本发明专利技术涉及一种同时定量测定天麻中包括天麻素、对羟基苯甲醇、parishin B、parishin C和parishin等多种酚类成分的含量测定新方法，主要步骤包括以甲醇或乙腈以及含体积分数为0.1％--0.5％的酸水为流动相的快速高效液相色谱分离；以高灵敏的荧光检测法测定目标化合物的含量，其中激发波长为215-235nm，发射波长为295-335nm。该方法灵敏度高、精密度好、分析时间短，可用于天麻药材、天麻提取物中酚类成分的快速、灵敏测定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药药材的检测领域，具体涉及中药药材天麻的检测方法。
技术介绍
天麻又名赤箭、定风草、独摇芝，为兰科天麻属植物天麻（GastrodiaelataB1.) 的干燥块茎。两千年前的《神农本草经》将其列为上品，有平肝息风、通络止痛的功效，有 "治风之神药"之称。主治头痛眩晕、肢体麻木、癒痛抽摇等症。天麻素是天麻的主要活性成 分，2010版中国药典中W天麻素的含量控制天麻药材的质量，其含量测定方法为高效液相 色谱法，用十八烷基基娃焼键合硅胶为固定相，W己腊-0.05%磯酸溶液（3 : 97)为流动 相，检测波长220nm。近年来研究表明，天麻活性成分除了天麻素W外，还存在对居基苯甲 醇、parishinB、pa;rishinC和parishin等多种酪类成分。如王河等人已经发现parishin 类成分对脑缺血再灌注损伤、N-甲基-D- 口冬氨酸诱导的神经细胞损伤W及闭合性脑外 伤具有一定的保护作用（天麻派立辛提取物在制备脑保护药物中的应用，中国专利申请号 201210230669.0)。因此，对天麻中多种酪类同时测定有望更全面控制天麻质量。而目前 文献或专利的方法仅能实现对天麻中1~4种酪类成分或总天麻素的含量进行测定（刘 玉红，药物分析杂志，2010, 30(1) :30-32)(刘玉红，中成药，2012, 34(1) :182-184)(刘智， 中国药学杂志，2012,40巧）=380-383)，难W客观真实的反映天麻在体内发挥药效作用的全 部活性成分，且方法灵敏度低。另外，对于同时测定天麻中的多种酪类成分未见报道。因 此需要一种操作简单、快速、灵敏度高的方法同时测定天麻中的多种酪类成分。基于W上 原因，本专利技术开发了一种同时对天麻中天麻素、对居基苯甲醇、parishinB、parishinC和 parishin等多种酪类成分的高效液相色谱-英光检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供天麻中多种酪类成分的含量测定方法，所述的测定方法利 用高效液相色谱-英光检测方法可同时对天麻中天麻素、对居基苯甲醇、parishinB、 parishinC和parishin含量进行测定，并开展了线性关系考察，稳定性试验，精密度试验， 重复性试验和加样回收试验对方法进行验证，证明本分析方法准确，可靠。所述方法简单、 快速、灵敏，可为天麻的质量评价提供依据。 为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案： -种同时定量测定天麻中多种酪类成分的含量测定方法，主要包括W下Η个步 骤，其特征在于： 1)对照标准品及供试待测品溶液的制备：将天麻酪类对照标准品及待测天麻提 取物分别溶于体积浓度为0-8%的甲醇或己腊的水溶液中，制备对照标准品混合溶液和待 测供试品溶液； 2) W高效液相色谱-英光检测方法为手段分别进行对照标准品混合溶液和待测 供试品溶液成分的定量分析； 通过对一系列不同质量浓度的天麻酪类化合物的对照标准品混合溶液进行分析， 获得对照标准品混合溶液中各天麻酪类化合物的保留时间及各天麻酪类化合物不同质量 浓度对应的峰面积； 通过对待测供试品溶液的分析，获得待测天麻提取物中天麻酪类化合物的保留时 间及对应的峰面积； 3)外标法测定天麻中酪类成分的含量； 通过对一系列不同质量浓度的天麻酪类化合物的对照标准品混合溶液进行分析， W天麻酪类化合物的已知质量浓度和对应的峰面积作为横纵坐标，建立各个已知天麻酪类 化合物标准曲线； W对照标准品混合溶液中各天麻酪类化合物的保留时间为基准，对待测天麻提取 物中天麻酪类化合物进行定性，将定性后的待测天麻提取物中天麻酪类化合物的峰面积代 入其对应天麻酪类化合物标准曲线中，对其进行定量。 步骤1)中所述天麻提取物的制备方法为溶剂提取法，其中优选己醇-水提取，所 述的提取方法可为回流提取、超声提取、微波辅助提取中的任意一种，优选制备方法为；天 麻药材用5-10倍的体积浓度70%己醇-水回流提取2~3次，提取液合并浓缩，用适量水分 散，1-2倍体积的己酸己醋萃取2-4次，得到的水层合并浓缩，即得。W8%甲醇-水为溶剂 制备天麻素、对居基苯甲醇、parishinB、pa;rishinC和parishin等对照品混合溶液和制备 天麻提取物供试品溶液，其中所述天麻酪类成分主要包括天麻素、对居基苯甲醇、parishin B>p曰rishinC和P曰rishin。 步骤2)中所述方法的色谱条件为；C18液相色谱柱；流动相为甲醇或己腊（A)-体 积分数0. 1~0. 5%酸水溶液度）；梯度程序洗脱；柱温；40~6(TC;流速；0. 25~0. 35ml/ min;激发波长215皿~235皿，发射波长295~335皿；进样量1~20μ1 ;其中优选条件为 流动相为甲醇-酸水溶液，酸优选甲酸，其体积分数为0. 5%。柱温为5(TC，流速为0. 35ml/ min,进样量为1μ1。激发波长为225皿，发射波长为310皿。 步骤3)中配制浓度为5, 25, 50, 250, 500, 2500ng/ml的天麻素、对居基苯甲醇、 parishinB、parishinC和parishin的混合对照品标准溶液进行标准曲线的测定。 已知天麻含有天麻素、对居基苯甲醇、对居基苯甲醒、parishin类成分，尤其是 parishinB、pa;rishinC和parishin在色谱图中清晰可见，峰面积较大，可将parishinB、 parishinC和parishin作为指标成分用于天麻的质量控制。采用本专利技术的含量测定方法 对天麻中具有代表性的五个成分进行测定，使天麻的成分更加明确、质量控制更加严格，为 天麻的质量控制提供数据。 本专利技术所述的含量测定方法具有W下优点： 1)本专利技术采用高效液相色谱-英光检测方法，在激发波长225nm，发射波长310nm 下可一次性对天麻药材或提取物中的天麻素、对居基苯甲醇、parishinB、parishinC和 parishin等多种酪类成分进行同时含量测定。提高了检测效率。该方法还未见文献报道。 2)本专利技术采用高效液相色谱-英光检测的手段，与常用的高效液相-紫外检测方 法相比，灵敏度可由ug/ml提高到ng/ml，提高了 1000倍。 3)该方法灵敏度高、精密度好、分析时间短，可用于天麻药材、天麻提取物中酪类 成分的快速、灵敏测定。【附图说明】 图 1 天麻素、对居基苯甲醇、parishin EkparishinC和pa;rishin200-290nm全激 发波长吸收图。 图2天麻素、对居基苯甲醇、parishin EkparishinC和pa;rishin280-500nm全发 射波长吸收图。 图3流动相从上到下依次为：己腊-水、己腊-0. 5 %甲酸水、甲醇-水、 甲醇-0. 5 %甲酸水，柱温50 °C，流速0. 35ml/min，色谱柱为AgilentZ0RBAX SB-C18(3. 0X100mm，1.8um)的色谱图。图4柱温从上到下依次为4(TC，5(TC，6(TC，流动相为甲醇-0. 5 %甲酸水，流速 0. 35ml/min，色谱柱为AgilentZ0RBAXSB-C18(3. 0X100mm，1.8um)的色谱图。图5流速从上到下依次为0. 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种同时定量测定天麻中多种酚类成分含量的方法，其特征在于：主要包括以下三个步骤， 1)对照标准品及供试待测品溶液的制备：将天麻酚类对照标准品及待测天麻提取物分别溶于体积浓度为0‑8％的甲醇或乙腈的水溶液中，制备对照标准品混合溶液和待测供试品溶液； 2)以高效液相色谱‑荧光检测方法为手段分别进行对照标准品混合溶液和待测供试品溶液成分的定量分析； 通过对一系列不同质量浓度的天麻酚类化合物的对照标准品混合溶液进行分析，获得对照标准品混合溶液中各天麻酚类化合物的保留时间及各天麻酚类化合物不同质量浓度对应的峰面积； 通过对待测供试品溶液的分析，获得待测天麻提取物中天麻酚类化合物的保留时间及对应的峰面积； 3)外标法测定天麻中酚类成分的含量； 通过对一系列不同质量浓度的天麻酚类化合物的对照标准品混合溶液进行分析，以天麻酚类化合物的已知质量浓度和对应的峰面积作为横纵坐标，建立各个已知天麻酚类化合物标准曲线； 以对照标准品混合溶液中各天麻酚类化合物的保留时间为基准，对待测天麻提取物中天麻酚类化合物进行定性，将定性后的待测天麻提取物中天麻酚类化合物的峰面积代入其对应天麻酚类化合物标准曲线中，对其进行定量。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：肖红斌，唐春兰，王莉，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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