本发明专利技术公开了一种柴达木大肥菇多糖脱蛋白、脱色方法，以野生柴达木大肥菇干粉为基材进行粗多糖的提取和粗多糖的脱蛋白与脱色，在脱蛋白工艺的优化过程中以多糖得率和以蛋白去除率为参考指标，3mg/mL的粗多糖溶液加入样品体积2倍的氯仿和正丁醇混合试剂，剧烈震荡反应20min，离心取上清液，由此，蛋白质的去除率可达91.36%，多糖得率可达81.88%；在脱色工艺的优化试验中以多糖得率和以色素去除率为参考指标，为4mg/mL的粗多糖溶液加入样品质量的6%的活性炭粉末，在40℃的温度条件下吸附40min，过滤除去活性炭。如此，粗多糖溶液的色素去除率可达91.78%，多糖得率可达87.2%。该方法具有高效、快速的优点，并能有效保持多糖活性和多糖得率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品检测加工
，具体涉及一种柴达木大肥菇在蛋白和色素方面的检测加工方法。
技术介绍
大肥蘑菇Agaricus bitorquis (Quél.) Sacc.（双层环伞菌）是青藏高原柴达木盆地特殊生态环境条件下的一种分类十分重要的野生大型食用真菌。主要分布于海拔从四周4000米到中部2600米的柴达木盆地德令哈、格尔木、诺木洪等地，生长在盆地戈壁地区表面盐层50-60厘米下，富含多种抗缺氧活性物质，被誉为“盆地四宝”之一，一直被当地牧民作为抗缺氧的天然食材广泛使用，为避免野生大肥菇的过度采摘和保护生态环境，目前柴达木大肥菇的人工栽培试验已获成功，为开发抗缺氧功能食品奠定了基础。柴达木大肥菇含有多糖、蛋白质、脂肪等营养成分，其中多糖成分具有较好的抗缺氧功效，是一种极具开发价值的食用菌多糖。柴达木大肥菇富含多种抗缺氧活性物质，其中的活性多糖是具有空间结构的复杂大分子，多与蛋白质分子相结合，所以脱去与活性多糖相结合的蛋白质分子是比较困难的，研究怎样在保持多糖活性的基础上脱去蛋白质的方法迫在眉睫。柴达木大肥菇粗多糖提取液中含有大量的色素成份，这些色素在一定程度上也会影响多糖的功能，怎样在最大程度上保持多糖的得率，而使脱色效果最好的脱色方法也是必不可少的。为了能在有限的柴达木大肥菇样品中获得更多的具有高活性的多糖，研究一种能在最大程度上保持多糖活性和多糖得率的脱蛋白、脱色方法是很有必要的。多糖的脱蛋白方法很多，其中Sevag法的脱蛋白环境较为温和，能够很好的保留多糖的活性，但对柴达木大肥菇多糖的脱蛋白效率比较低。多糖的脱色方法也很多，其中活性炭法操作简便、条件温和，能很好的保留多糖活性，但其脱色效率、多糖的损失率因多糖的种类、活性炭的种类而不尽相同，在此之前没有人对柴达木大肥菇粗多糖的脱蛋白和脱色工艺进行优化。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对现有技术存在的缺陷，提供一种可以有效、快速、并能在最大程度上保持多糖活性和多糖得率的柴达木大肥菇多糖脱蛋白、脱色方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种柴达木大肥菇多糖脱蛋白、脱色方法，其特征在于：首先将野生柴达木大肥菇子实体制成干粉，然后以其干粉为基材按以下工艺过程进行，一、粗多糖的提取(1)提取：称取野生柴达木大肥菇子实体干粉90g加入900ml水中充分混匀，分装到三个蒸馏瓶中，每个装到蒸馏瓶2/3处，连接好回流装置，将分装好样品的蒸馏瓶连接到回流装置上，然后放入80℃水浴锅中，提取12h；将样品从回流装置上取下，过滤，取其滤液测多糖浓度和蛋白质浓度，冷藏备用；(2) 浓缩：将提取的粗多糖溶液在旋转蒸发仪上浓缩，做好记录，然后冷藏保存；(3) 醇沉：取粗多糖浓缩液150ml加入450ml、95%的乙醇，得到体积比为1：3的溶液样品，醇沉24h，取其沉淀部分，置于离心机以6000r/min的转速下离心20min；(4) 干燥，复溶：取其沉淀放入65℃恒温干燥箱内干燥48h，取干燥后的样品与水复溶；二、粗多糖的脱蛋白与脱色工艺流程粗多糖溶液——加入氯仿和正丁醇——剧烈震荡——离心——加入活性炭——水浴——过滤——浓缩：(1) 取定量醇沉后的样品，按体积比为，样品：氯仿：正丁醇=2：4：1的比例分别加入氯仿和正丁醇；(2) 剧烈震荡20min，静置10min；(3) 取上清液，在6000r/min的条件下离心10min，取上清液，测多糖浓度和蛋白质含量；(4) 取脱蛋白后的样品，加入样品质量6%的活性炭，边搅拌边水浴40min，脱色40min后过滤；(5) 取滤液测多糖含量，在波长500 nm下测其吸光度，重复操作，直至样品颜色变为无色，测其多糖含量。优选地，样品蛋白含量的测定方法为，取1ml样品，加入5ml考马斯亮蓝G-250溶液，静止8—9min，在595nm波长处测吸光值，利用公式y = 7.2382x + 0.0199计算出蛋白质浓度。优选地，样品色素含量的测定方法为，配置多糖溶液浓度为4mg/mL的样品溶液5mL，加入0.3g的活性炭，分别在40℃、50℃、60℃、70℃、80℃ 温度条件下脱色40min，过滤去除活性炭，在500 nm波长处测量吸光度，按公式：脱色率/%=(脱色前吸光度-脱色后吸光度)/脱色前吸光度× 100%计算脱色率。本专利技术在脱蛋白工艺的优化过程中以多糖得率和以蛋白去除率为参考指标，3mg/mL的粗多糖溶液加入样品体积2倍的氯仿和正丁醇混合试剂（氯仿:正丁醇=4:1），剧烈震荡反应20min，离心取上清液，由此，蛋白质的去除率可达91.36%，多糖得率可达81.88%；在脱色工艺的优化试验中以多糖得率和以色素去除率为参考指标，为4mg/mL的粗多糖溶液加入样品质量的6%的活性炭粉末，在40℃的温度条件下吸附40min，过滤除去活性炭。如此，粗多糖溶液的色素去除率可达91.78%，多糖得率可达87.2%。具体实施方式下面结合具体实施方式做进一步说明：本实施例中，所述柴达木大肥菇多糖脱蛋白、脱色方法，首先将野生柴达木大肥菇子实体制成干粉，然后以其干粉为基材按以下工艺过程进行，一、粗多糖的提取(1)提取：称取野生柴达木大肥菇子实体干粉90g加入900ml水中充分混匀，分装到三个蒸馏瓶中，每个装到蒸馏瓶2/3处，连接好回流装置，将分装好样品的蒸馏瓶连接到回流装置上，然后放入80℃水浴锅中，提取12h；将样品从回流装置上取下，过滤，取其滤液测多糖浓度和蛋白质浓度，冷藏备用；(2) 浓缩：将提取的粗多糖溶液在旋转蒸发仪上浓缩，做好记录，然后冰箱冷藏保存；(3) 醇沉：取粗多糖浓缩液150ml加入450ml、95%的乙醇，得到体积比为1：3的溶液样品，醇沉24h，取其沉淀部分，置于离心机以6000r/min的转速下离心20min；(4) 干燥，复溶：取其沉淀放入65℃恒温干燥箱内干燥48h，取干燥后的样品与水复溶；二、粗多糖的脱蛋白与脱色工艺流程粗多糖溶液——加入氯仿和正丁醇——剧烈震荡——离心——加入活性炭——水浴——过滤——浓缩：(1) 取定量醇沉后的样品，按体积比为，样品：氯仿：正丁醇=2：4：1的比例分别加入氯仿和正丁醇；(2) 剧烈震荡20min，静置10min；(3) 取上清液，在6000r/min的条件下离心10min，取上清液，测多糖浓度和蛋白质含量；(4) 取脱蛋白后的样品，加入样品质量6%的活性炭，边搅拌边水浴40min，脱色40min后过滤；(5) 取滤液测多糖含量，在波长500 nm下测其吸光度，重复操作，直至样品颜色变为无色，测其多糖含量。样品蛋白含量的测定方法为，取1ml样品，加入5ml考马斯亮蓝G-250溶液，静止8—9min，在595nm波长处测吸光值，利用公式y = 7.2382x + 0.0199计算出蛋白质浓度。样品色素含量的测定方法为，配置多糖溶液浓度为4mg/mL的样品溶液5mL，加入0.3g的活性炭，分别在40℃、50℃、60℃、70℃、80℃ 温度条件下脱色40min，过滤去除活性炭，在500 nm波长处测量吸光度，按公式：脱色率/%=(脱色前吸光度-脱色后吸光度)/脱色前吸光度× 100%计算脱色率。样品多糖含量的测定方法为，取所测本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种柴达木大肥菇多糖脱蛋白、脱色方法，其特征在于：首先将野生柴达木大肥菇子实体制成干粉，然后以其干粉为基材按以下工艺过程进行，一、粗多糖的提取(1)提取：称取野生柴达木大肥菇子实体干粉90g加入900ml水中充分混匀，分装到三个蒸馏瓶中，每个装到蒸馏瓶2/3处，连接好回流装置，将分装好样品的蒸馏瓶连接到回流装置上，然后放入80℃水浴锅中，提取12h；将样品从回流装置上取下，过滤，取其滤液测多糖浓度和蛋白质浓度，冷藏备用；(2) 浓缩：将提取的粗多糖溶液在旋转蒸发仪上浓缩，做好记录，然后冷藏保存；(3) 醇沉：取粗多糖浓缩液150ml加入450ml、95%的乙醇，得到体积比为1：3的溶液样品，醇沉24h，取其沉淀部分，置于离心机以6000r/min的转速下离心20min；(4) 干燥，复溶：取其沉淀放入65℃恒温干燥箱内干燥48h，取干燥后的样品与水复溶；二、粗多糖的脱蛋白与脱色工艺流程粗多糖溶液——加入氯仿和正丁醇——剧烈震荡——离心——加入活性炭——水浴——过滤——浓缩：(1) 取定量醇沉后的样品，按体积比为，样品：氯仿：正丁醇=2：4：1的比例分别加入氯仿和正丁醇；(2) 剧烈震荡20min，静置10min；(3) 取上清液，在6000r/min的条件下离心10min，取上清液，测多糖浓度和蛋白质含量；(4) 取脱蛋白后的样品，加入样品质量6%的活性炭，边搅拌边水浴40min，脱色40min后过滤；(5) 取滤液测多糖含量，在波长500 nm下测其吸光度，重复操作，直至样品颜色变为无色，测其多糖含量。...
【技术特征摘要】
1.一种柴达木大肥菇多糖脱蛋白、脱色方法，其特征在于：首先将野生柴达木大肥菇子实体制成干粉，然后以其干粉为基材按以下工艺过程进行，一、粗多糖的提取(1)提取：称取野生柴达木大肥菇子实体干粉90g加入900ml水中充分混匀，分装到三个蒸馏瓶中，每个装到蒸馏瓶2/3处，连接好回流装置，将分装好样品的蒸馏瓶连接到回流装置上，然后放入80℃水浴锅中，提取12h；将样品从回流装置上取下，过滤，取其滤液测多糖浓度和蛋白质浓度，冷藏备用；(2) 浓缩：将提取的粗多糖溶液在旋转蒸发仪上浓缩，做好记录，然后冷藏保存；(3) 醇沉：取粗多糖浓缩液150ml加入450ml、95%的乙醇，得到体积比为1：3的溶液样品，醇沉24h，取其沉淀部分，置于离心机以6000r/min的转速下离心20min；(4) 干燥，复溶：取其沉淀放入65℃恒温干燥箱内干燥48h，取干燥后的样品与水复溶；二、粗多糖的脱蛋白与脱色工艺流程粗多糖溶液——加入氯仿和正丁醇——剧烈震荡——离心——加入活性炭——水浴——过滤——浓缩：(1) 取定量醇沉后的样品，按体积...
【专利技术属性】
技术研发人员：焦迎春，余梅，金慧敏，
申请(专利权)人：青海大学，
类型：发明
国别省市：青海;63
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