本发明专利技术涉及一种肿节风多糖的制备方法及其抗炎和免疫调节活性。属于医药领域，国际专利号分类为C08B?37/60。一种肿节风多糖粗品和肿节风多糖精品，它是由植物肿节风全草粉碎后过筛，加入乙醇回流脱脂，再经热水提取，乙醇沉淀，4℃放置，离心去上清，沉淀用乙醇洗涤三次，干燥后得肿节风水提物。肿节风水提物溶解于水，加入D301-G大孔树脂脱色，除蛋白。脱色液经浓缩，乙醇沉淀，离心去上清，沉淀用乙醇洗涤3次，干燥后得肿节风多糖粗品。肿节风多糖粗品经离子交换柱层析和分子筛凝胶柱层析纯化后获得肿节风多糖精品。它们具有抗炎活性和免疫调节活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种肿节风多糖的制备方法及其抗炎和免疫调节活性，用于治疗与炎症相关的疾病或作为免疫调节剂。属于医药领域，国际专利号分类为C08B 37/60。
技术介绍
肿节风为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandra glabra (Thunb. ) Nakai的干燥全草。金粟兰科植物全世界有5属，约70余种，分布于热带或亚热带；我国有3属，约18种，分别为 丝穗金粟兰属、及己属和草珊瑚属。草珊瑚属植物我国有两种，分别为草珊瑚Sarcandra glabra (Thunb. ) Nakai和海南草珊瑚Sarcandra hainanensis。主要分布在四川、云南、贵州、安徽、福建、江西等地，分布广泛且资源丰富，入药历史悠久，味苦、辛、性平，归心、肝经， 具有清热凉血，活血消斑，祛风通络的功效，用于血热紫斑、紫癜、风湿痹痛，跌打损伤的治疗。现代研究表明肿节风具有抗肿瘤、抗菌消炎、抗血小板减少等作用，在医药领域应用广泛，为2010年版《中华人民共和国药典》一部收载。肿节风分布广泛，资源的蕴藏量较大， 并且易于栽培，有广阔的开发前景，目前被广泛应用于药品、保健品、食品、化妆品和烟叶等领域中，肿节风制剂的销售总产值已超过100亿人民币以上。全国有多家药厂以肿节风为原料生产相关制剂，包括肿节风浸膏片、清热消炎宁胶囊、血康口服液、肿节风注射液及复方草珊瑚含片；已开发的保健产品有草珊瑚牙膏、草珊瑚口香糖、草珊瑚保健茶、九节茶香口胶等。肿节风所含化学成分众多，如倍半萜、香豆素、黄酮、皂苷类化合物，具有多种药理作用及临床用途。但已经发现的小分子化学成分很难解释肿节风的所有临床功效，并且其药效物质基础还不是非常明确。近些年，虽然一些学者也开始关注其中的大分子类物质，如多糖类成分的相关研究，但是，也仅限于提取分离肿节风水溶性粗多糖。在相关报道中，经提取分离得到的水溶性粗多糖中糖含量偏低，即使用于药理活性研究，也难以阐明肿节风多糖的药理作用。本专利技术通过解决肿节风多糖制备的技术性难题，获得了含量较高的肿节风多糖，在此基础上，又进一步研究了肿节风多糖的抗炎活性和免疫调节活性，证明肿节风多糖可以应用于炎症和免疫相关疾病的治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种从肿节风水提物中获得肿节风多糖粗品的方法以及从肿节风多糖粗品中分离纯化得到肿节风多糖精品的方法。所述的获得肿节风多糖粗品的方法，其特征是，将肿节风全草干燥品粉碎后加入乙醇，回流脱脂，将脱脂后的原料加入去离子水，加热提取，将提取液浓缩，加入乙醇沉淀， 真空干燥后得到本专利技术所述的肿节风水提物。将肿节风水提物溶解于去离子水，加入大孔树脂，去除溶液中的色素和蛋白质，保留脱色液，将脱色液过滤，然后浓缩，加入乙醇沉淀出肿节风多糖，真空干燥后得到本专利技术的肿节风多糖粗品(SGP)，其多糖含量占总固体重量的 60%以上。所述的分离纯化得到肿节风多糖精品的方法，其特征是，是将上述方法获得的肿节风多糖粗品(SGP)溶解于去离子水，用离子交换柱进行分离纯化，以去离子水洗脱，用硫酸苯酚比色法跟踪检测，收集均一组分，再采用分子筛柱层析，以去离子水洗脱，用硫酸苯酚比色法跟踪检测，收集肿节风多糖均一组分，冷冻干燥，即得到本专利技术所述的肿节风多糖精品(SGP-I)，其多糖含量占总固体的90%以上。所述方法中，加热提取是在热水浴中加热，水浴温度在70_90°C。所述方法中，加热提取时间为2-6小时。所述方法中，提取所用的液料比为10-30。所述方法中，大孔树脂为阴离子交换树脂。所述方法中，大孔树脂脱色时间为1-3小时。所述方法中，离子交换树脂为二乙胺基乙基纤维素(DEAE-52)。所述方法中，分子筛凝胶填料为Sephacryl S-400。本专利技术目的之二是提供一种结构明确，质量可控的肿节风多糖在制备抗炎药物或免疫调节剂中的应用。所述的本专利技术的多糖在制备抗炎药物或免疫调节剂中的应用，其特征是，将上述方法获得的肿节风多糖粗品(SGP)和上述方法制备的肿节风多糖精品(SGP-I)应用于二甲苯造模的小鼠急性炎症耳肿胀模型和5-氟尿嘧啶诱导的仓鼠口腔黏膜炎模型均具有一定的治疗效果，因此可应用于制备抗炎药物。并且肿节风多糖精品(SGP-I)具有双向调节免疫因子NO分泌的作用，因此可用于制备免疫调节剂。所述方法中，肿节风多糖粗品(SGP)多糖含量在60%以上。所述方法中，肿节风多糖精品(SGP-I)多糖含量在90%以上，分子量为IOKDa左右。所述方法中，肿节风多糖精品(SGP-I)含有葡萄糖、半乳糖和甘露糖。主要糖苷键键型有β (I — 2)甘露糖、α (I — 3)半乳糖和α (I — 4)葡萄糖。附图说明图I为肿节风多糖精品(SGP-I)红外光谱。图2为肿节风多糖精品(SGP-I)紫外-可见扫描光谱。图3为肿节风多糖粗品(SGP)和肿节风多糖精品(SGP-I)抑制5_氟尿嘧啶诱导的仓鼠口腔黏膜炎的作用。图4为肿节风多糖精品(SGP-I)抑制脂多糖LPS刺激巨噬细胞分泌炎症因子NO 的作用。图5为肿节风多糖精品(SGP-I)刺激巨噬细胞分泌NO的作用。在图I中SGP_1在3397CHT1附近的峰归属于糖环上0H_的伸缩振动，2928CHT1附近的峰归属于糖环上C-H伸缩振动。1648CHT1处的峰是由于结合水产生的。1155、1079和 1026处的峰归属于糖环上C-O的振动。1350-1450处的峰归属于糖环上CH2和COH的信号。 892cm-1处有吸收峰证明SGP-I含有β -糖苷键。在图2中通过对SGP-I进行紫外-可见(200-700nm)全波长扫描，证明SGP-I纯度较高，基本无蛋白质、核酸和其它杂质。在图3中肿节风多糖粗品(SGP)在5g/Kg和lg/Kg、肿节风多糖精品(SGP-I)在5g/Kg和lg/Kg浓度下均具有缓解5-氟尿嘧啶诱导的仓鼠口腔黏膜炎的作用。在图4中SGP-1在400(μ g/ml)浓度下，对脂多糖LPS诱导的巨噬细胞分泌炎症因子NO有显著抑制作用，证明SGP-I具有一定程度的抗炎活性。在图5中SGP_1在100、200、400和800(μ g/ml)浓度下与空白对照相比能显著诱导巨噬细胞分泌NO，证明SGP-I具有免疫调节作用。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作详细的说明，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。说明书及实施例中采用的药材、填料、化学试剂等，如未特殊说明均按常规实验条件进行操作，或按供应商提供的说明进行操作。实施例I :肿节风多糖粗品的制备方法一称取粉碎后过80目筛的肿节风全草药材IOOg于提取容器中，加入5倍体积乙醇， 回流脱脂3小时，4层纱布除去上清，残渣补足去离子水至1000ml，70°C水浴提取I小时，间歇搅拌。收集提取液后，残渣再补足去离子水至1000ml，70°C水浴提取I小时，间歇搅拌。 纱布滤去残渣，合并提取液浓缩至20ml，4000r. p. m离心去沉淀，加入I倍乙醇沉淀，4°C放置24小时，离心除去上清液，以无水乙醇洗涤3次，真本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高向东，金磊，刘玮，关欣，姚文兵，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：
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