一种多糖及其制法和用途制造技术

一种多糖，其特征是：它由葡萄糖和糖醛酸构成，不含蛋白质和核酸，分子量为１．６×１０↑［６］Ｄａ～２．６×１０↑［６］Ｄａ，端基碳为α－构型，旋光度［α］↓［Ｄ］↑［ｔ］＝＋１３１．７°～＋１５９．４°，多糖的基本骨架由１→４糖苷键连接的葡萄糖构成，每１７个葡萄糖残基有一个侧链，侧链为一个葡萄糖分子或一个糖醛酸分子，葡萄糖和糖醛酸的比例为２∶１，均通过１→６糖苷键与主链葡萄糖相连接，每摩尔多糖中葡萄糖与糖醛酸的物质的量之比为５３∶１。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种多糖，具体地说是涉及一种海洋真菌炭团菌多糖YCP及它的制法和用途。
技术介绍
真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离出的、可以控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的一类活性多糖。真菌多糖作为药物研究始于50年代，在60年代以后成为免疫促进剂而引起人们的兴趣。真菌多糖是目前公认的有较高效应的免疫增强剂，许多真菌多糖制剂已广泛应用于临床，在自身免疫性疾病、免疫功能低下症以及肿瘤的治疗等方面取得了令人鼓舞的临床效果。但目前对陆生生物(动物、植物、微生物等)多糖的研究开始的较早，已从这些生物中分离纯化得到了多种多糖，并对它们的结构与功能进行了比较广泛的研究，例如目前已用于临床的香菇多糖、茯苓多糖、云芝多糖以及裂褶菌多糖等真菌多糖均来源于陆生，而对海洋生物多糖的研究多局限于已能规模养殖或易于采集的海洋生物的多糖。另外，海洋天然产物的研究目前多见于结构类型各异的中小分子，对绝大多数海洋生物富含的多糖尚未给予足够的重视，主要集中于甲壳素、藻类多糖等，而对海洋微生物产生的新活性多糖的研究报道极少。多糖的结构可分为一级、二级、三级和四级结构。它的一级结构是指其单糖残基的组成、排列序列和连接方式等；二级结构是指多糖骨架链间以氢键结合形成的各种聚合体，这只关系到其分子主链的构象，不涉及侧链的空间排布；三级结构是指由多糖中糖残基中的羟基、羧基、氨基及其它官能团间通过非共价作用而导致的有序、规则而粗大的空间构象；四级结构是指多糖多聚链间以非共价作用力而结合形成的聚集体。多糖的结构分析完整的多糖结构分析包括对多糖的一级结构和高级结构的分析。目前在多糖一级结构的分析中大多采用传统的化学方法与物理方法相结合，可基本阐明某一多糖的一级结构的大致特征。近年来我们从一株海洋真菌(Hypoxylon sp.)菌丝体中经提取纯化获得了一种多糖(简称YCP)并对其理化性质、化学结构、生物学活性进行了比较广泛的深入研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种多糖，它的制法及在制备药物中的用途。本专利技术的具体的技术方案如下一种多糖，它由葡萄糖和糖醛酸构成，不含蛋白质和核酸，分子量为1.6×106Da～2.6×106Da，端基碳为α-构型，旋光度Dt＝+131.7°～+159.4°，多糖的基本骨架由1→4糖苷键连接的葡萄糖构成，每17个葡萄糖残基有一个侧链，侧链为一个葡萄糖分子或一个糖醛酸分子，葡萄糖和糖醛酸的比例为2∶1，均通过1→6糖苷键与主链葡萄糖相连接，每摩尔多糖中葡萄糖与糖醛酸的物质的量之比为53∶1，它有如下结构式 *侧链上GlcpA∶Glc摩尔比为1∶2一种上述多糖的制法，它由下列步骤组成步骤1.称取海洋真菌炭团菌湿菌体1000g，加水置组织捣碎器中捣碎，补足水至2000～4000mL，60～90℃水浴提取8～20小时，间歇搅拌，纱布滤去残渣，2000～4000r.p.m.离心去沉淀，步骤2.将步骤1所得的提取液浓缩至500～2000mL，加入浓缩液1/4～1/7体积的氯仿及1/15～1/30体积的正丁醇，剧烈振荡，静置分层，除去下层有机溶剂层及中间层，保留水层，反复萃取2～5次，步骤3.将步骤2所得的水溶液对自来水透析24～48小时，透析液浓缩至500～2000mL，逐步加入1～4倍量乙醇，4℃放置2～10小时，离心，沉淀依次以无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，真空干燥得多糖YCP粗品，步骤4.取多糖YCP粗品50mg，充分溶解，上已平衡好的离子交换柱(DEAE-32)，先以50～300mL蒸馏水洗涤，再以0～2mol/L NaCl溶液梯度洗脱，分部收集，硫酸蒽酮比色法跟踪检测，合并相同组分。离子交换柱分离所得多糖组分上分子筛柱层析(Sephacryl S-400)，分部收集，硫酸蒽酮比色法跟踪检测，合并相同组分，冷冻干燥，即得本专利技术的多糖YCP。本专利技术的多糖YCP对小鼠移植瘤Heps和S180有明显的抑制作用，因此本专利技术的多糖YCP可以应用于制备治疗肿瘤的药物。四附图说明图1多糖YCP的高效液相色谱纯度鉴定图谱；图2多糖YCP的单糖组分的薄层层析图谱，其中1.混合糖 2.鼠李糖 3.甘露糖 4.葡萄糖 5.半乳糖 6.YCP 7.糖醛酸；图3多糖YCP的甲基化分析步骤示意图；图4多糖YCP高碘酸消耗-时间曲线；图5多糖YCP的红外光谱分析图谱；图6多糖YCP的氢核磁共振光谱图；图7多糖YCP的碳核磁共振光谱图；图8多糖YCP与刚果红络合实验最大吸收波长曲线。五具体实施例方式实施例1.多糖YCP的提取、分离纯化、鉴定称取湿菌体1000g，加水置组织捣碎器中捣碎，补足水至2000mL，60℃水浴提取20小时。间歇搅拌，纱布滤去残渣，2000r.p.m.离心去沉淀。提取液浓缩至500mL，加入浓缩液1/4体积的氯仿及1/15体积的正丁醇，剧烈振荡，静置分层，除去下层有机溶剂层及中间层，保留水层。反复萃取2次。所得溶液对自来水透析24小时。透析液浓缩至500mL，逐步加入等体积的乙醇，4℃放置2小时。离心，沉淀依次以无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，真空干燥得多糖YCP粗品。取多糖YCP粗品50mg，充分溶解，上已平衡好的离子交换柱(DEAE-32)，先以50mL蒸馏水洗涤，再以0～2mol/L NaCl溶液梯度洗脱，分部收集，硫酸蒽酮比色法跟踪检测，合并相同组分。离子交换柱分离所得多糖组分上分子筛柱(Sephacryl S-400)层析，分部收集，硫酸蒽酮比色法跟踪检测，合并相同组分，冷冻干燥，即得本专利技术的多糖YCP。HPLC纯度鉴定采用Shodex SUGAR KS-805(8mmID×300mm)高效液相色谱柱和示差折光检测器，流动相为H2O，YCF1mg/ml进样20μl，流速1ml/min。结果见图1。HPLC纯度鉴定结果为一个对称峰，表明所得的多糖为单一组分。实施例2.多糖YCP的提取、分离纯化、鉴定称取湿菌体1000g，加水置组织捣碎器中捣碎，补足水至3000mL，80℃水浴提取12小时。间歇搅拌，纱布滤去残渣，3000r.p.m.离心去沉淀。提取液浓缩至1000mL，加入浓缩液1/5体积的氯仿及1/25体积的正丁醇，剧烈振荡，静置分层，除去下层有机溶剂层及中间层，保留水层。反复萃取4次。所得溶液对自来水透析36小时。透析液浓缩至1000mL，逐步加入3倍体积的乙醇，4℃放置6小时。离心，沉淀依次以无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，真空干燥得多糖粗品。取粗品50mg，充分溶解，上已平衡好的离子交换柱(DEAE-32)，先以200mL蒸馏水洗涤，再以0～2mol/L NaCl溶液梯度洗脱，分部收集，硫酸蒽酮比色法跟踪检测，合并相同组分。离子交换柱分离所得多糖YCP组分上分子筛柱层析(Sephacryl S-400)，分部收集，硫酸蒽酮比色法跟踪检测，合并相同组分，冷冻干燥，即得本专利技术的多糖YCP，纯度与实施例1的相同。实施例3.多糖YCP的提取、分离纯化、鉴定称取湿菌体1000g，加水置组织捣碎器中捣碎，补足水至4000mL，90℃水浴提取8小时。间歇搅拌，纱布滤去残渣，4000r.p.m.离心去沉淀。提取液浓缩至2000mL，加入浓缩液1/7体积的氯仿及1/30体积的正丁醇，剧烈振荡，静置分层，除去下层有机溶剂层及中间本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高向东，谭仁祥，杨晓兵，孙诚，
申请(专利权)人：中国药科大学，南京大学，
类型：发明
国别省市：