刚毛亚精胺及其制法与用途制造技术

＊＊＊ Ⅰ 本发明专利技术涉及式（Ⅰ）化合物，该化合物是从由刚毛毛球线菌的培养物中得到的。该化合物是磷脂酶Ｃ的抑制剂。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及式Ⅰ所代表的一种新化合物(以后称作刚毛亚精胺(hispidospermidin))，本专利技术还涉及含有作为抑制磷脂酶C(PLC)组合物的刚毛亚精胺的药物组合物以及制备刚毛亚精胺的方法。 众所周知，肌醇磷酸酯及其降解产物在细胞生长和转化的信号转导中起重要作用。这些信号传递通道之一是通过PLC的激活进行的。第一信使(例如促细胞分裂剂、激素、生长因子、神经传递质)对其特异性细胞受体的结合激活了酶PLC。被激活的PLC将磷脂酰肌醇4，5-二磷酸酯(PIP2)分裂成两类第二信使，即二酰基甘油(DG)和肌醇三磷酸酯(IP3)。DG将蛋白激酶C(PKC)活化，而IP3则增高细胞内的Ca++含量。这两种第二信使通过不同的途径触发细胞的各种生理响应。由这些事实得出，PLC是阻断无控制的增殖和/或炎性信号的有效指标之一。因此，抑制PLC的活性预示着具有抗肿瘤和/或抗炎活性。根据本专利技术，业已发现刚毛亚精胺具有有效抑制PLC的活性。刚毛亚精胺的物理化学性质如下面给出的实例中所述外观无色油状物24D-60°(C 1.45，CHCl3)分子式C25H47N3O＊HREI-MS(m/z)M+C25H47N3O的计算值405.3720实验值405.3730UVl甲醇maxnm末端吸收IRnmax(纯样)cm-13600～3100，2780，2760溶解性在甲醇、氯仿、丙酮、酸性水溶液中溶解，不溶于水。1HNMR(400MHz，CDCl3)d0.82(3H，d，J＝7Hz)，1.12(3H，s)，1.13(1H，m)，1.22(3H，s)，1.22(1H，dd，J＝8.13Hz)，1.28(1H，d，J＝12.5Hz)，1.40(1H)，1.42(1H，m)，1.45(1H，dd，J＝5，12.5Hz)，1.48(1H)，1.50(2H，m)，1.51(2H，m)，1.52(1H，m)，1.57(1H，m)，1.64(2H，m)，1.71(1H，m)，1.73(1H，m)，1.77(1H，dd，J＝7.5，13Hz)，2.03(1H，t，J＝5Hz)，2.22(9H，s)，2.28(2H，宽，J＝7Hz)，2.34(2H)，2.35(2H)，2.60(2H，t，J＝7Hz)，2.81(1H，d，J＝5Hz)(用四甲基甲硅烷作为内标)13CNMR(100MHz，CDCl3)d14.1，18.1，20.3，21.0，25.1，25.6，27.3，28.6，28.9，29.4，32.2，42.3，43.2，43.4，44.5，45.6，48.6，51.9，55.9，57.8，58.0，66.4，80.0，81.7(用四甲基甲硅烷作为内标)＊HREI-MS高分辨电子轰击质谱根据本专利技术提供的方法，刚毛亚精胺是通过在需氧条件下在含水 培养基中培养一种属于能够产生刚毛亚精胺的毛球线菌属(chaetosphaeronema)的微生物并从培养物中分离出刚毛亚精胺而制得。在上述方法中使用的微生物可以是属于能产生刚毛亚精胺的毛球线菌属的任何菌株(包括变种)。特别优选的菌株是刚毛毛球线菌(chaetosphaeronema hispidulum)NR7127及其变种。刚毛毛球线菌NR7127是从土壤样品中分离出来的，经鉴定是属于毛球线菌属的一个菌株。表示为刚毛毛球线菌NR7127的菌株已根据布达佩斯条约于1992年11月25日在日本工业科学和技术代理机构发酵研究学会保藏如下Chaetosphaeronema hispidulum(CdA)Moesz NR7127(FERM BP-4081)刚毛毛球线菌NR7127(FERM-BP4081)的培养特征及形态学特征如下培养特征在麦芽汁琼脂上生长的暗褐色到黑色的菌落呈现絮状外观。未产生渗出物或可溶的色素。在通常的荧光或自然光下未观察到分生孢子形成(conidiogenesis)。但是，在近紫外光下，几周后形成许多半浸在琼脂中的分生孢子体(conidiomata)。在香蕉叶琼脂上培养对于生成分生孢子体最为有效。形态学特征分生孢子体是分生孢子器的，暗褐色到黑色，球形到近于球形，直径最高达450μm。这些孔口是单一的，位于中心并且略呈喙形。有许多直立的刚毛被约束在喙的周围，它们彼此是分隔的并且是笔直的。带有边圈(collarette)的产生分生孢子的细胞是瓶梗形、圆柱形并为透明的，6.0-10.5×3.0-7.5μm，它们的平周壁厚。分生孢子是透明的、有单隔的、光滑、笔直到略弯的，它们的顶和基底是钝形的。其大小为11.5-16.0×1.5-3.5μm。这些分生孢子体有许多刚毛。产生分生孢子的细胞是瓶梗形的。分生孢子是有单隔的、透明并且是笔直的到弯曲的。这些特征清楚地表明，这一菌株包括于毛球线菌(Chaetosphaeronema Moesz)属(Sutton，1980)中。其它的性质，例如分生孢子体、产生分生孢子的细胞和分生孢子的大小，表明这一菌株应该是刚毛毛球线菌(Chaetosphaeronema hispidulum Moesz)。这一菌株的喙不象蜡叶标本，刚毛毛球线菌IMI182342的喙那样长。在与Sutton博士(国际真菌研究所，Kew，Eng land)的私人通信中，他建议这些差别可以忽略。因此这一菌株被鉴定为刚毛毛球线菌。根据本专利技术提供的方法，可以在含有可被所培养的微生物利用的习用营养物的培养基中进行培养。作为碳源，可以提到的是例如葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油、糖蜜、糊精及它们的混合物。氮源的实例是大豆粉、棉籽粉、肉羹、胨、干酵母、酵母提取物、玉米浆、硫酸铵、硝酸钠及它们的混合物。另外，培养基中可以加入其它的有机或无机物以促进微生物的生长和提高刚毛亚精胺的产量，这类物质的实例是无机盐，例如碳酸钙、氯化钠、磷酸盐等。培养是在需氧条件下于含水培养基中进行的，最好是液面下发酵。此培养过程适宜在20℃-35℃的温度下进行，最佳温度为27℃。最好在PH3到9下进行培养。培养时间取决于进行培养的条件。一般来说，培养进行50～200小时已经足够。从发酵液体培养基中分离刚毛亚精胺可以根据本身已知的方法进行。例如，菌丝体可以用离心或过滤法从发酵液体培养基中分离出来，而刚毛亚精胺可以用与水不混溶的有机溶剂，例如链烷醇(如正丁醇)和酯(如乙酸乙酯、乙酸丁酯)等，从滤液中提取出来。另一方面，例如将菌丝体用溶剂(例如丙酮或甲醇的水溶液)萃取，除掉溶剂，再用与水不混溶的有机溶剂进一步萃取残余物，可以得到在分离出的菌丝体中所含有的刚毛亚精胺。将这样得到的溶剂层经脱水剂(例如硫酸钠等)干燥，然后减压浓缩。所得的刚毛亚精胺粗品可以用萃取法、分配法、沉淀法、柱色谱法(用硅胶、氧化铝、Diaion HP-21、离子交换树脂等作吸附剂)纯化。测定了刚毛亚精胺对PLC的抑制活性。测定混合物(0.1ml)中含有200mM Tris-乙酸盐缓冲剂(PH5.5)、2mMCaCl2、250μMPI(悬浮在缓冲剂中，比活性800dpm/nmole)和酶。在标准的测定法中，将在15mM Tris-HCl缓冲剂(PH7.5)中的20μl抑制剂加到底物悬浮液(50μl)中。加入由部分纯化的大鼠脑的PLC制得的酶溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
式Ⅰ化合物及其盐。＊＊＊ Ⅰ。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：大达男，晶子，奥田彻，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]