用于细胞内递送分子的肽和纳米颗粒制造技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于细胞内递送分子的肽和纳米颗粒
本专利技术涉及肽和含肽复合物/纳米颗粒，其可用于稳定和递送货物分子(cargomolecule)比如核酸。
技术介绍
虽然小分子在许多情况下依然是在临床中使用的主要药物，但是它们的治疗影响已经达到极限比如到达靶标的能力不足、缺乏特异性、需要高剂量——其导致毒性和严重的副作用。在过去十年内，为了规避小分子和基于基因的疗法的限制，我们已经在较大的治疗性分子比如蛋白质、肽和核酸——其对它们的靶标呈现高特异性但是不遵循五倍率法则(Lipinski’srules)——的发现中见证了急剧的加速。这些分子的药物效力依然受限于它们差的体内稳定性和它们低的细胞中摄取。因此，“递送”已经成为治疗难题的核心部分(centralpiece)并且新的里程碑已经被建立以验证递送策略：(a)缺乏毒性、(b)低剂量下的体内效率、(c)易于处理用于治疗应用、(d)快速的内体释放、和(e)达到靶标的能力。虽然病毒性递送策略已经给基因和细胞疗法很大希望，但是它们的临床应用已经遭受副作用和毒性作用(Ibraheemetal.(2014)IntJPharm459,70-83)。研究主要集中于非病毒性策略的研发，并且已经提出了不同的方法，包括脂质、聚阳离子纳米颗粒和基于肽的制剂，但是这些技术中仅少数在体内有效并且已经达到临床水平(Yinetal.(2014)NatRevGenet15,541-555)。细胞穿透肽(CPP)是最有希望的非病毒性策略之一。虽然CPP的定义在不断地发展，但是它们通常被描述为衍生自蛋白质或嵌合序列的少于30个氨基酸的短肽。它们经常是两亲的并...
【技术保护点】
非天然存在的肽，其包括氨基酸序列X1KWRSX2X3X4RWRLWRX5X6X7X8SR(SEQ ID NO:1)，其中X1是任意氨基酸或无，并且其中X2‑X8是任意氨基酸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.24 FR 14/030041.非天然存在的肽，其包括氨基酸序列X1KWRSX2X3X4RWRLWRX5X6X7X8SR(SEQIDNO:1)，其中X1是任意氨基酸或无，并且其中X2-X8是任意氨基酸。2.权利要求1所述的肽，其中X1是βA、S或无，X2是A或V，X3是G或L，X4是W或Y，X5是V或S，X6是R、V或A，X7是S或L，并且X8是W或Y。3.权利要求2所述的肽，其中所述肽包括如下的氨基酸序列：a)KWRSAGWRWRLWRVRSWSR(SEQIDNO:2)、b)KWRSALYRWRLWRSRSWSR(SEQIDNO:3)、或c)KWRSALYRWRLWRSALYSR(SEQIDNO:4)。4.权利要求1-3中任一项所述的肽，其中所述肽的长度是19或20个氨基酸。5.权利要求1-4中任一项所述的肽，其中所述肽包括L-氨基酸。6.权利要求1-5中任一项所述的肽，其中所述肽包括D-氨基酸。7.权利要求1-4中任一项所述的肽，其进一步包括共价连接至所述肽的N-端的一个或多个部分，其中所述一个或多个部分选自乙酰基、硬脂酰基、脂肪酸、胆固醇、聚乙二醇、核定位信号、核输出信号、抗体或其抗体片段、肽、多糖、和靶向分子。8.权利要求5所述的肽，其中所述肽包括共价连接至其N-端的乙酰基。9.权利要求1-6中任一项所述的肽，其进一步包括共价连接至所述肽的C-端的一个或多个部分，其中所述一个或多个部分选自半胱酰胺基团、半胱氨酸、硫醇、酰胺、次氨基三乙酸、羧基、直链或支链C1-C6烷基、伯胺与仲胺、栀子酸衍生物、脂质、磷脂、脂肪酸、胆固醇、聚乙二醇、核定位信号、核输出信号、抗体或其抗体片段、肽、多糖、和靶向分子。10.权利要求7所述的肽，其中所述肽包括共价连接至其C-端的半胱酰胺基团。11.权利要求1-8中任一项所述的肽，其中所述肽包括被三或六个残基分隔的两个残基，其通过烃键连接。12.权利要求9所述的肽，其中所述肽包括如下的氨基酸序列：aa)KWRSSAGWRSWRLWRVRSWSR(SEQIDNO:7)、ab)KWRSSAGWRWRSLWRVRSWSR(SEQIDNO:8)、ac)KWRSAGWRSWRLWRVRSSWSR(SEQIDNO:9)、ba)KWRSSALYRSWRLWRSRSWSR(SEQIDNO:10)、bb)KWRSSALYRWRSLWRSRSWSR(SEQIDNO:11)、bc)KWRSALYRSWRLWRSRSSWSR(SEQIDNO:12)、bd)KWRSALYRWRSLWRSSRSWSR(SEQIDNO:13)、be)KWRSALYRWRLWRSSRSWSSR(SEQIDNO:14)、ca)KWRSSALYRWRSLWRSALYSR(SEQIDNO:15)、cb)KWRSSALYRSWRLWRSALYSR(SEQIDNO:16)、cc)KWRSALYRWRSLWRSSALYSR(SEQIDNO:17)、或cd)KWRSALYRWRLWRSSALYSSR(SEQIDNO:18)，并且其中使用下标“S”标记的残基是由所述烃键连接的所述两个残基。13.复合物，其包括权利要求1-10中任一项所述的肽和货物分子。14.权利要求11所述的复合物，其中所述货物分子是核酸。15.权利要求12所述的复合物，其中所述核酸选自siRNA、miRNA、DNA质粒、和其类似物。16.权利要求12所述的复合物，其中所述核酸是寡核苷酸。17.权利要求12-14中任一项所述的复合物，其中所述核酸选自单链RNA、单链DNA、双链RNA、双链DNA、和其衍生物。18.权利要求12-15中任一项所述的复合物，其中所述核酸的长度是大约2至大约40个核苷酸。19.权利要求12-15中任一项所述的复合物，其中所述核酸的长度是多至大约100个核苷酸。20.权利要求12-13和15中任一项所述的复合物，其中所述核酸的长度是大于大约100个核苷酸。21.权利要求13所述的复合物，其中所述DNA质粒编码嵌合抗原受体，其包括与靶抗原特异性结合的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域、和细胞内信号传导结构域。22.权利要求19所述的复合物，其中所述靶抗原选自CD19、CD20、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM、BCMA、CD70、CD74、CD38、CD138、CD33、Lewis-Y、CD123、CD44v6和CS1。23.纳米颗粒，其包括权利要求1-10中任一项所述的肽和货物分子。24.权利要求21所述的纳米颗粒，其中所述货物分子是核酸。25.权利要求22所述的纳米颗粒，其中所述核酸选自siRNA、miRNA、DNA质粒、和其类似物。26.权利要求22所述的纳米颗粒，其中所述核酸是寡核苷酸。27.权利要求22-24中任一项所述的纳米颗粒，其中所述核酸选自单链RNA、单链DNA、双链RNA、双链DNA、和其衍生物。28.权利要求22-25中任一项所述的纳米颗粒，其中所述核酸的长度是大约2至大约40个核苷酸。29.权利要求22-23中任一项所述的纳米颗粒，其中所述核酸的长度是多至大约100个核苷酸。30.权利要求22、23和25中任一项所述的纳米颗粒，其中所述核酸的长度是大于大约100个核苷酸。31.权利要求23所述的纳米颗粒，其中所述DNA质粒编码嵌合抗原受体，其包括与靶抗原特异性结合的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域、和细胞内信号传导结构域。32.权利要求29所述的纳米颗粒，其中所述靶抗原选自CD19、CD20、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM、BCMA、CD70、CD74、CD38、CD138、CD33、Lewis-Y、CD123、CD44v6和CS1。33.权利要求21-30中任一项所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒中所述货物分子与所述肽的摩尔比是大约1∶1至大约1∶80。34.权利要求31所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒中所述货物分子与所述肽的摩尔比是大约1∶5至大约1∶40。35.权利要求21-32中任一项所述的纳米颗粒，其中所述货物分子与装配分子复合以形成所述纳米颗粒的核心。36.权利要求33所述的纳米颗粒，其中所述装配分子选自肽、蛋白质、抗体、脂质、磷脂、聚合物、适配体、纳米颗粒、脂质体、树状聚体、聚合物囊泡、病毒载体、和微团。37.权利要求33所述的纳米颗粒，其中所述装配分子是权利要求1-10中任一项所述的肽。38.权利要求33所述的纳米颗粒，其中所述装配分子不是权利要求1-10中任一项所述的肽。39.权利要求21-36中任一项所述的纳米颗粒，其进一步包括表层。40.权利要求37所述的纳米颗粒，其中所述表层包括权利要求1-10中任一项所述的肽。41.权利要求37所述的纳米颗粒，其中所述表层包括细胞穿透肽，其不是权利要求1-10中任一项所述的肽。42.权利要求37-39中任一项所述的纳米颗粒，其进一步包括中间层。43.权利要求40所述的纳米颗粒，其中所述中间层包括权利要求1-10中任一项所述的肽。44.权利要求40所述的纳米颗粒，其中所述中间层包括细胞穿透肽，其不是权利要求1-10中任一项所述的肽。45.权利要求21-42中任一项所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒包括在表面的靶向部分。46.权利要求43所述的纳米颗粒，其中所述靶向部分被连接至肽。47.权利要求44所述的纳米颗粒，其中所述肽被共价连接至所述靶向部分。48.权利要求43-45中任一项所述的纳米颗粒，其中所述靶向部分将所述纳米颗粒靶向至组织。49.权利要求21-46中任一项所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒包括多种货物分子。50.权利要求21-47中任一项所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒的平均直径是大约10nm至大约300nm。51.权利要求48所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒的平均直径是大约50nm至大约200nm。52.权利要求49所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒的平均直径是大约80nm至大约140nm。53.权利要求21-50中任一项所述的纳米颗粒，其中ζ电位的绝对值小于大约30mV。54.权利要求51所述的纳米颗粒，其中ζ电位的绝对值小于大约10mV。55.药物组合物，其包括权利要求11-20中任一项所述的复合物或权利要求21-52中任一项所述的纳米颗粒，和药学上可接受的载体。56.权利要求53所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制用于静脉内、瘤内、动脉内、外用、眼内、眼部、颅内、鞘内、囊内、皮内、皮下、肌肉内、鼻内、气管内、肺部、腔内、或口服施用。57.权利要求53所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载体是糖或蛋白质。58.权利要求55所述的药物组合物，其中所述糖选自蔗糖、葡萄糖、甘露醇、和其组合，并且以大约5％至大约20％的浓度存在于所述药物组合物中。59.权利要求55所述的药物组合物，其中所述蛋白质是白蛋白。60.权利要求53-57中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物被冷冻干燥。61.制备权利要求21-52中任一项所述的纳米颗粒的方法，其包括：a)使包括权利要求1-10中任一项所述的肽的组合物与包括所述货物分子的组合物组合以形成混合物；和b...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·迪维塔，N·德赛，
申请(专利权)人：阿迪根有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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