一种环丁烷嘧啶二聚体光修复酶脂质体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种环丁烷嘧啶二聚体光修复酶脂质体的制备方法，包括环丁烷嘧啶二聚体光修复酶的表达、环丁烷嘧啶二聚体光修复酶的纯化和环丁烷嘧啶二聚体光修复酶脂质体的制备三个步骤；该方法采用Q柱对环丁烷嘧啶二聚体光修复酶进行分离，介质价格便宜，而且分离去除谷胱甘肽-S-转移酶的效果更好，更适于环丁烷嘧啶二聚体光修复酶的产业化生产；本发明专利技术还将环丁烷嘧啶二聚体光修复酶制备为脂质体，使环丁烷嘧啶二聚体光修复酶脂质体能穿透细胞膜或者皮肤的屏障进入细胞，大大提高DNA损伤的修复效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于DNA光修复酶制备领域，特别涉及。
技术介绍
环丁烧嘧啶二聚体光修复酶(cuclobutanepyrimidine dimmer photolyase,CPDase)是生物体利用光修复DNA损伤的主要工具。CPDase广泛分布在各种物种之中，是一种分子量 在55-65kD间的单体蛋白，人体内尚未发现CPDase。目前在全球范围内，随着环境破坏与紫外线到达地面的剂量与强度的增加，皮肤病尤其是皮肤癌的发病率逐年上升，原因是太阳光中的紫外线会对生物体内的大分子造成伤害，使DNA产生环丁烷嘧啶二聚体(cuclobutane pyrimidine dimmer, CPD)等光产物。CPD损伤在人体中很难被NER途径等DNA损伤修复系统修复，这势必会使常常暴露于日光下的人群中出现CPD光产物的积累，该损伤的积累将会影响DNA的复制与转录，造成免疫抑制及红斑的产生，长期大量的积累会造成DNA的突变，进而造成癌变，而CPDase可有效清除紫外线照射细胞形成的CPD光产物，在防止紫外线损伤方面具有良好的效果。目前，关于CPDase的制备方法国内外有相关专利和文献进行报道。国外已有文献报本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种环丁烷嘧啶二聚体光修复酶脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a、环丁烷嘧啶二聚体光修复酶的表达：从生物体中克隆到环丁烷嘧啶二聚体光修复酶基因，将该基因构建到原核表达载体p?GEX4T?1中，再转化至大肠杆菌表达菌株E.coliBL21感受态细胞，得到菌液；在3～50ml含氨苄青霉素的LB培养基中加入LB培养基体积1～5％的菌液，37℃培养至OD600为0.6～0.8；再加入IPTG至终浓度为0.1～0.8mol/L，23～28℃诱导表达3～4h，在10000～12000个重力加速度条件下离心沉淀菌体，收集菌体，将菌体进行超声波破碎，破碎后的菌体液于10000～12000个重力加速度...

【技术特征摘要】
1.一种环丁烷嘧啶二聚体光修复酶脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: a、环丁烷嘧啶二聚体光修复酶的表达:从生物体中克隆到环丁烷嘧啶二聚体光修复酶基因，将该基因构建到原核表达载体P GEX4T-1中，再转化至大肠杆菌表达菌株E.coliBL21感受态细胞，得到菌液；在3 50ml含氨苄青霉素的LB培养基中加入LB培养基体积I 5%的菌液，37°C培养至OD6tltl为0.6 0.8 ;再加入IPTG至终浓度为0.1 0.8mol/L，23 28°C诱导表达3 4h，在10000 12000个重力加速度条件下离心沉淀菌体，收集菌体，将菌体进行超声波破碎，破碎后的菌体液于10000 12000个重力加速度条件下离心去除菌体碎片，收集离心分离出的上清液，得到环丁烷嘧啶二聚体光修复酶粗品；其中，超声波破碎的条件为:在200 400W的功率下，工作时间I 5s，间歇时间2-5s，超声破碎20-40min ； b、环丁烷嘧啶二聚体光修复酶的纯化:将步骤a制得的环丁烷嘧啶二聚体光修复酶粗品以100 150ml/h的流速加入到谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱内，用5 10倍柱床体积的洗脱液A以200 400ml/h的流速进行淋洗，再以5 10倍柱床体积的洗脱液A和洗脱液B进行梯度洗脱，得到融合环丁烷嘧啶二聚体光修复酶；再按照l_5U/mg蛋白质的用量，将凝血酶加入到融合环丁烷嘧啶二聚体光修复酶中，37°C酶解I 3h，切除谷胱甘肽-S-转移酶，得到酶切水解液...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹毅，乔代蓉，徐辉，
申请(专利权)人：曹毅，乔代蓉，徐辉，
类型：发明
国别省市：