藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法及测定方法技术

本发明专利技术涉及一种藕节中白桦脂酸及多糖的提取方法及含量测定方法，本发明专利技术采用Box-BehnkenDesignS(BBD)中心组合设计模型的响应面分析法，用3个变化因子、3个水平及少量的实验组优化出藕节中白桦脂酸和多糖的最佳提取方法，获得最佳产率，本发明专利技术优选得到的提取方法在提高效率的同时，可降低能耗和污染物排放，具有工业化生产的实际意义。本发明专利技术通过大量实验筛选出藕节中白桦脂酸和多糖含量的测定方法，操作简单、实用性强，可为藕节白桦脂酸及多糖的高效利用提供科学依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物利用
，涉及一种藕节中多糖和白桦脂酸的综合提取方 法，尤其涉及一种利用响应曲面法优化藕节多糖和白桦脂酸的提取方法。
技术介绍
藕节为睡莲科植物莲NelumbonuciferaGaerth.的干燥根莖节部，为莲藕的非食 用部分，不仅是良好的滋补品，而且是很好的中药材，具有凉血、化瘀、止血的功效。我国浙 江、江苏、湖北、山东等地莲藕资源丰富，多数藕节被当作废物处理，不仅浪费宝贵的中药资 源，而且对环境造成一定的污染和破坏。 白桦脂酸是一种三萜类化合物，具有抗肿瘤细胞生长的作用，对肿瘤细胞具有广 谱细胞毒性，而对正常细胞没有伤害，是极有开发前景的药物。藕节中含有白桦脂酸，已有 报道从藕节中分离出白桦脂酸的构象异构体表白桦脂酸，专利号为CN101768200A的中国 专利于2010年7月7日公开了藕节中表白桦脂酸的提取工艺。 现有技术中还没有实现综合对藕节中的白桦脂酸和多糖的综合提取利用的稳定 可靠的方法。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供一种工艺设计合理，操作方便简单， 稳定可靠，提取效率高，提取得到的白桦脂酸和多糖纯度高，易于工业化生产的利用响应曲 面法优化藕节多糖和白桦脂酸的提取方法。本专利技术另一个目的是提供藕节中多糖和白桦脂 酸的测定方法。 技术方法：为解决上述问题，本专利技术采用的技术方案为： -种藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法，其包括以下步骤： (1)白桦脂酸的提取：取藕节，粉碎过40目筛，加入藕节粗粉重量40~50倍体积 量的乙醇，50Hz~IOOHz的超声频率，可预浸泡0. 5h，超声提取1~3次，每次lOOmin，得到 白枠脂酸； (2)多糖的提取：取步骤（1)提取白桦脂酸后的藕节滤渣，依次用无水乙醇、乙酸 乙酯洗涤，挥干乙醇和乙酸乙酯，加入藕节滤渣重量40~50倍量体积的水，然后在95°C~ l〇〇°C温度加热回流提取1~3次，每次125min，提取得到多糖。 作为优选方案，以上所述的藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法，步骤（1)中加入 藕节粗粉重量49倍量体积的乙醇，乙醇体积浓度为95%。 作为优选方案，以上所述的藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法，步骤（2)中加入 藕节滤渣重量50倍量体积的水，然后在95°C温度加热回流提取1~3次，每次125min。 本专利技术所述的藕节中白桦脂酸和多糖的测定方法，其包括以下步骤： (1)白桦脂酸样品与多糖的溶液制备 白桦脂酸的提取：取藕节，粉碎过40目筛，加入藕节粗粉重量40~50倍体积量的 乙醇，50Hz~IOOHz的超声频率，超声提取1~3次，每次lOOmin，提取液抽滤后进行8000r/ min离心10min，过0. 44 μ m滤膜，得到白桦脂酸待测液； 多糖的提取：取步骤（1)提取白桦脂酸后的藕节滤渣，依次用无水乙醇、乙酸乙 酯洗涤，挥干乙醇和乙酸乙酯，加入藕节滤渣重量40~50倍量体积的水，然后在95°C~ l〇〇°C温度加热回流提取1~3次，每次125min，提取得到多糖，8000r/min离心10min，精密 量取上清液进行酸性、中性多糖测定； (2)白桦脂酸及多糖标准品的配置和标准曲线的建立 ①标准品溶液制备 白桦脂酸对照品溶液的制备：精密称取白桦脂酸3. 12mg，置5mL容量瓶中，用甲醇 定容至刻度线，得到624 μ g/mL浓度白桦脂酸的对照品溶液； 葡萄糖对照品溶液制备：精密称取12. 61mg葡萄糖于IOOmL容量瓶内，用蒸馏水定 容至100mL，得到0. 1261mg/mL浓度的葡萄糖溶液； 葡萄糖醛酸对照品溶液制备：精密称取11. 22mg葡糖糖醛酸置于IOOmL容量瓶内， 用蒸馏水定容至l〇〇mL，得到0. 1122mg/mL浓度的葡糖糖醛酸溶液； ②白桦脂酸测定色谱条件及多糖测定方法 取规格为150mmX4. 6mm，5 μπι的Apollo C18色谱柱；流动相：A相为乙腈，B相为 0.2%磷酸水溶液，4相和8相体积比为80:20等度洗脱，流速：1111171^11，检测波长 ：20711111， 柱温：30°C，进样体积：20 μ L ; 精密量取多糖提取液补足至lmL，加入5 %的苯酚2mL摇匀，再加入浓硫酸7mL摇 匀，置沸水浴20min，用紫外分光度计在490nm波长下测定； 精密量取多糖提取液补足至lmL，加入12. 5mmol/L四硼酸钠硫酸溶液5mL，沸水浴 加热1〇11^11，加入0.125%咔唑0.21^，再沸水浴151^11，用紫外分光光度计在51211111波长下 测定； ③标准曲线建立 取系列浓度的白桦脂酸，葡萄糖对照品和葡萄糖醛酸对照品按上述②方法测定， 建立白桦脂酸，葡萄糖醛酸及葡萄糖的标准曲线，如下表： 葡萄糖、葡萄糖醛酸及白桦脂酸标准曲线 (3)测定藕节白桦脂酸及多糖含量 取步骤⑴制备得到的白桦脂酸样品与多糖的溶液，按以上步骤（2)方法和白桦 脂酸，葡萄糖醛酸及葡萄糖的标准曲线测定白桦脂酸样品与多糖的溶液中白桦脂酸，葡萄 糖醛酸及葡萄糖的含量。 作为优选方案，以上所述的藕节中白桦脂酸和多糖的测定方法，步骤（1)中加入 藕节粗粉重量49倍量体积的乙醇，乙醇体积浓度为95%。 作为优选方案，以上所述的藕节中白桦脂酸和多糖的测定方法，步骤（1)中加入 藕节滤渣重量50倍量体积的水，然后在95°C温度加热回流提取1~3次，每次125min。 藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法的优选实验： (1)白桦脂酸实验设计与统计分析 单因素实验 提取白桦脂酸时依次改变提取溶剂乙醇浓度、提取时间、料液比、超声频率、预浸 时间、提取次数进行单因素试验，用HPLC法测定所得的藕节白桦脂酸提取液中白桦脂酸的 含量，并按下式计算白桦脂酸产率，每次处理重复三次。 白桦脂酸产率（％) =(提取液中白桦脂酸质量/藕节干重总质量）X 100% 响应面曲线法 根据单因素试验结果，选取白桦脂酸提取效果影响较显著的提取溶剂乙醇浓度、 提取时间、料液比这3个因素，利用Design-Expert8. 0软件根据Box-Behnken设计原则进 行实验设计，以乙醇浓度A、料液比B、提取时间C为自变量，以白桦脂酸的产率为响应值Y， 建立多元二次回归方程：Y = 〇· 6+0. 087A+0. 035B+0. 034C+0. 030AB-0. 025AC+0. 014BC-0. 0 45A2-0. 029B2-0. 044C2。 (2)多糖实验设计与统计分析 单因素实验 提取藕节多糖时依次改变提取温度、提取时间、料液比、预浸时间、提取次数进行 单因素试验，用苯酚-硫酸法测定中性多糖，咔唑-硫酸法测定酸性多糖得到酸性、中性多 糖含量，并按下式计算多糖产率，每次处理重复三次。 中性多糖产率（％) =(提取液中酸性多糖质量/藕节干重总质量）X 100% 酸性多糖产率（％) =(提取液中酸性多糖质量/藕节干重总质量）X 100% 响应面曲线法 根据单因素试验结果，选取多糖提取效果影响较显著的提取温度、提取时间、料液 比这3个因素，利用Design-Expert8. 0软件根据Box-Behnken设计原则进行实验设计，以 提取温度A、提取时间B、料液比C为自变量，以多糖的产率为响应值Y，建立本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法，其特征在于包括以下步骤：(1)白桦脂酸的提取：取藕节，粉碎过40目筛，加入藕节粗粉重量40～50倍体积量的乙醇，50Hz～100Hz的超声频率，超声提取1～3次，每次100min，得到白桦脂酸；(2)多糖的提取：取步骤(1)提取白桦脂酸后的藕节滤渣，依次用无水乙醇、乙酸乙酯洗涤，挥干乙醇和乙酸乙酯，加入藕节滤渣重量40～50倍量体积的水，然后在95℃～100℃温度加热回流提取1～3次，每次125min，提取得到多糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘培，段金廒，钱大玮，李会伟，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32