利于多糖‑ADH衍生物质量控制的工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种利于多糖‑ADH衍生物质量控制的工艺，包括流脑A群菌种的培养、发酵、纯化，以及流脑A群荚膜多糖的活化和衍生；其中，流脑A群菌种的培养、发酵、纯化具体为：开启流脑A群菌种传代至氯化血红素流脑半综合培养基上，放入二氧化碳细胞培养箱中，36.5℃，8%CO2培养；将培养得到的流脑A群种子接种到种子罐，恒温搅拌通气培养后接种入发酵罐后，恒温36.5℃，深层通气240rpm搅拌培养，培养流脑A群细菌至对数生长期后期或静止期前期，甲醛杀菌后去除菌体，收集上清液；纯化后得到多糖，且苯酚的用量为粗糖的3/4（v/v）。本发明专利技术所示优化后的工艺一方面控制流脑A群发酵液中的核酸及蛋白等杂质成分含量较低，另一方面降低苯酚的用量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于流脑A群疫苗制备领域，具体地，涉及一种利于多糖-ADH衍生物质量控制的工艺。
技术介绍
脑膜炎奈瑟菌（N. meningitidis）简称为脑膜炎球菌（meningococcus），是流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原菌。一百多年来，流脑一直在世界各地流行或散在发生，是人类的主要急性呼吸道传染病之一。很多国家经过长期的流行病学监测，发现此病具有周期性流行的特点。意大利发现1915-1934年在其国内发生了三次流行。我国也出现过五次全国性大流行，在1938、1949、1959、1967及1977年，约每8-10年出现一次流行高峰。据WHO报告，近十余年来发病率平均为2.5/10万。当今世界各大洲发病率在1/10万-10/10万，国内1967年的大流行，全国发病率及病死率均较高。发病数占传染数的第四位，而死亡数占全部传染病死亡数的60%，严重危害人民健康及影响计划生育。其主要的特点为：易感人群主要是为儿童，以爆发型病死率最高，可达40%-60%。流脑的预防，主要采取以疫苗接种为主的预防措施。1980年，我国正式生产A群NM多糖疫苗，推广应用取得了很好的效果。但多糖疫苗对2本文档来自技高网...

【技术保护点】
利于多糖‑ADH衍生物质量控制的工艺，其特征在于，包括以下步骤：1）开启菌种及传代：开启流脑A群菌种传代至氯化血红素流脑半综合培养基上，放入二氧化碳细胞培养箱中，36.5℃，8%CO2培养，二代采用半综合固体培养基培养，三代采用流脑半综合液体培养基在恒温振荡摇床中培养；2）接种到种子罐培养：将上述步骤1）培养得到的流脑A群种子接种到种子罐，恒温搅拌通气培养，培养至第五代；3）发酵罐发酵：将上述步骤2）培养得到的流脑A群五代种子接种入发酵罐后，恒温36.5℃，深层通气240rpm搅拌培养，中途补加葡萄糖溶液为流脑A群细菌生产荚膜多糖提供原料，培养流脑A群细菌至对数生长期后期或静止期前期，此时菌浓...

【技术特征摘要】
1.利于多糖-ADH衍生物质量控制的工艺，其特征在于，包括以下步骤：1）开启菌种及传代：开启流脑A群菌种传代至氯化血红素流脑半综合培养基上，放入二氧化碳细胞培养箱中，36.5℃，8%CO2培养，二代采用半综合固体培养基培养，三代采用流脑半综合液体培养基在恒温振荡摇床中培养；2）接种到种子罐培养：将上述步骤1）培养得到的流脑A群种子接种到种子罐，恒温搅拌通气培养，培养至第五代；3）发酵罐发酵：将上述步骤2）培养得到的流脑A群五代种子接种入发酵罐后，恒温36.5℃，深层通气240rpm搅拌培养，中途补加葡萄糖溶液为流脑A群细菌生产荚膜多糖提供原料，培养流脑A群细菌至对数生长期后期或静止期前期，此时菌浓度达到100-200亿/mL，甲醛杀菌后去除菌体，收集发酵液上清液；4）一次纯化：加入十六烷基三甲基溴化铵至终浓度1.0g/L，充分搅拌后静置过夜，离心收集多糖，沉淀的多糖用氯化钙溶液搅拌3小时使多糖和十六烷基三甲基溴化铵解离，离心收集上清，上清加入乙醇至终浓度为25%（v/v），2-8℃静置过夜，离心收集上清，上清加入乙醇至终浓度为75-80%（v/v），充分振摇使多糖沉...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍长华，郑利，谭照德，
申请(专利权)人：成都欧林生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51