【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及鸡传染性支气管炎纳米活苗的制备方法。
技术介绍
传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染的病毒性疾病，以呼吸道症状、产蛋率下降、肾脏病变等为特征。自1988年以来，在我国大部分地区相继流行，发病率100%，死亡率10% 30%。由于集约化养殖对环境的污染和不断出现新的病毒变异毒株，且常常是基因型表现不一和血清型变异交替或同时发生，组织嗜性也不断变化，使IBV的免疫防控难度大，免疫失败的现象时有发生。这两种疫病严重危害养鸡业的发展。及时进行免疫接种是预防鸡传染性支气管炎发生的重要以及主要措施。目前，对于鸡传染性支气管炎的预防免疫接种，最常用的是传统的灭活苗和弱毒苗。灭活苗起效慢，免疫保护期短，存在灭活不当造成疾病传播，且免疫途径多为肌注，不能引起有效地粘膜免疫，影响免疫效果。弱毒苗的优点在于活病毒感染刺激产生局部免疫，很快起到保护作用，且弱毒苗通常以感染鸡胚尿囊液的冻干制品出售，较便宜，容易使用，适于大群体应用。另外，粘膜免疫是近年来免疫学领域的前沿方向和研究热点。因粘膜免疫系统覆盖了机体呼吸道、胃肠道、泌尿生...
【技术保护点】
鸡传染性支气管炎N?2?羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法，其特征在于鸡传染性支气管炎N?2?羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法按以下的实验步骤实现：一、取50～400μl?IBV?H120系病毒液加入无菌去离子水补足至2mL，然后加入到5mL浓度为0.5～2.0mg/mL的过滤除菌后的N?2?羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶液中，然后在室温、无菌条件下以搅拌速度为300r/min的条件下搅拌5min，得到混合溶液A；二、将混合溶液A在室温、无菌条件下以900r/min～1300r/min速度搅拌1min后，然后滴加2mL浓度为0.75...
【技术特征摘要】
1.鸡传染性支气管炎N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法，其特征在于鸡传染性支气管炎N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法按以下的实验步骤实现: 一、取50 400μ I IBV Η120系病毒液加入无菌去离子水补足至2mL,然后加入到5mL浓度为0.5 2.0mg/mL的过滤除菌后的N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶液中，然后在室温、无菌条件下以搅拌速度为300r/min的条件下搅拌5min,得到混合溶液A ； 二、将混合溶液A在室温、无菌条件下以900r/min 1300r/min速度搅拌Imin后,然后滴加2mL浓度为0.75 1.75mg/mL的过滤除菌后的N，O-羧甲基壳聚糖溶液；然后在搅拌速度不变的条件下磁力搅拌20min 50min,得到混合溶液B ； 三、将混合溶液B于4°C、12000r/min离心20min，去上清，并用温度为4°C的无菌去离子水洗涤沉淀3遍，收集固相物； 四、将固相物加入到4°C的无菌去离子水中，再加入质量浓度为5%的蔗糖脱脂乳溶液，真空冷冻干燥24h，得到鸡传染性支气管炎N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗，即完成鸡传染性支气管炎N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法；其 中步骤一中IBV H120系病毒液为经过浓缩纯化后的鸡传染性支气管炎H120系病毒液，病毒含量为IO6 5EID5tlA).1mL;步骤四中4°C的无菌去离子水与质量浓度为5%的蔗糖脱脂乳溶液的体积比为1:1。2.根据权利要求1所述的鸡传染性支气管炎N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗，其特征在于步骤一和步骤二所述的过滤除菌的方法为:在无菌操作台中通过0.22 μ m的细菌滤器进行过滤。3.根据权利要求1所述的鸡传染性支气管炎N-2-羟丙基三甲基氯...
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