本发明专利技术提供一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂及其生产工艺，所述的生物制剂的抗病毒活性为2.65×104IU/ml～9.24×104 IU/ml。所述的生产工艺，包括以下步骤：枯草芽孢杆菌活化、种子液培养、发酵、制得生物制剂。所述的发酵步骤采用的发酵培养基包括以下组分：香菇多糖5～15g/L、蔗糖2～8g/L、棉籽粉6～10g/L、蛋白胨9～15g/L、磷酸氢二钾0.1～0.5g/L、氯化钠0.1～0.5g/L、无水氯化钙0.1～0.7 g/L，去离子水补足余量。本发明专利技术生物制剂的抗病毒活性较香菇多糖提高1305～4552倍，且稳定性好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种采用香菇多糖制备抗病毒的生物制剂的工艺，具体地说，涉及一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂及其生产工艺，属于生物发酵工程
技术介绍
禽类病毒性传染病是制约家禽养殖业发展的重要因素之一，给养禽业造成巨大经济损失，如禽流感、新城疫等。目前国内外应用于禽类病毒病的化学药物主要是金刚烷胺和利巴韦林制剂，临床疗效不确切，而且存在如残留、影响蛋禽产蛋率恢复等毒副作用。业界开始关注绿色、无残留、无毒副作用的生物产品作为新药。香菇多糖是从香菇子实体中提取的有效活性成分，在香菇各组分中有决定性的作用，具有抗肿瘤、免疫调节、抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗氧化等多方面的药理活性。香菇多糖刺激巨噬细胞、T淋巴细胞等免疫细胞的增值、分化，从而提高宿主的免疫力来达到抗肿瘤、抗病毒等目的。目前发现香菇多糖对病毒感染有一定的抑制作用。但是，天然香菇多糖只能通过宿主为介导，其本身的抗病毒能力比较低。目前对提高香菇多糖抗病毒活性研究大多采用化学修饰法，包括硫酸化、磷酸化、羧甲基化以及金属离子螯合法等。但是，上述方法存在反应条件要求较高，反应不均一，产物取代度低等问题，导致其抗病毒活性不高，实际应用过程中，抗病效果不理想。现有技术具有以下缺陷：香菇多糖以及香菇多糖衍生物的抗病毒活性较低。
技术实现思路
本专利技术针对以上不足，本专利技术提供一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂及其生产工艺，以香菇多糖为原料，利用发酵工艺形成生物制剂提高抗病毒活性，实现以下专利技术目的：1、提高香菇多糖制备的生物制剂的抗病毒活性；2、提高香菇多糖制备的生物制剂抗病毒活性的稳定性。为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案如下：一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂，所述的生物制剂的抗病毒活性为2.65×104IU/ml～9.24×104IU/ml。以下是对上述技术方案的进一步改进：一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂的生产工艺，包括以下步骤：枯草芽孢杆菌活化、种子液培养、发酵、制得生物制剂。所述的发酵：采用的发酵培养基的组分包括香菇多糖，所述的香菇多糖：纯度为88～90%。所述的发酵培养基包括以下组分：香菇多糖5～15g/L、蔗糖2～8g/L、棉籽粉6～10g/L、蛋白胨9～15g/L、磷酸氢二钾0.1～0.5g/L、氯化钠0.1～0.5g/L、无水氯化钙0.1～0.7g/L，去离子水补足余量。所述的发酵培养基包括以下组分：香菇多糖10g/L、蔗糖8g/L、棉籽粉10g/L、蛋白胨12g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、氯化钠0.1g/L、无水氯化钙0.1g/L，去离子水补足余量。所述的发酵步骤：发酵温度为28～34℃，发酵液PH为6～7.5，发酵转速为120～240rpm，发酵时间为16～28h。所述种子液培养步骤：将活化后的枯草芽孢杆菌接入到种子培养基中，恒温振荡培养16～18h，培养温度为34～36℃，震荡速率为200～220rpm。所述种子培养基：葡萄糖15g/L、香菇多糖5g/L、酵母粉10g/L、蛋白胨20g/L、去离子水补足余量。所述的制得生物制剂步骤：发酵液在10000～11000rpm条件下离心分离10～12min，得到的上清液经0.22μm滤器过滤，得到生物制剂。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术生物制剂的抗病毒活性较香菇多糖提高1305～4552倍，其抗病毒活性达到2.65×104IU/ml～9.24×104IU/ml；2、本专利技术生物制剂的抗病毒活性稳定性高，存放12个月后产品活性基本没有损失；3、本专利技术生物制剂可有效预防禽类的病毒性疾病，有效保护率达到100%；4、本专利技术生物制剂可有效治疗禽类病毒性疾病，对感染病毒性肝炎初期的鸭治愈率达85%；5、本专利技术制备生物制剂的方法环保无毒；6、本专利技术制备生物制剂的方法工艺简单，原材料成本低廉，而且全发酵过程可控，不受外部环境条件限制，适合工业化生产及推广应用。具体实施方式实施例中所述的枯草芽孢杆菌发酵菌种，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏号CICC10071。实施例1一种采用香菇多糖制备抗病毒生物制剂的工艺步骤1枯草芽孢杆菌活化取1支枯草芽孢杆菌冻干粉，将冻干粉加入到提前制备好的1mlYPD液体培养基中，摇晃冲散；冲散后的菌液在YPD固体培养基上进行平板划线，置于37℃温箱中培养24h；所述YPD液体培养基的组分如下：葡萄糖20g/L、酵母粉10g/L、蛋白胨20g/L、去离子水补足余量。所述YPD固体培养基的组分如下：葡萄糖20g/L、酵母粉10g/L、蛋白胨20g/L、琼脂20g/L、去离子水补足余量。步骤2种子液培养采用香菇多糖制备种子培养基，采用步骤1活化的菌种进行发酵培养；所述种子培养基的组分包括：葡萄糖15g/L、香菇多糖5g/L、酵母粉10g/L、蛋白胨20g/L、去离子水补足余量；所述的香菇多糖：纯度为88%；将种子培养基各组分混合均匀即得种子培养基；所述发酵培养：用无菌的接种环挑取活化后的枯草芽孢杆菌单菌落，接入到种子培养基中，接种后在恒温振荡培养箱中培养16h，培养温度为35℃，震荡速率为200rpm；得到种子液。步骤3发酵1）制备发酵培养基所述发酵培养基包括以下的组分：香菇多糖15g/L、葡萄糖5g/L、蛋白胨12g/L、尿素8g/L、氯化钠0.5g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、去离子水补足余量；所述的香菇多糖：纯度为88%；按培养基配方称取各组分，混合并搅拌均匀，115℃条件下灭菌30min；2）制备发酵液将发酵液PH调节至7.0～7.2，将种子液接种于摇瓶中，接种比例为体积比1：10；摇瓶的容积为250ml；摇瓶的装液量为75ml，即：装液量为摇瓶容积的3/10；在发酵温度32℃、转速200rpm条件下发酵培养24h，得到发酵液。步骤4制得生物制剂取步骤3制得的发酵液，10000rpm条件下离心分离10min，得到菌体和上清液，将上清液经0.22μm滤器过滤，得到的滤液即为生物制剂产品。结果检测：对照组1：未经发酵的香菇多糖溶液，浓度为15g/L。对照组2：生物制剂的制备方法与实施例1相同，只改变种子液培养步骤中的种子培养基和发酵步骤中的发酵培养基为：种子培养基：葡萄糖20g/L、酵母粉10g/L、蛋白胨20g/L、去离子水补足余量；发酵培养基：葡萄糖20g/L、蛋白胨12g/L、8g/L尿素、氯化钠0.5g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、去离子水补足余量。经试验，制备的生物制剂的抗病毒活性检测结果见表1；表1生物制剂的抗病毒活性由表1可知，采用本实施例发酵方法制备生物制剂的抗病毒活性为2.65×104IU/ml，生物制剂的抗病毒活性较香菇多糖提高1305倍。本专利技术采用细胞病变抑制法的CEF/VSV系统检测生物制剂的抗病毒活性，进而计算出样品的效价，参照《中华人民共和国药典》2005年版。实施例2发酵培养基的碳源单因素分析实验采用实施例1的方法制备生物制剂，只改变发酵步骤中发酵培养基的碳源进行实施例2-5；实施例1采用的发酵培养基的碳源为15g/L香菇多糖+5g/L葡萄糖实施例2-5采用的发酵培养基的碳源，见表2；表2实本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂，其特征在于：所述的生物制剂的抗病毒活性为2.65×104IU/ml～9.24×104 IU/ml。
【技术特征摘要】
1.一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂，其特征在于：所述的生物制剂的抗病毒活性为2.65×104IU/ml～9.24×104IU/ml。2.根据权利要求1所述的一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂的生产工艺，其特征在于：包括以下步骤：枯草芽孢杆菌活化、种子液培养、发酵、制得生物制剂。3.根据权利要求2所述的一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂的生产工艺，其特征在于：所述的发酵：采用的发酵培养基的组分包括香菇多糖，所述的香菇多糖：纯度为88～90%。4.根据权利要求3所述的一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂的生产工艺，其特征在于：所述的发酵培养基包括以下组分：香菇多糖5～15g/L、蔗糖2～8g/L、棉籽粉6～10g/L、蛋白胨9～15g/L、磷酸氢二钾0.1～0.5g/L、氯化钠0.1～0.5g/L、无水氯化钙0.1～0.7g/L，去离子水补足余量。5.根据权利要求3所述的一种采用香菇多糖制备的抗病毒生物制剂的生产工艺，其特征在于：所述的发酵培养基包括以下组分：香菇多糖10g/L、蔗糖8g/L、棉籽粉10g/L、蛋白胨...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭海岩，刘刚，王茂超，王兴业，韩国英，刘东东，郝利利，郭芹，王红军，
申请(专利权)人：山东仙普爱瑞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。