山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗及其生产方法技术

本发明专利技术涉及一种山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗及其制备方法。本发明专利技术采用山羊支原体山羊肺炎亚种C87001株，接种适宜培养基，收获培养物，经浓缩、硫柳汞灭活后，加矿物油佐剂混合乳化制成。用于预防山羊支原体山羊肺炎亚种引起的山羊传染性胸膜肺炎；采用本发明专利技术提出的液体培养基生产山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，较原组织灭活疫苗具有明显的优势，即大大降低了疫苗生产过程中的生物安全风险、降低了生产成本，且所制备的疫苗不易出现过敏反应，安全性更高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗及其生产方法。属于兽用生物制品领域。
技术介绍
养羊业与国民经济的发展和各族人民生活水平的提高关系十分密切，特别是进入21世纪后，我国养羊业得到快速发展，成果显著，养羊业在国民经济中的比重也逐年提高。根据联合国粮农组织(FAO)数据，2013年，中国大陆地区的绵羊养殖量即达1.91亿头，山羊1.83亿头，合计3.74亿头。2014年，中国大陆地区的绵羊养殖量为2.02亿头，山羊1.88亿头，合计3.90亿头。虽然我国养羊数量位居世界首位，但与养羊业发达的国家相比，疫病防控水平较薄弱，这在一定程序上制约了我国养羊业的发展。2014年，国家现代肉羊产业技术体系分别对全国肉羊主产区内蒙古、新疆、宁夏、甘肃、青海等14个省区市的近60个县(区、旗)的肉羊产业发展现状进行专题调研后形成的《2014年全国肉羊产业调研报告》中指出：从调查的总体情况看，当前对我国肉羊产业危害最为严重的传染病有羊支原体肺炎(传染性胸膜肺炎)、链球菌病、梭菌病、羊痘、羊传染性脓疱(羊口疮)、羔羊痢疾和羊肠毒血症。这些病均引起不同程度的死亡，养羊户损失严重。其中最引人关注的是近年来发生严重的羊支原体肺炎，饲养密集的规模化羊场和经过长途运输的羊只羊支原体肺炎的发病率很高，死亡严重。在宁夏、安徽、云南和四川调研时，发现所有的规模化羊场都存在羊传染性胸膜肺炎，只是危害的程度不同。山羊传染性胸膜肺炎(Contagiouscaprinepleurpneumonia,CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolumsubsp.capripneumoniae,Mccp，引起的一种山羊特有的急性或慢性高度接触性传染病，以呈现纤维素性肺炎和胸膜炎为特征,发病率为22％～30％，个别地区高达60％～80％，死亡率15％～30％。该病在非洲、亚洲等数十个国家和地区都有流行，对山羊养殖业带来了较为严重的损失，被世界动物卫生组织列为B类传染病。我国于1947年首发于甘肃,继而在内蒙古、四川、山东、湖北、河北、云南、江西、江苏等地陆续发现。近几年，在湖南、河南、贵州、重庆、内蒙等地区都有CCPP的报道，给山羊养殖业造成了较大的经济损失。目前，我国预防山羊传染性胸膜肺炎，主要依靠中国兽医药品监察所研发的“山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗”，该疫苗已在我国广泛使用近60年，长期的临床实践证明该疫苗具有极好的临床免疫保护效力。但原疫苗采用强毒气管注射山羊，采集肺组织制成山羊传染性胸膜肺炎组织灭活疫苗，该疫苗不适宜工业化生产，存在散毒的危险；肺组织中杂菌含量高，所制备的疫苗易出现过敏反应。
技术实现思路
本专利技术目的在于制备出采用液体培养基发酵培养工艺生产的山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，用于预防山羊传染性胸膜肺炎。本专利技术技术方案1.一种山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，其特征在于所述灭活疫苗含有采用EZH液体培养基培养的山羊支原体山羊肺炎亚种抗原。2.本专利技术所述山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，其特征在于所述山羊支原体山羊肺炎亚种抗原生产菌株为C87001株。3.本专利技术所述山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，其特征在于所述液体培养基为EZH液体培养基，由如下组分(W/W)制成:水解乳蛋白3.5％、酵母粉1.5％、葡萄糖1.5％、PPLO肉汤粉10.5％、1％酚红0.1％，余量为注射用水；用灭菌1mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至7.8，经0.22μm过滤除菌。4.本专利技术所述山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗的制备方法，其特征在于用所述山羊支原体山羊肺炎亚种C87001株作为疫苗生产菌株，接种适宜培养基，培养后收获培养物经浓缩、灭活，加矿物油佐剂混合乳化制成山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗。本专利技术具体实施方式1.山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗的制备(1)生产和检验用菌种山羊支原体山羊肺炎亚种C87001株生产用基础种子，山羊支原体山羊肺炎亚种C87002株为疫苗检验用菌种，由中国兽医药品监察所制备并提供(该菌原分类命名为丝状支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasmamycoidessuhsp.capriEdwardandFreundt)(请见中国兽医药品监察所、中国兽医微生物菌种保藏管理中心编著，中国兽医菌种目录(第二版)，中国农业科学技术出版社，2002年，p89)。)。(2)一级种子繁殖及鉴定取C87001株冻干菌种1支，接种含15％马血清的EZH液体培养基，置37℃培养3～5日，当培养基pH值下降至7.0左右时，作为制苗用一级种子。(3)二级种子繁殖及鉴定取一级种子，接种含15％马血清的EZH液体培养基，置37℃培养3～5日，当培养基pH值下降至7.0左右时，作为制苗用二级种子。(4)制苗用抗原制备取合格的二级种子，按培养基总量的2％接种含15％马血清的EZH液体培养基，37℃培养，当培养物pH值下降到7.0左右时，终止培养。取样进行纯粹检验及活菌滴度测定。活菌滴度应≥1×109.0CCU/ml。(5)抗原浓缩采用2万截留分子量(MW)超滤浓缩系统浓缩15倍(V/V)。(6)灭活按浓缩抗原总量的0.01％加入硫柳汞，充分混匀，在15～25℃作用10小时，期间搅拌数次。灭活结束后，2～8℃保存，应不超过30日，取样进行半成品检验。(7)疫苗配制将油佐剂导入油相罐内，以至少121配高压灭菌30分钟，冷却至室温备用。根据灭活前活菌滴度测定结果，用PBS(0.01mol/L，pH值7.2)将浓缩后的抗原稀释至每1ml含1m109.0CCU菌体。将油相加入乳化罐内，以80～100r/min搅拌，同时按1:1(V/V)的比例，缓慢加入水相，加完后搅拌5～10min，用乳化机以5600r/min，循环乳化10～20min。乳化后取样进行检验，合格后分装。本专利技术以上所述液体培养基为EZH液体培养基，由如下组分(W/W)制成:水解乳蛋白3.5％、酵母粉1.5％、葡萄糖1.5％、PPLO肉汤粉10.5％、1％酚红0.1％，余量为注射用水；用灭菌1mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至7.8，经0.22μm过滤除菌。2.山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗的检验(1)性状外观乳白色或淡黄色乳剂。剂型油包水型(W/O)。取一清洁吸管，吸取少量疫苗滴于冷水中，应呈油滴状不扩散。稳定性吸取疫苗10ml加入离心管中，以3000r/min离心15min，管底析出的水相应不得超过0.5ml。黏度按现行《中国兽药典》附录进行测定，应符合规定。(2)装量检查按《中国兽药典》(中国兽药典委员会，中华人民共和国兽药典，二〇一〇年版三部，中国农业出版社，2011，以下称《中国兽药典》)附录进行检查，应符合规定。(3)无菌检验按《中国兽药典》附录进行检验，应无菌生长。(4)安全检验用体重1.5～2.0kg健康家兔5只，各肌肉注射疫苗1.0ml；用1月龄的健康易感山羊2只，各分点肌肉注射疫苗4.0ml，均观察10日。应全部健活。(5)效力检验用体重至少为20kg、1～3岁的健康易感山羊4只，各颈部皮下或肌肉注射疫苗2.0ml。21日后连同对照山羊3只，各气管注射山羊支原体山羊肺炎亚种强毒C87002株肺组织乳剂4.0ml，观察30日。对照山羊应全部发病，免疫山羊应至少保护3只。(6)汞类防腐本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，其特征在于所述灭活疫苗含有采用EZH液体培养基培养的山羊支原体山羊肺炎亚种抗原。

【技术特征摘要】
1.一种山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，其特征在于所述灭活疫苗含有采用EZH液体培养基培养的山羊支原体山羊肺炎亚种抗原。2.如权利要求1所述山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，其特征在于所述山羊支原体山羊肺炎亚种抗原生产菌株为C87001株。3.如权利要求1所述山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，其特征在于所述液体培养基为EZH液体培养基，由如下组分(W/W)制成:水解乳蛋白3.5％、酵母粉1.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈小云，王栋，张敏，王磊，王静文，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：北京;11