用于禽舍疾病的活疫苗制造技术

本发明专利技术涉及制备用于对禽类病毒性疾病实施局部施药治疗的疫苗组合物的方法，至少包括步骤：a）即时混合包括至少一种选自属于所述禽类疾病的一种或多种毒株的病毒的活病毒的疫苗和佐剂稀释剂（DA），其特征在于所述佐剂稀释剂是水包油连续水性相乳剂或水包油微乳剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于禽舍疾病的活疫苗本专利技术涉及制备疫苗组合物的方法，所述疫苗组合物用于对禽类病毒性疾病并且尤其是禽类感染性支气管炎的局部施药治疗。禽类感染性支气管炎是急性的接触传染疾病，其主要通过呼吸症状侵袭家禽。禽类感染性支气管炎病毒(或IBV)是冠状病毒属(Coronavirus),冠状病毒科(Coronaviridae),网巢病毒目(Nidovirales)的成员。此单链RNA病毒具有强的进化能力，并且病毒颗粒可以在外部环境中存活一个月的时间。IBV侵袭所有年龄的家禽并且不仅靶向呼吸道。事实上，IBV首先在气管中复制并且随后可以蔓延至受侵袭的家禽的全身，侵袭多个内部器官。发病率很高并且死亡率可以根据养殖场、养殖条件以及细菌超感染的位点而变化。 临床体征为下面的类型-呼吸的(咳嗽、气管罗音、窦肿大、结膜炎等)；-生殖的(产蛋减少，产生薄的、畸形的或有色的壳的蛋)；-肾脏，强烈的干渴，等。IBV尤其通过呼吸途径或者经由气溶胶传播。毒性物质由鼻排出物和滴下物构成。传播是水平的、直接的(从患病鸟类到敏感性鸟类)或者间接的(经由水、物质等)。IBV对于多数消毒剂敏感，但是最佳的控制手段由联合采用生物安全性步骤(净化步骤、消毒步骤等)的接种疫苗组成。接种疫苗在于用一些量的被杀死的病原体(失活疫苗)或者毒性减小的病原体(减活疫苗)来接种要保护的物种以便引发宿主的生物应答，在随后发生疾病期间对其进行保护。活疫苗通常是足够有效的而不需要使用佐剂。疫苗佐剂是放大对其所结合的抗原的生物应答的赋形剂。例如，可提及氢氧化铝，以及由SEPPIC公司以名称Montanide 出售的油性佐剂。这些佐剂有多种性质。它们也可以仅由脂质体组成，由包含至少一种油相和至少一种水相的乳剂组成，由"福氏(Freund)"佐剂型组成，或者更通常地由不可水溶的无机盐组成。在这些用作疫苗组合物佐剂的无机盐中，可提及例如，氢氧化铝、硝酸铈、硫酸锌、胶体氢氧化铁或氯化钙。氢氧化铝是最常使用的佐剂。这些用作疫苗组合物佐剂的无机盐尤其描述于Rajesh K. Gupta等人的文章"Adjuvants,balance between toxicity and adjuvanticity" ,Vaccine,第 11 卷，第3期，1993，第 293-306 页。疫苗可以通过注射(皮下或肌肉内注射)或局部(例如,通过雾化的大规模疫苗接种，添加到饮用水中用于与喙和鼻孔以及眼鼻复合体相互接触)施用。即使已证明通过注射接种疫苗是有效的，但是它具有不适于家禽养殖场的经济环境(高劳动力成本)的缺点，并且它也造成被处理的家禽的压力，这在产蛋的情形下，在由注射造成物理创伤后，可以造成产蛋中断。在疫苗组合物中以及在旨在防止感染性支气管炎发生的疫苗组合物中使用有效佐剂使得下述成为可能·增加保护性应答的强度，使得能够提供给更佳水平的保护；·延长由疫苗剂量所赋予的保护持续期，为养殖场中的动物提供贯穿其生长的持续更长的保护； 在没有这些免疫应答放大剂而需要两种治疗时，以单次治疗提供足够的保护。节省下来的是待注射的剂量数(减半)，动物处理(劳动)以及在处理动物期间造成的压力(也减半)；·具有以较低的抗原剂量获得与由没有使用佐剂的完整剂量所赋予的效力相当的效力的可能性。因此，疫苗生产厂将以相同的生产能力，能够生产更多的疫苗剂量。同样，可建议现有的包装用于对更大量的动物进行疫苗接种。 目前没有在通过使用活疫苗局部施药而实施疫苗接种技术期间描述或使用佐剂。需要开发也具有上述改善免疫应答的佐剂功能的稀释剂。这些组合物被称作佐剂稀释剂(AD)。在开发AD中遇到的主要困难是所述佐剂稀释剂(AD)保持活疫苗存活以便维持其免疫原性特性的能力。开发用于活疫苗的佐剂的重要因素在于当它们在注射前接触时，佐剂制剂不杀死组成疫苗抗原的活微生物的特异性。AD在市场上可见(例如来自Intervet公司的包括在Diluvac Forte 下的生育酚乙酸酯)并且AD被推荐用于某些活疫苗。此外，活疫苗在法国专利申请FR 2 385 401中是已知的。然而，此活疫苗不是用佐剂物质制备的。迄今为止毋庸置疑，例如通过增加病毒含量，或者通过使用更具免疫原性的毒株，用活疫苗可以产生更大的免疫应答。根据本专利技术，发现了用于制备活病毒疫苗的方法，其特征在于，该活疫苗是通过连续水性相乳剂类型(例如油包水乳剂或微乳剂)的佐剂来制备。出人意料地注意到，水包油(0/W)乳剂作为活疫苗的“稀释剂”的用途对于被疫苗接种的动物中的血清学和免疫应答有正面作用。在此水包油乳剂中，外部水性相允许疫苗(通常是冻干的)易于溶解。本专利技术的另一方面是水包油乳剂作为活疫苗的佐剂稀释剂的用途造成仍具有母体免疫性的幼小动物中的非常高的血清学应答。此出人意料的作用可由乳剂针对动物中存在的抗体的中和作用的对活病毒的保护性作用造成的。本专利技术的一个目的是克服上面指出的现有技术的所有或者一些缺陷。为此目的，本专利技术的主题是制备用于对禽类病毒性疾病进行局部施药治疗的疫苗组合物的方法，至少包括下面的步骤a)即时混合包含至少一种选自属于所述禽类疾病的一种或多株毒株的病毒的活病毒的疫苗和佐剂稀释剂(AD)，其特征在于所述佐剂稀释剂是水包油连续水性相乳剂或水包油微乳剂。术语“禽类病毒性疾病”旨在意指-呼吸病毒性疾病，例如感染性喉气管炎、禽类感染性支气管炎、鸽疱疹病毒感染、火鸡鼻气管炎；-消化病毒性疾病，例如鸭瘟、鸭病毒性肝炎、禽类嗜肝DNA病毒；-病毒性皮肤疾病，例如禽类痘；-神经系统的病毒性疾病，例如禽类脑脊髓炎、东方马脑炎、西尼罗热、狂犬病、"跳跃病"；-全身病毒性疾病，例如鸡痕(avianpseudo-plague)(新城病(Newcastledisease))、马立克氏病(Marek’s disease)、古姆博罗病(Gumboro disease)、禽疫、禽类造白细胞组织增生、鸡感染性贫血病、Derszy病、卵膜软化病(soft_egg disease)。术语“稀释剂”旨在意指为了降低效价、丰富度或其百分比而加入到另一者的物质。为了相关，用于局部施用的疫苗的佐剂稀释剂(ADLAV)将必须 ·在重构后，保持疫苗存活达给定的时间段；·允许制备对于粘膜易于喷涂及润湿(亲水性)的制剂(疫苗组合物)以允许有效且容易的治疗；·相比于没有佐剂而使用的抗原，显著提高抗原的免疫有效性，并且不造成副作用。此外，本专利技术的实施方式可包括下面特征中的一种或多种-如上所限定的方法，其特征在于在所述疫苗中含有的所述病毒属于IBV(感染性支气管炎病毒)的一种或多种毒株；-如上所限定的方法，其特征在于所述疫苗中含有的所述病毒是新城病病毒；-如上所限定的方法，其特征在于所述疫苗中含有的所述病毒属于IBV(感染性支气管炎病毒)的一种或多种毒株、新城病病毒或这些病毒的混合物。新城病病毒，也称作"鸡瘟"、"禽类肺脑炎"或拉尼克赫特病(Ranikhetdisease),是由病毒造成的鸟类人畜共患病。根据毒株的毒性、动物的免疫性和状况以及其他环境因素，发病率和死亡率变化很大。新城病病毒是副粘病毒科(Paramyxoviridae),腿腺炎病毒属(Rubulavirus)的病毒。其是具有单链的RNA病毒(不同于具有8条链的流感本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·贝特朗，S·德维尔，L·迪皮伊，
申请(专利权)人：化工产品开发公司SEPPIC，
类型：
国别省市：