本发明专利技术获得了三株猪胸膜肺炎放线杆菌分别为血清1型LC株，血清5型YC株，和血清7型YS株；并通过上述三株菌株灭活后抗原的合理配制，获得了一种猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗及其制备方法，以有效地预防和控制猪传染性胸膜肺炎在养殖场中传播和爆发；本发明专利技术还提供一种使用水性佐剂的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗，最大程度地减少注射时的应激反应，并持续地提高免疫保护作用，因此，特别适合在国内养殖场的大规模应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种猪传染性胸膜肺炎灭活疫苗，特别是指一种猪传染性胸膜肺炎多价灭活疫苗，属于兽药疫苗领域。
技术介绍
猪传染性胸膜肺炎(Pocrinecontagious pleuropneumonia, PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种猪传染性呼吸道疾病。该病发生于各年龄段猪只，发病率和死亡率在20%以上，以肺损伤、出血坏死、纤维化为特点，临床特征可见于急性和慢性感染。慢性感染可致日增重下降，生长缓慢，饲料利用率低。该病于1957年由Pattiosn等首次报道，此后逐渐扩散，目前已遍布世界各地。给世界养猪业造成了严重的经济损失。猪场内胸膜肺炎的综合防制必须结合免疫接种、治疗及饲养管理等多方面的措施。对感染猪群使用抗菌药物治疗可以减少死亡率。全群预防可采用持续或“脉冲式用药”(间歇性地集中短时间大剂量用药)的方法，但随着耐药性问题越来越突出，预防和控制本病最有效的措施仍然是疫苗免疫接种。目前预防本病的商品化疫苗主要是灭活疫苗。目前国内外上市的灭活疫苗均由油佐剂制备成油包水(W/0)型疫苗，而油相为矿物油。矿物油是各种饱和烃的混合物，各种矿物油的性能各有差异。造成这种差异的原因是不同矿物油中所含的烃类各不相同，这些烃类的理化性质对佐剂的活性以及副作用有重要的影响。矿物油不能被代谢，因此会产生一系列的副作用，包括溃疡、肉芽肿、发热等，易形成残留。此外，矿物油以及其中的组分如姥鲛烷、正十六烷等会引起佐剂性关节炎等自身免疫反应。我国于1987年首次报道本病的临床病例，目前我国20多个省市都已报道有此病的发生，可见猪传染性胸膜肺炎在我国已广泛存在并流行。但在我国流行的APP血清型较多，其中以1、2、3、5和7型最多。由于本病可以经空气和接触传染，所以集约化养殖程度越高的国家和地区发病越严重。目前对于该疫病的预防和控制最有效的措施仍然是疫苗免疫接种。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的主要目的在于提供一种，以有效地预防和控制猪传染性胸膜肺炎在养殖场中发生；本专利技术另一目的在于还提供一种使用水性佐剂的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗，最大程度地减少了应激反应，并持续地提高免疫保护作用。技术方案一种预防和治疗猪传染性胸膜肺炎的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗，所述猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗包括猪胸膜肺炎放线杆菌血清1、5、7型菌株抗原。优选地，本专利技术所述 的猪传染性胸膜肺炎灭活疫苗，包括猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清1、7型菌株抗原与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2、3、5菌株抗原的一种或任意二种，形成猪传染性胸膜肺炎三价或四价灭活疫苗。优选地，专利技术人通过仔细调研流行病源地的发病情况，严格筛选出了三株猪胸膜肺炎放线杆菌。即本专利技术的三价灭活疫苗中抗原为配合良好，免疫原性优良的灭活的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1、5、7型抗原；所述猪胸膜肺炎放线杆菌分别为猪胸膜肺炎放线杆菌血清 I 型 LC 株(Actinobacillus pleuropneumoniae serotype I strainLC)，保藏号CCTCC M 2011458 ;猪胸膜肺炎放线杆菌血清5型YC株(ActinobacillusP leuropneumoniae serotype 5 strain YC),保藏号 CCTCC M 2011459 和猪胸膜肺炎放线杆菌血清 7型 YS 株(Actinobacillus p leuropneumoniae serotype 7 strain YS),保藏号CCTCC M 2011460 ;上述三株菌株的保藏单位为中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏日期为2011年12月13日，保藏地址为中国武汉市武汉大学。优选地，本专利技术所述的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗中，所述猪胸膜肺炎放线杆菌血清1、5、7型抗原含量为灭活前大于lX109CFU/ml。优选地，本专利技术所述的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗中，灭活的方法为使用甲醛灭活；更优选地，为使用0.1% -0.3% W/V的甲醛水溶液灭活，灭活条件为37°C，48h。优选地，本专利技术所述的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗中，还包括最终浓度为0.01%的硫柳汞溶液本专利技术的另一主要目的在于提供一种猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗，含有的佐剂为水性免疫佐剂。优选地，本专利技术猪传染性胸膜肺炎灭活疫苗中，所述水性免疫佐剂为水包油型免疫佐剂或水包油包水型免疫佐剂；更优选地，为水包油型免疫佐剂；最优选地，所述水包油型免疫佐剂中的油相为不使用矿物油。优选地，所述水包油型免疫佐剂的油相为维生素E、左旋米唑、植物油、角鲨烯和角鲨烷的一种或几种；更优选地，所述水包油型免疫佐剂为Tween80 0.25 0.5% W/V、Span85 0.25 0.5% W/V、角鲨烯 2.5 5% W/V。本专利技术还提供了上述猪传染性胸膜肺炎灭活疫苗及猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:I)将猪胸膜肺炎放线杆菌，培养至活菌数应不低于4 X 109CFU/ml，灭活并浓缩不少于6X 109CFU/ml的浓度；2)混合灭活的猪胸膜肺炎放线杆菌，并与水性佐剂混合均匀，3000-5000rpm搅拌混匀即可。优选地，本专利技术所述的猪传染性胸膜肺炎灭活疫苗制备方法中，所述步骤I)猪胸膜肺炎放线杆菌为猪胸膜肺炎放线杆菌血清1、5、7型菌株；所述的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1、5、7型菌株分别为猪胸膜肺炎放线杆菌血清I型LC株(保藏号CCTCC M 2011458)、猪胸膜肺炎放线杆菌血清5型YC株(保藏号CCTCC M 2011459)和猪胸膜肺炎放线杆菌血清7 型 YS 株(保藏号 CCTCC M 2011460)。优选地，本专利技术所述的猪传染性胸膜肺炎灭活疫苗制备方法中，所述步骤2)还包括在终止搅拌前加入1% V/V硫柳汞溶液，使其最终浓度为0.01% V/V的步骤。优选地，本专利技术所述 的猪传染性胸膜肺炎灭活疫苗制备方法中，获得的猪传染性胸膜肺炎灭活疫苗为猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗，三种抗原的含量灭活前大于lX109CFU/ml。因此，本专利技术提供了三株猪胸膜肺炎放线杆菌血清1、5、7型菌株；分别为猪胸膜肺炎放线杆菌血清I型LC株(保藏号CCTCC M2011458)、猪胸膜肺炎放线杆菌血清5型YC株(保藏号CCTCC M2011459)和猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型YS株(保藏号CCTCCM2011460)。由三株猪胸膜肺炎放线杆菌灭活制备获得的上述猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗；和通过合适的水包油型或水包油包水型免疫佐剂获得水性猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗。以及该三价灭活疫苗在预防或治疗猪传染性胸膜肺炎方面的用途。技术效果专利技术人在掌握了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌病流行病学的基础上，经过血清学鉴定，严格筛选出了本专利技术的猪传染性胸膜灭活疫苗中使用的猪胸膜肺炎放线杆菌。即本专利技术的猪胸膜肺炎放线杆菌是通过仔细调研流行病源地的发病情况，选择典型性的发病养殖场和病原体进行菌株的分离纯化、APP 16 sRNA基因的PCR检测及测序、生化实验、动物试验以及血清学等一系列的实验。在对已有的1、2、3、5、7型菌株进行免疫原性检测，成功筛选出免疫原本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型LC株，保藏号为CCTCC?M2011458。
【技术特征摘要】
1.一种猪胸膜肺炎放线杆菌血清I型LC株，保藏号为CCTCC M2011458。2.一种猪胸膜肺炎放线杆菌血清5型YC株，保藏号为CCTCC M2011459。3.一种猪胸膜肺炎放线杆菌7型YS株，保藏号为CCTCC M2011460。4.一种预防和治疗猪传染性胸膜肺炎的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗，其特征在于，所述的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗包括猪胸膜肺炎放线杆菌血清1、5、7型菌株抗原。5.一种预防和治疗猪传染性胸膜肺炎的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗，其特征在于，所述的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗包括猪胸膜肺炎放线杆菌血清1、5、7型菌株抗原，分别为灭活的猪胸膜肺炎放线杆菌血清I型LC株，保藏号为CCTCC M2011458 ;灭活的猪胸膜肺炎放线杆菌血清5型YC株，保藏号为CCTCC M 2011459 ;和灭活的猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型YS株，保藏号为CCTCC M 2011460。6.根据权利要求5所述的猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗，其特征在于，所述猪胸膜肺炎放线杆菌血清1、5、7型菌株抗原含量为灭活前的菌株大于lX109CFU/ml。7.根据权利要求5所述的猪传染性胸...
【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，白朝勇，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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