蚬壳花椒果皮多糖的制备方法及用途技术

蚬壳花椒果皮多糖的制备方法及用途，其方法的步骤为：(1)将干燥的蚬壳花椒果皮用粉碎机粉碎成40～60目的粉末；(2)置于提取器内，以有机溶剂脱脂，重复此步骤两次，过滤，得到脱脂后的滤渣；(3)按蒸馏水体积mL与滤渣重量g之比为10～20∶1，向滤渣中加入蒸馏水，在100℃提取2～3h，重复此步骤三次，合并三次提取液；(4)用Sevag法，或者酶解法除蛋白，离心，得上清液；(5)50℃～80℃减压浓缩上清液，使溶液体积mL为第(1)步的蚬壳花椒粉末重量g的4～6倍，得到浓缩液；(6)向浓缩液中加乙醇至醇浓度为80％，静置过夜，离心得到沉淀，干燥沉淀得到蚬壳花椒果皮多糖；其用途为在制备缓解和治疗癌症药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药

技术介绍
肿瘤是目前危害人类健康的主要疾病之一。国内外对抗肿瘤药物的研究发现，化学抗癌药物在作用于靶细胞的同时危机正常细胞，临床上应用的治疗肿瘤化学药物大多都会导致突变遗传毒性，但中草药的突变遗传毒性不太明显。中草药抗癌活性成分主要包括皂甙、多糖、生物碱及其他成分，其中多糖抗肿瘤作用机制主要包括以细胞毒为主的直接抗肿瘤机制和免疫作用为主的间接抗肿瘤机制，已成为当今抗肿瘤新药发展的主要方向之O蚬壳花椒(Zanthoxylum Dissitum Hemsl.),又名单面针、山枇杷、大叶花椒、麻疯刺、九牛藤、公麒麟、蛘壳花椒等，属芸香科花椒属攀援藤本植物，根、茎及叶均可人药，临床上有祛风活络、散瘀止痛、解毒消肿之功效，民间用于治疗腰腿疼痛、关节疼痛、跌打损伤等症。蚬壳花椒也是许多中成药组方中的主要成分，如妇科千金片，妇科外用洗液等，具有很高的药用价值。近年来，对蚬壳花椒的研究主要为基础研究，如化学成分分析、组织培养技术及生物学特性方面，据报道，蚬壳花椒中性亲脂性成分对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌均有抑制作用，而对蚬壳花椒多糖的提取方法及抗肿瘤活性等方面研究，至今未见文献报道和专利公开。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有抗肿瘤作用的中草药有效部位-蚬壳花椒果皮多糖的制备方法。本专利技术的另一个目的在于提供一种蚬壳花椒果皮多糖作为在制备缓解和治疗癌症药物中的应用。本专利技术是蚬壳花椒果皮多糖的制备方法及用途，其方法的步骤为(I)将干燥的蚬壳花椒果皮用粉碎机粉碎成40 60目的粉末；(2)置于提取器内，以有机溶剂脱脂，重复此步骤两次，过滤，得到脱脂后的滤渣；(3)按蒸馏水体积mL与滤渣重量g之比为10 20 1，向滤渣中加入蒸馏水，在100°c提取2 3h，重复此步骤三次，合并三次提取液；(4)用Sevag法，或者酶解法除蛋白，离心，得上清液；(5) 50°C 80°C减压浓缩上清液，使溶液体积mL为第(I)步的蚬壳花椒粉末重量g的4 6倍，得到浓缩液；(6)向浓缩液中加乙醇至醇浓度为80%，静置过夜，离心得到沉淀，干燥沉淀得到舰壳花椒果皮多糖。其用途是蚬壳花椒果皮多糖在制备缓解和治疗癌症药物中的用途。本专利技术的方法简单，适于工业化生产，通过制备方法制得的蚬壳花椒果皮多糖以苯酚硫酸法测得总多糖含量> 76%，经过体外抗肿瘤试验，证明蚬壳花椒多糖具有良好的抗肿瘤作用，可在制备缓解和治疗癌症药物中应用。蚬壳花椒果皮多糖对人宫颈癌细胞Hela及人肝癌细胞SMMC-7721有明显的抑制生长的作用。具体实施例方式实施例I :蚬壳花椒果皮多糖的提取 (I)粉碎将干燥的蚬壳花椒果皮用粉碎机粉碎成40 60目的粉末；(2)脱脂将粉末置于提取器内，以石油醚脱脂两次，每次lh，过滤，得到滤渣，再用95%乙醇脱脂两次，每次2h，过滤，挥发除去滤渣中的有机溶剂；(3)提取按蒸馏水体积mL与滤渣重量g之比为10 20 1，向滤渣中加入蒸馏水，在100°C提取2 3h，重复此步骤三次，合并三次提取液；(4)除蛋白用酶解法除蛋白，离心，得上清液；(5)浓缩50°C 80°C减压浓缩上清液，得到浓缩液； (6)醇析向浓缩液中加95 %乙醇至醇浓度为80 %，静置过夜，离心得到沉淀，干燥沉淀得到蚬壳花椒果皮多糖。以葡萄糖为标准品，苯酚硫酸法检测蚬壳花椒果皮多糖的含量为72. 9987% ο实施例2 :蚬壳花椒果皮多糖的提取(I)粉碎将干燥的蚬壳花椒果皮用粉碎机粉碎成40 60目的粉末；(2)脱脂将粉末置于提取器内，以石油醚脱脂两次，每次lh，过滤，得到滤渣，再用95%乙醇脱脂两次，每次2h，过滤，挥发除去滤渣中的有机溶剂；(3)提取按蒸馏水体积mL与滤渣重量g之比为10 20 1，向滤渣中加入蒸馏水，在100°C提取2 3h，重复此步骤三次，合并三次提取液；(4)除蛋白用Sevag法除蛋白，离心，得上清液；(5)浓缩50°C 80°C减压浓缩上清液，得到浓缩液；(6)醇析向浓缩液中加95%乙醇至醇浓度为80%，静置过夜，离心得到沉淀，干燥沉淀得到蚬壳花椒果皮多糖。以葡萄糖为标准品，苯酚硫酸法检测蚬壳花椒果皮多糖的含量为76. 1895%。实施例3 :苯酚硫酸法测多糖含量(I)标准溶液的制备精密称取105°C干燥至恒重的葡萄糖对照品O. lOOOg，加蒸馏水溶解，定容于250mL容量瓶中，配成O. 4mg/mL的葡萄糖标准溶液，精密吸取标准液I、2、3、4、5mL分别置于IOmL容量瓶中，以蒸馏水定容摇匀，得系列对照品溶液。(2)标准曲线的绘制精密吸取上述系列对照品溶液I. OmL，分别置于IOmL比色管中，将比色管置于冰水中，分别向比色管加入ImL苯酚试剂，再加入浓硫酸4mL，待各管加完后同时摇匀，置于沸水加热lOmin，冷却定容并在490nm测定吸光度，另精密吸取蒸馏水I. OmL，同法操作，作为空白对照，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程。(3)样品溶液多糖含量测定精密移取样品溶液ImL于IOmL比色管中，按标准曲线绘制方法测定吸光度，并根据回归方程计算多糖含量。实施例4 :蚬壳花椒果皮多糖对人宫颈癌细胞Hela生长的影响(I)肿瘤细胞的培养含有体积分数为10%的小牛血清的RPMI 1640培养基于37°C、5% C02条件的二氧化碳培养箱中对Hela细胞进行培养至对数生长期。(2)实验分组及处理Hela细胞的培养0. 25%胰酶消化对数生长期的细胞，用培养液稀释调节细胞浓度至I X IoVmL细胞悬液，将细胞悬液接种于96孔细胞培养板上培养过夜。 (3)四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定待细胞贴壁后加药品进行培养，每孔加100 μ L细胞悬液，100 μ L样品，样品浓度设 lmg/mL、0. 5mg/mL、0. 25mg/mL、0. 125mg/mL、0. 0625mg/mL 等 5 个浓度梯度，同时设空白对照组和阳性对照组，空白对照组为有细胞无药物的细胞悬液，阳性对照组加50 μ L丝裂霉素和100 μ L的细胞悬液。每组均设5个重复，将培养板置于37°C、5% CO2及饱和湿度的CO2培养箱中培养48h，然后每孔加浓度为5mg/mL的MTT溶液(溶于PH = 7. 4的PBS) 20 μ L，在同样条件下继续培养4h，然后吸去上清液加100 μ LDMSO溶解，摇床上摇lOmin，使充分溶解，用ELISA Reader于490nm处测定各孔光密度值(OD值)，并以下面公式计算样品对细胞生长的抑制率。细胞生长抑制率=(阴性对照组孔OD值-样品孔OD值)/阴性对照组孔OD均值 X 100%并根据量效关系和直线回归法计算半数抑制浓度IC5(I。(4)MTT法测定蚬壳花椒果皮多糖对Hela细胞生长的影响结果见表I。表I蚬壳花椒果皮多糖对Hela细胞生长的影响样品名称浓度(mg/mL)抑制率(％)T""~ IC5o(mg/mL) Abs0.06258.07Λ ----0.4609_0.125__10.44__025__26.27__05__51.44___178.48_结果显示，不同浓度的蚬壳花椒多糖溶液对Hela细胞均有抑制作用，且抑制作用与浓度呈明显的剂量依本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨林，邵文斌，于爱红，姚广玉，
申请(专利权)人：兰州理工大学，
类型：发明
国别省市：