一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺制造技术

一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺，包括下列步骤：第一步：将蚕蛹用液氮冷冻后取出研磨成粉末，并将粉末倒入一离心管中，加入碳酸氢钠水溶液和蛋白酶K水溶液处理6～12小时；第二步：向所述离心管中加入Tris‑HCl缓冲液，摇匀后离心取上清液；第三步：向所述上清液中加入碳酸钠水溶液，混匀后再离心，取上清液；第四步：向第三步获得的上清液中加入盐酸溶液，调节pH值至中性；第五步：向第四步获得的溶液中加入无水乙醇，混合均匀后，置于‑20℃～‑35℃条件下冷冻处理3～10小时；第六步：将第五步获得的溶液离心收集沉淀，然后使乙醇挥发，最后冷冻干燥制成冻干粉。本发明专利技术的工艺具有提取液用量少、耗时短、针对性强、杂质少、提取率高的优点。

Extraction and purification of a kind of Polysaccharide from silkworm chrysalis

An extraction and purification of Polysaccharide from silkworm pupa, which comprises the following steps: the first step: silkworm chrysalis with liquid nitrogen freezing out after grinding into powder, and pour the powder into a centrifuge tube, adding sodium bicarbonate solution and protease treated with aqueous solution of K 6 to 12 hours; the second step: to the centrifuge tube with Tris HCl buffer, shake after centrifugation supernatant; the third step: adding sodium carbonate aqueous solution to the supernatant, mixing after centrifugation, the supernatant; the fourth step: adding hydrochloric acid solution to the third step of the supernatant obtained, adjusting the pH value to neutral; the fifth step: add ethanol solution to fourth further, after mixing, in 20 ~ 35 deg.c freezing treatment 3 ~ 10 hours; the sixth step: fifth step solution collected by centrifugation, then the evaporation of ethanol, finally frozen Dry powder is made from dry. The technology of the invention has the advantages of small amount of extraction liquid, short time consumption, strong pertinence, little impurity and high extraction rate.

【技术实现步骤摘要】
一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺
本专利技术涉及一种活性成分的提取和纯化工艺，特别涉及一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺，属于药物原料深加工

技术介绍
蚕蛹，别名小蜂儿，为蚕蛾科动物家蚕蛾的蛹，其表面有不太规则的皱纹，并且呈现出棕黄至棕褐色，具有杀虫疗疳，生津止渴等功能。多糖是由多个单糖缩合脱水而形成的，它是一类化学结构比较复杂的天然的高分子化合物，它的分子量从几万到几千万不等。它是所有有机生命体不可缺少的成分，它被认为是构成生命的四大基本物质之一，而且其具有较好的增强免疫力、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血压、降血糖、增强骨髓的造血机能等功能，它在预防和治疗疾病的领域具有较好的发展前景。多糖在治疗癌症时，它不像其它的化疗药物一样直接杀死癌细胞，而是通过增加人体的免疫，间接的达到对肿瘤细胞的抑制和消灭作用，所以多糖具有对正常细胞几乎无毒副作用、安全性高、疗效好等特点。多糖的生物活性十分丰富，其在临床上应用也逐渐增多，并且多糖几乎无毒副作用，它的来源比较广，它的性质在高温下比较稳定，不像蛋白质那样高温容易变性。近年来多糖的开发和利用也逐渐的增多，成为天然药化和中药学研究的热点。多糖的提取方法有很多种，提取溶液一般都是碱性溶液、微酸溶液或者蒸馏水等，但一般不用强酸溶液，防止糖苷键的水解断裂。常用的提取方法有水提醇沉法、超声法、微波法、超临界萃取法等。传统的蚕蛹多糖的提取方法采用水提醇沉法，而微波提取多糖相对于水提醇沉法具有加热均匀，提取液用量少、耗时少、针对性强、污染小、提取率高的优点，而且微波法有利于提取中药中热不稳定的活性物质。但是上述方法提取的多糖仍然存在大量杂质，如蛋白质、色素等，它们的存在极大的影响了多糖的药理作用，而额外的杂质去除步骤会破坏多糖的结构，从而影响多糖提取物的纯度。
技术实现思路
本专利技术的目的是：为了克服现有技术的缺陷，获得一种提取液用量少、耗时短、针对性强、杂质少、提取率高的多糖提取工艺，本专利技术提供了一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺，包括下列步骤：第一步：将蚕蛹用液氮冷冻20～40分钟后取出研磨成粉末，并将粉末倒入一离心管中，加入质量分数为3％～12％的碳酸氢钠水溶液和0.02～0.08倍体积的蛋白酶K水溶液，55～58℃条件下处理6～12小时；第二步：向所述离心管中加入等体积的Tris-HCl缓冲液，摇匀后再9000～12000r/min离心25～35min，取上清液；第三步：向所述上清液中加入1～1.2倍体积的碳酸钠水溶液，混匀后再9000～12000r/min离心25～35min，取上清液；所述碳酸钠水溶液的浓度为1.4～2.5mol/L；第四步：向第三步获得的上清液中加入0.01～0.05mol/L的盐酸溶液，调节pH值至中性；第五步：向第四步获得的溶液中加入1～1.2倍体积的无水乙醇，混合均匀后，置于-20℃～-35℃条件下冷冻处理3～10小时；第六步：将第五步获得的溶液12000～14000r/min离心15～25min，收集沉淀，然后使乙醇挥发，最后冷冻干燥制成冻干粉。优选的技术方案为：包括下列步骤：第一步：将蚕蛹用液氮冷冻30分钟后取出研磨成粉末，并将粉末倒入一离心管中，加入质量分数为9％的碳酸氢钠水溶液和0.05倍体积的蛋白酶K水溶液，56℃条件下处理10小时；第二步：向所述离心管中加入等体积的Tris-HCl缓冲液，摇匀后再10000r/min离心30min，取上清液；第三步：向所述上清液中加入1倍体积的碳酸钠水溶液，混匀后再12000r/min离心30min，取上清液；所述碳酸钠水溶液的浓度为2.2mol/L；第四步：向第三步获得的上清液中加入0.04mol/L的盐酸溶液，调节pH值至中性；第五步：向第四步获得的溶液中加入1.2倍体积的无水乙醇，混合均匀后，置于-30℃条件下冷冻处理6小时；第六步：将第五步获得的溶液13000r/min离心20min，收集沉淀，然后使乙醇挥发，最后冷冻干燥制成冻干粉。由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有的优点是：1、本专利技术的工艺具有提取液用量少、耗时短、针对性强、杂质少、提取率高的优点。2、本专利技术的工艺提取的蚕蛹多糖活性高，可用作糖尿病的药物或保健食品的原料。具体实施方式以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本实施例所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效。实施例1：一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺，所述工艺包括以下步骤：(1)取5月春蚕蚕蛹，迅速置于液氮罐中，用液氮冷冻20分钟后取出研磨成粉末，并将粉末倒入离心管中，加入质量分数为3％的碳酸氢钠水溶液，0.02倍体积的蛋白酶K水溶液，55℃处理6小时；碳酸氢钠水溶液的加入量以浸没粉末为准，蛋白酶K水溶液的浓度为50～100微克/毫升，在本实施例中为50微克/毫升。(2)取步骤(1)处理后的产物，加等体积的Tris-HCl溶液，上下颠倒混合均匀，9000r/min离心25min，取上清液；Tris-HCl溶液的体积与离心管内所有的材料的总体积相等。(3)向步骤(2)获得的上清液中加入1倍体积的碳酸钠水溶液，碳酸钠水溶液的浓度为1.4mol/L，混合均匀后，9000r/min离心25min，取上清液；(4)向步骤(3)收集的上清液中加入0.01mol/L的盐酸溶液，滴定至中性；(5)向步骤(4)滴定后的溶液中加入1倍体积的无水乙醇，混合均匀后，置于-20℃条件下冷冻处理3小时；(6)将步骤(5)处理后的溶液12000r/min离心15min，收集沉淀，在室温下散去乙醇，然后冷冻干燥，制成冻干粉，并在-20℃保存。实施例2：一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺，所述工艺包括以下步骤：(1)取5月春蚕蚕蛹，迅速置于液氮罐中，冷冻30分钟后取出研磨成粉末，并将粉末倒入离心管中，加入质量分数为9％的碳酸氢钠水溶液，0.05倍体积的蛋白酶K水溶液，56℃处理10小时；碳酸氢钠水溶液的加入量以浸没粉末为准，蛋白酶K水溶液的浓度为50～100微克/毫升，在本实施例中为60微克/毫升。(2)取步骤(1)处理后的产物，加等体积的Tris-HCl溶液，上下颠倒混合均匀，10000r/min离心30min，取上清液；(3)向步骤(2)获得的上清液中加入1倍体积的碳酸钠水溶液，碳酸钠的终浓度为2.2mol/L，混合均匀后，12000r/min离心30min，取上清液；(4)向步骤(3)收集的上清液中加入0.04mol/L的盐酸溶液，滴定至中性；(5)向步骤(4)滴定后的溶液中加入1.2倍体积的无水乙醇，混合均匀后，置于-30℃条件下冷冻处理6小时；(6)将步骤(5)处理后的溶液13000r/min离心20min，收集沉淀，在室温下散去乙醇，然后冷冻干燥，制成冻干粉，并在-15℃保存。实施例3：一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺，所述工艺包括以下步骤：(1)取6月春蚕蚕蛹，迅速置于液氮罐中，冷冻35分钟后取出研磨成粉末，并将粉末倒入离心管中，加入质量分数为8％的碳酸氢钠水溶液，0.06倍体积的蛋白酶K水溶液，5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺，其特征在于：包括下列步骤：第一步：将蚕蛹用液氮冷冻20～40分钟后取出研磨成粉末，并将粉末倒入一离心管中，加入质量分数为3%～12%的碳酸氢钠水溶液和0.02～0.08倍体积的蛋白酶K水溶液，55～58℃条件下处理6～12小时；第二步：向所述离心管中加入等体积的Tris‑HCl缓冲液，摇匀后再9000～12000r/min离心25～35min，取上清液；第三步：向所述上清液中加入1～1.2倍体积的碳酸钠水溶液，混匀后再9000～12000r/min离心25～35min，取上清液；所述碳酸钠水溶液的浓度为1.4～2.5mol/L；第四步：向第三步获得的上清液中加入0.01～0.05 mol/L的盐酸溶液，调节pH值至中性；第五步：向第四步获得的溶液中加入1～1.2倍体积的无水乙醇，混合均匀后，置于‑20℃～‑35℃条件下冷冻处理3～10小时；第六步：将第五步获得的溶液12000～14000r/min离心15～25min，收集沉淀，然后使乙醇挥发，最后冷冻干燥制成冻干粉。

【技术特征摘要】
1.一种蚕蛹多糖的提取和纯化工艺，其特征在于：包括下列步骤：第一步：将蚕蛹用液氮冷冻20～40分钟后取出研磨成粉末，并将粉末倒入一离心管中，加入质量分数为3%～12%的碳酸氢钠水溶液和0.02～0.08倍体积的蛋白酶K水溶液，55～58℃条件下处理6～12小时；第二步：向所述离心管中加入等体积的Tris-HCl缓冲液，摇匀后再9000～12000r/min离心25～35min，取上清液；第三步：向所述上清液中加入1～1.2倍体积的碳酸钠水溶液，混匀后再9000～12000r/min离心25～35min，取上清液；所述碳酸钠水溶液的浓度为1.4～2.5mol/L；第四步：向第三步获得的上清液中加入0.01～0.05mol/L的盐酸溶液，调节pH值至中性；第五步：向第四步获得的溶液中加入1～1.2倍体积的无水乙醇，混合均匀后，置于-20℃～-35℃条件下冷冻处理3～10小时；第六步：将第五步获得的溶液12000～14000r/min离心15～25...

【专利技术属性】
技术研发人员：史月龙，曾宋君，吴英亮，刘文斌，吴坤林，汤静，
申请(专利权)人：南京仙草堂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32