一种猪流行性腹泻病毒基因工程亚单位口服疫苗的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种猪流行性腹泻病毒基因工程亚单位口服疫苗的制备方法，包括以下步骤：1)合成M基因；2)表达载体的构建；3)蛋白的诱导表达；4)重组菌保存实验；5)疫苗的制备。口服免疫的优点是可有效地刺激肠道局部免疫细胞产生分泌型IgA，这尤其适应于肠道粘膜传染病，避免了常规注射疫苗所引起的应激及疫苗吸收问题，作为安全无毒，能在肠道粘膜定居的活载体系统，乳酸乳球菌是最合适的载体系统。口服疫苗通过胃肠黏膜进行抗原递呈，经不同的免疫通路产生与常规注射类似的免疫反应。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
猪流行性腹湾(Porcine epidemic diarrhea, PED)是由猪流行性腹湾病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)弓丨起的以腹 写、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病。PEDV与猪传染性胃肠炎病毒 (transmissible gastroenteritis virus, TGEV)同属于尼多病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus),两种病毒感染后所引起的临床症状极其相似，给养猪业带来严重危害。PEDV经口鼻感染后直接进入小肠，在小肠上皮细胞增殖，引起小肠绒毛吸收上皮细胞变性、损伤、脱落和小肠绒毛萎缩，导致肠内酶活性降低，吸收功能障碍，肠道内渗透压增高，引起渗透性腹泻。造成掉膘、降低饲料利用率，浪费药物和人力等所造成的经济损失是非常严重的。该病是世界性的疾病之一，亚洲、欧洲以及美洲等国家的许多猪阳性率都有很闻。M蛋白是由226个氨基酸组成、分子质量为27KD 32KD的膜糖蛋白，在病毒粒子的组装和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪流行性腹泻病毒基因工程亚单位口服疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1).合成M基因将合成M基因连接到PES载体上，按照合成序列说明书进行酶切，分别克隆至pMD18?T质粒载体上，转化感受态JM109细胞，挑取阳性菌落，OMEGA试剂盒小量提取质粒，酶切鉴定的阳性质粒；2).表达载体的构建将含有正确方向和序列的M基因片段用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ切下，经胶回收纯化与载体质粒pMG36e回收纯化后进行16℃过夜连接；将连接产物与感受态细胞MG1363轻柔混匀后，冰上放置5min，将其转入2mm的预冷电转化杯中，迅速电击，电击参数为电压2.5kV，电击时间为5ms，电击后加入9...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李朝阳，李明义，石乔，
申请(专利权)人：山东信得科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：