一种B群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法技术

本发明专利技术公开了一种B群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法，避免了传统工艺采用去污剂EDTA带来的免疫原性蛋白损失以及造成的工艺成本高的技术问题。本发明专利技术采用独有的OMV溶出技术，不使用EDTA，能够很好地溶出有效抗原蛋白成分，既减少了细菌胞内核酸等杂质成分溶出，减轻下游纯化工艺的压力，同时还能够保留外膜囊泡结构的完整性，有效保存了其免疫原性。本方法能够有效去除核酸、脂多糖（LPS）等杂质，能够减少接种发热反应，提高了疫苗的安全性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞生物学，具体涉及一种b群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法。

技术介绍

1、脑膜炎奈瑟菌(neisseria meningitidis，nm)，俗称脑膜炎球菌(meningococcus)，是一种致病性革兰氏阴性双球菌。菌体呈现肾型或豆型，菌体直径0.6μm～0.8μm,无芽孢，无鞭毛。

2、流行的菌群主要有a、b、c和w135群，a群流脑病例构成总体呈减少趋势，b群和w135群呈上升趋势。全球上市的流脑疫苗主要有a群、a+c群以及a、c、w135及y群的四价疫苗等，这些疫苗的有效免疫原成分均为脑膜炎球菌的荚膜多糖。然而，b群脑膜炎球菌荚膜多糖与人n-乙酰神经氨酸聚合物结构相似，可能会引起严重的自身免疫反应，且b群脑膜炎球菌荚膜多糖免疫原性低，难以在儿童中引起有效免疫保护作用，因此不适合用作疫苗候选抗原。

3、已上市的b群脑膜炎球菌疫苗主要有两种，一种是以外膜蛋白(omp)为主要成分的外膜囊泡(omv)疫苗；另一种是基于反向疫苗学技术的重组蛋白疫苗。

4、omv是革兰氏阴性菌表面分泌的产物，是细菌外膜在一定本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种B群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的B群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法，其特征在于，所述（1）中复苏的方法包括：取B群脑膜炎球菌440910型工作种子一支，接种至装有流脑半综合液体培养基的细胞培养瓶中，放置于二氧化碳细胞培养箱，于35～38℃培养18～26小时。

3.根据权利要求1所述的B群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法，其特征在于，所述（2）中扩增培养条件为：恒温振荡培养箱，150～250rpm转速下于35～38℃培养3～5小时。

4.根据权利要求1所述的B群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法，...

【技术特征摘要】

1.一种b群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的b群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法，其特征在于，所述（1）中复苏的方法包括：取b群脑膜炎球菌440910型工作种子一支，接种至装有流脑半综合液体培养基的细胞培养瓶中，放置于二氧化碳细胞培养箱，于35～38℃培养18～26小时。

3.根据权利要求1所述的b群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法，其特征在于，所述（2）中扩增培养条件为：恒温振荡培养箱，150～250rpm转速下于35～38℃培养3～5小时。

4.根据权利要求1所述的b群脑膜炎球菌外膜囊泡蛋白制备方法，其特征在于，所述（3）中发酵条件为通气量为10～100l/min，搅拌转速为100～500rpm，温度在35～38℃，培养6～8小时。

5.根据权利要求1所述的b群脑膜炎球菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴强，黄义帆，李艳，唐雨琴，董重，陶杨，王文，樊钒，秦星瑶，陈飞，游正梅，
申请(专利权)人：成都欧林生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：