【技术实现步骤摘要】
专利
本专利技术涉及可用于稳定化和/或向细胞内递送一种或多种基因组编辑系统分子如crispr相关蛋白质和核酸的含肽复合物/纳米颗粒。以ascii文本文件提交序列表下列以ascii文本文件提交的内容其整体通过引用被并入本文：计算机可读形式(crf)的序列表(文件名称：737372000840seqlist.txt，记录日期：2017年5月26日，大小：48kb)。
技术介绍
1、crispr介入技术具有巨大的潜在用途，包括改变人类、动物和其它生物体的种系，和修饰食品作物的基因。通过向细胞内递送crispr相关核酸酶如cas9或cpf1和适当的指导rna，生物体的基因组可在几乎任何期望的位置处被切割(ledford,h.(2015).nature.522(7554)；zetsche et al.,(2015).cell.163(3):759–771)。crispr已与特定核酸内切酶结合被用于多个不同物种的基因组编辑和基因调节(mali et al.,(2013).naturemethods.10(10):957–63)。crispr工具已被用于各种基因组修饰，包括双链断裂形成——非同源末端接合(nhej)介导的诱变(wang et al.,(2013).cell.153:910–918)、切口形成——nhej介导的诱变(cheng et al.(2014).febs lett.588:3954–3958)、敲入——同源依赖性修复(hdr)(inui et al.(2014).sci.rep.4:5396)、和基因组-重排(ma
2、本文提到的所有出版物、专利、专利申请和公开专利申请的公开内容其整体特此通过引用被并入本文。
技术实现思路
1、本申请提供复合物和纳米颗粒，其包括可用于稳定化和/或向细胞内递送一种或多种基因组编辑系统分子如crispr相关蛋白质和核酸的细胞穿透肽。
2、在一些实施方式中，提供了用于修饰靶多核苷酸的基因组编辑复合物，其包括与rgen/grna复合物缔合(associated)的细胞穿透肽，该rgen/grna复合物包括rna指导的核酸内切酶(rgen)和指导rna(grna)，其中grna包括与靶多核苷酸中的靶序列互补的指导序列。
3、在一些实施方式中，提供了用于修饰靶多核苷酸的基因组编辑复合物，其包括细胞穿透肽和靶向靶多核苷酸的一种或多种基因组编辑系统分子，其中细胞穿透肽选自vepep-3肽、vepep-6肽、vepep-9肽、和adgn-100肽。在一些实施方式中，一种或多种基因组编辑系统分子选自：a)rna指导的核酸内切酶(rgen)和指导rna(grna)，其中grna包括与靶多核苷酸中的靶序列互补的指导序列；b)dna指导的核酸内切酶(dgen)和指导dna(gdna)，其中gdna包括与靶多核苷酸中的靶序列互补的指导序列；c)锌指蛋白(zfp)，其中zfp识别靶多核苷酸中的靶序列；d)转录激活因子样效应物核酸酶(talen)，其中talen识别靶多核苷酸中的靶序列；e)归巢核酸内切酶，其中归巢核酸内切酶识别靶多核苷酸中的靶序列；和f)整合酶，其中整合酶识别靶多核苷酸中的重组位点。
4、在一些实施方式中，根据任意上述基因组编辑复合物，细胞穿透肽是vepep-3肽。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括选自seq id nos：1-14的氨基酸序列。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括seq id no：75或76的氨基酸序列。
5、在一些实施方式中，细胞穿透肽是vepep-6肽。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括选自seq id nos：15-40的氨基酸序列。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括seq id no：77的氨基酸序列。
6、在一些实施方式中，根据任意上述基因组编辑复合物，细胞穿透肽是vepep-9肽。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括选自seq id nos：41-52的氨基酸序列。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括seq id no：78的氨基酸序列。
7、在一些实施方式中，根据任意上述基因组编辑复合物，细胞穿透肽是adgn-100肽。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括选自seq id nos：53-70的氨基酸序列。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括seq id no：79或80的氨基酸序列。
8、在一些实施方式中，根据任意上述基因组编辑复合物，细胞穿透肽进一步包括共价连接至细胞穿透肽n端的一个或多个部分，并且其中所述一个或多个部分选自乙酰基、脂肪酸、胆固醇、聚乙二醇、核定位信号、核输出信号、抗体、多糖和靶向分子。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括共价连接至其n端的乙酰基基团。在一些实施方式中，细胞穿透肽进一步包括共价连接至细胞穿透肽c端的一个或多个部分，并且其中所述一个或多个部分选自半胱酰胺、半胱氨酸、硫醇、酰胺、任选地被取代的次氮基三乙酸、羧基、任选地被取代的线性或分支c1-c6烷基、伯胺或仲胺、糖苷(osidic)衍生物、脂质、磷脂、脂肪酸、胆固醇、聚乙二醇、核定位信号、核输出信号、抗体、多糖和靶向分子。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括共价连接至其c端的半胱酰胺基团。
9、在一些实施方式中，根据任意上述基因组编辑复合物，基因组编辑复合物中至少一些细胞穿透肽通过键合(连接，linkage)连接至靶向部分。在一些实施方式中，键合是共价的。
10、在一些实施方式中，根据任意上述包括grna的基因组编辑复合物，grna是单指导rna(sgrna)。在一些实施方式中，sgrna包括融合于辅助反式激活crrna(tracrrna)的、决定特异性的(specificity-determining)crispr rna(crrna)。在一些实施方式中，grna是sgrna，其包括指导序列、tracr配偶(mate)序列、tracr序列、和尾部序列。
11、在一些实施方式中，根据任意上述包括rgen的基因组编辑复合物，rgen是cas9。
12、在一些实施方式中，根据任意上述包括rgen和grna的基因组编辑复合物，rgen与grna的摩尔比在约1：10和约10：1之间。
13、在一些实施方式中，根据任意上述包括rgen的基因组编辑复合物，细胞穿透肽与rgen的摩尔比在约1：1和约80：1之间(如约1：1、5：1、10：1、20：1、30：1、40：1、50：1、60：1、70：1、80：1中的任一者，包括这些比例之间的任何范围)。在一些实施方式中，细胞穿透肽与rgen的摩尔比在约5：1和约20本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于修饰靶多核苷酸的基因组编辑复合物，其包括细胞穿透肽和一种或多种基因组编辑系统分子，其中所述细胞穿透肽选自VEPEP-6肽、VEPEP-3肽、VEPEP-9肽，并且其中所述一种或多种基因组编辑系统分子选自：
2.权利要求1所述的基因组编辑复合物，其中所述细胞穿透肽是VEPEP-6肽。
3.权利要求2所述的基因组编辑复合物，其中所述细胞穿透肽包括选自SEQ ID NOs：15-40或77的氨基酸序列。
4.纳米颗粒，其包括核芯，所述核芯包括权利要求1-3中任一项所述的基因组编辑复合物。
5.药物组合物，其包括权利要求1-3中任一项所述的基因组编辑复合物或权利要求4所述的纳米颗粒，和药学上可接受的载体。
6.制备权利要求1-3中任一项所述的基因组编辑复合物的方法，包括组合所述细胞穿透肽与所述一种或多种基因组编辑系统分子，从而形成所述基因组编辑复合物。
7.将一种或多种基因组编辑系统分子递送到细胞中的方法，包括使所述细胞接触权利要求1-3中任一项所述的基因组编辑复合物或权利要求4所述的纳米颗粒，其中所述基因组
8.修饰细胞中的靶多核苷酸的方法，包括使细胞接触权利要求1-3中任一项所述的基因组编辑复合物或权利要求4所述的纳米颗粒，其中所述基因组编辑复合物或所述纳米颗粒包括靶向所述靶多核苷酸中的序列的一种或多种基因组编辑系统分子。
9.治疗个体的疾病的方法，包括给予所述个体有效量的权利要求5所述的药物组合物。
10.试剂盒，其包括组合物，所述组合物包括权利要求1-3中任一项所述的基因组编辑复合物和/或权利要求4所述的纳米颗粒。
...【技术特征摘要】
1.用于修饰靶多核苷酸的基因组编辑复合物，其包括细胞穿透肽和一种或多种基因组编辑系统分子，其中所述细胞穿透肽选自vepep-6肽、vepep-3肽、vepep-9肽，并且其中所述一种或多种基因组编辑系统分子选自：
2.权利要求1所述的基因组编辑复合物，其中所述细胞穿透肽是vepep-6肽。
3.权利要求2所述的基因组编辑复合物，其中所述细胞穿透肽包括选自seq id nos：15-40或77的氨基酸序列。
4.纳米颗粒，其包括核芯，所述核芯包括权利要求1-3中任一项所述的基因组编辑复合物。
5.药物组合物，其包括权利要求1-3中任一项所述的基因组编辑复合物或权利要求4所述的纳米颗粒，和药学上可接受的载体。
6.制备权利要求1-3中任一项所述的基因组编辑复合物的方法，包括组合所述细胞穿透肽与...
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