或分泌因子已经首先由Seele等人描述(“IdentificationofaNovelHost-specificIgMProteaseinStreptococcussuis.”2013；JournalofBacteriology，195：930-940)。Seele等人表明该IgM蛋白酶(称为IdeSsuis)不起IgG内肽酶的作用。IgM蛋白酶降解细菌表面上调理作用的IgM，因此提高猪链球菌在菌苗初免的仔猪血液中的存活。IdeSsuis对IgM高度特异性，并且不切割IgG或IgA。然而，Seele等人没有提到IdeSsuis、rIdeSsuis及其类似物和片段作为抗猪链球菌感染的有效疫苗的功能。其仅仅假设IdeSsuisIgM蛋白酶活性的中和可以基本上改善诱导调理抗体的菌苗或其它未来疫苗的保护功效。然而，其没有公开IdeSsuis和相关蛋白可用作抗猪链球菌感染疫苗中的专有免疫剂。Baums等人在《动物健康研究综述》，第10卷，第01期，2009年6月，第65-83页的《流行病学、发病机制和疫苗开发中的猪链球菌表面相关和分泌因子》(Surface-associatedandsecretedfactorsofStreptococcussuisinepidemiology,pathogenesisandvaccinedevelopment,AnimalHealthResearchReviews,Volume10,Issue01,June2009,pp65-83)中公开了细菌因子(表面相关的和分泌的细菌因子)，其被认为有助于猪链球菌与宿主因子和细胞的相互作用。因子相对于以下方面给出：(i)它们的鉴定和特征，(ii)它们在猪链球菌中的分布和(iii)它们对毒性、免疫响应和疫苗接种的重要性。该综述强调了未来仍有待解决的许多挑战性问题。根据本专利技术所要解决的问题是克服本领域描述的问题，并提供一种新的疫苗组合物以免疫和保护哺乳动物，特别是猪和人，对抗猪链球菌感染。
技术实现思路
根据本专利技术，通过提供一种疫苗组合物来解决这一问题，该疫苗组合物包含有效量的选自下组的至少一种多肽或至少一种载体：(a)称为IdeSsuis的蛋白质，其类似物或片段，(b)称为rIdySsuis的蛋白质，其类似物或片段，(c)插入多核苷酸的载体，该多核苷酸编码蛋白IdeSsuis、其类似物或片段，(d)插入多核苷酸的载体，该多核苷酸编码蛋白rIdeSsuis、其类似物或片段，和至少一种药物载体、稀释剂或佐剂。本专利技术的详细说明本专利技术使用的疫苗组合物包含至少一种由(a)或(b)限定的单一多肽，以及药物载体或稀释剂或佐剂或其混合物。此外，该疫苗还可以包含由(c)或(d)限定的至少一种单一载体，和药物载体、稀释剂或佐剂或其混合物。根据本专利技术，优选的是一疫苗组合物，其中(a)的IdeSsuis包括：(a.a)SEQIDNO:1氨基酸序列；(a.b)SEQIDNO:1氨基酸序列的片段或类似物；或(a.c)具有IgM蛋白酶活性的(a.a)或(a.b)的片段。根据本专利技术，进一步优选的是一疫苗组合物，其中(b)的rIdeSsuis包括或由其组成：(b.a)SEQIDNO：2、6或7的氨基酸序列；(b.b)SEQIDNO：2、6或7的氨基酸序列的片段或类似物(b.c)SEQIDNO：1氨基酸序列上缺少从位置1至34的氨基酸的氨基酸序列；(b.d)与SEQIDNO：1的蛋白IdeSsuis的氨基酸序列具有至少60％同源性，优选70％同源性，最优选85％同源性的氨基酸序列；(b.e)具有IgM蛋白酶活性的(b.a)或(b.b)或(b.c)或(b.d)的片段；或者(b.f)包含或由SEQIDNO：5氨基酸序列或与其至少95％同源的氨基酸序列组成的(b.a)或(b.b)或(b.c)或(b.d)的片段。SEQIDNO：2氨基酸序列代表SEQIDNO：1序列，然而缺少氨基酸1-34(信号肽)，但添加了HIS标记。注意，SEQIDNO：1源自猪链球菌血清型2菌株。SEQIDNO：6氨基酸序列代表SEQIDNO：2的N端序列。SEQIDNO：7(也称为抗原rIdeSsuisB2)含有猪链球菌血清型7菌株成熟IdeSsuis蛋白的完整氨基酸序列，但添加了N末端HIS标记。猪链球菌血清型7菌株的IdeSsuis蛋白在蛋白质的C末端半部(Cterminalhalf)中不同，因为其与SEQIDNO：1相比缺少114个氨基酸的序列。SEQIDNO：7的氨基酸80至414(所谓Mac-1结构域的高度保守部分)与SEQIDNO：5序列的97.9％对应。SEQIDNO：7和1之间的总体一致性是96.4％(不考虑N末端HIS标记和114个氨基酸的缺口)。本文所用的术语“片段或类似物”定义如下：“类似物”可以认为是与上述公开的氨基酸序列相似的氨基酸序列，并且显示与原始氨基酸序列(例如SEQIDNO：1、2、6或7)至少60％，优选70％，最优选85％的同源性水平。本文还考虑更高的同源性程度，例如95％。本文所用的同源性是指一致性。因此，基于替换、删除或插入，序列可能彼此不同。一致性的程度可以使用具有默认参数的blastp算法的蛋白blast程序来确定，所述默认参数是，例如，预期阈值：10，字大小：3，矩阵：BLOMSUM62本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，其包含有效量的选自下组的至少一种多肽或至少一种载体：(a)称为IdeSsuis的蛋白质，其类似物或片段，(b)称为rldeSsuis的蛋白质，其类似物或片段，(c)插入多核苷酸的载体，所述多核苷酸编码蛋白IdeSsuis、其类似物或片段，(d)插入多核苷酸的载体，所述多核苷酸编码蛋白rIdeSsuis、其类似物或片段，和至少一种药物载体、稀释剂或佐剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.30 EP 14170637.41.一种疫苗组合物，其包含有效量的选自下组的至少一种多肽或至少一种载体：(a)称为IdeSsuis的蛋白质，其类似物或片段，(b)称为rldeSsuis的蛋白质，其类似物或片段，(c)插入多核苷酸的载体，所述多核苷酸编码蛋白IdeSsuis、其类似物或片段，(d)插入多核苷酸的载体，所述多核苷酸编码蛋白rIdeSsuis、其类似物或片段，和至少一种药物载体、稀释剂或佐剂。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，(a)的IdeSsuis包括(a.a)SEQIDNO：1氨基酸序列；(a.b)SEQIDNO：1氨基酸序列的片段或类似物；或(a.c)具有IgM蛋白酶活性的(a.a)或(a.b)的片段。3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，(b)的rIdeSsuis包括(b.a)SEQIDNO：2、6或7氨基酸序列；(b.b)SEQIDNO：2、6或7氨基酸序列的片段或类似物；(b.c)SEQIDNO：1氨基酸序列上缺少从位置1至34的氨基酸的氨基酸序列；(b.d)与SEQIDNO：1的蛋白IdeSsuis的氨基酸序列具有至少60％同源性，优选70％同源性，最优选85％同源性的氨基酸序列；或者(b.e)具有IgM蛋白酶活性的(b.a)或(b.b)或(b.c)或(b.d)的片段；(b.f)包含或由SEQIDNO：5氨基酸序列或与其至少95％同源的氨基酸序列组成的(b.a)或(b.b)或(b.c)或(b.d)的片段。4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，包含或基本上由蛋白质组成，所述蛋白质包含或由SEQIDNO：5氨基酸序列或与其至少95％同源的氨基酸序列组成。5.根据权利要求1-4中的一项或多项所述的疫苗组合物，其中所述蛋白质或载体是唯一的活性或免疫原性成分。6.根据权利要求1-5中的一项或多项所述的疫苗组合物，基本由与SEQIDNO：1、2、6或7氨基酸序列至少60％、70％、85％或95％同源的rIdeSsuis蛋白组成，和/或包含SEQIDNO：5氨基酸序列或与其至少95％同源的氨基酸序列。7.根据权利要求1-6至少一项所述的疫苗组合物，其特征在于，有效量的(a)或(b)所述的多肽的片段是有至少一种其它蛋白的融合蛋白的一部分。8.根据权利要求1-7至少一项所述的疫苗组合物，含有总量为约0.05-2mg的蛋白质。9.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，(c)所述的多核苷酸包含编码权利要求2所定义的蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·泽勒，C·鲍姆斯，P·瓦伦丁·魏甘德，
申请(专利权)人：爱蒂特生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE