用于分子的细胞内递送的肽和纳米颗粒制造技术

本申请涉及用于货物分子的细胞内递送的货物递送复合物，所述货物递送复合物包括：包括细胞穿透肽(CPP)的第一肽、包括细胞穿透肽的第二肽、和货物分子。第二肽包括连接到第二CPP的聚乙二醇(PEG)部分，并且第一肽不具有PEG部分。本申请还涉及包括CPP和货物分子的货物递送复合物，其中CPP是反向

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于分子的细胞内递送的肽和纳米颗粒
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2019年4月17日提交的法国申请号FR1904115的优先权的权益，其内容通过引用以其整体并入本文，用于所有目的。


[0003]本专利技术涉及含肽复合物/纳米颗粒，其用于将货物分子(cargo molecules)递送到细胞中。

技术介绍

[0004]本文提及的所有出版物、专利、专利申请和已公布的专利申请的公开内容特此通过引用以其整体并入本文。
[0005]虽然小分子在许多情况下仍然是在临床中使用的主要药物，但是它们的治疗影响已经达到极限，比如到达靶标的能力不足、缺乏特异性、需要高剂量——其导致毒性和严重的副作用。在过去十年内，为了规避小分子和基于基因的疗法的限制，我们已经在较大的治疗性分子比如蛋白质、肽和核酸——其对它们的靶标呈现高特异性但是不遵循里宾斯基规则(Lipinski
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s rules)——的发现中见证了急剧的加速。这些分子的药物效力仍然受限于它们差的体内稳定性和它们低的细胞中摄取。因此，“递送”已经成为治疗难题的核心部分(central piece)并且新的里程碑已经被建立以验证递送策略：(a)缺乏毒性、(b)低剂量下的体内效率、(c)易于处理用于治疗应用、(d)快速的内体释放、和(e)达到靶标的能力。虽然病毒性递送策略已经给基因和细胞疗法很大希望，但是它们的临床应用已经遭受副作用和毒性作用(Ibraheem等(2014)Int J Pharm 459,70
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83)。研究主要集中于非病毒性策略的研发，并且已经提出了不同的方法，包括脂质、聚阳离子纳米颗粒和基于肽的制剂，但是这些技术中仅少数在体内有效并且已经达到临床水平(Yin等(2014)Nat Rev Genet 15,541
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555)。因此，需要用于在靶细胞内部有效递送mRNA或RNAi的改进方法。

技术实现思路

[0006]本申请提供了用于货物分子的细胞内递送的货物递送复合物和纳米颗粒。在一些实施方式中，用于货物分子的细胞内递送的货物递送复合物包括：a)包括第一细胞穿透肽的第一肽；b)包括第二细胞穿透肽的第二肽；和c)货物分子，其中第二肽包括与第二细胞穿透肽共价连接的聚乙二醇(PEG)部分，并且其中第一肽不具有PEG部分。在一些实施方式中，用于货物分子的细胞内递送的货物递送复合物包括细胞穿透肽和货物分子，其中细胞穿透肽是反向
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翻转肽(retro
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inverso peptide)。在一些实施方式中，用于货物分子的细胞内递送的货物递送复合物包括：a)包括细胞穿透肽的肽；和b)货物分子，其中所述肽进一步包括选自GYVSK、GYVS、YIGS和YIGSR的靶向序列。在一些实施方式中，货物分子选自核酸、病毒、多肽、蛋白质/核酸复合物(protein/nucleic complex)、病毒样颗粒、和蛋白质复合物。在一些实施方式中，货物分子不包括病毒。在一些实施方式中，诸如(第一或第二细胞穿透
肽的细胞穿透肽选自CADY、PEP
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1肽、PEP
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2肽、PEP
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3肽、VEPEP
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3肽、VEPEP
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6肽、VEPEP
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9肽和ADGN
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100肽。
[0007]在一些实施方式中，提供了用于货物分子的细胞内递送的货物递送复合物，所述货物递送复合物包括：a)包括第一细胞穿透肽的第一肽；b)包括第二细胞穿透肽的第二肽；和c)货物分子，其中第二肽包括与第二细胞穿透肽共价连接的聚乙二醇(PEG)部分，并且其中第一肽不具有PEG部分。在一些实施方式中，第一和第二细胞穿透肽选自CADY、PEP
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1肽、PEP
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2肽、PEP
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3肽、VEPEP
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3肽、VEPEP
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6肽、VEPEP
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9肽和ADGN
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100肽。在一些实施方式中，第一和第二细胞穿透肽选自VEPEP
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3肽、VEPEP
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6肽、VEPEP
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9肽和ADGN
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100肽。在一些实施方式中，第一和/或第二细胞穿透肽是VEPEP
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3肽。在一些实施方式中，VEPEP
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3肽包括选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:1
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14、75、76和113
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115。在一些实施方式中，第一和/或第二细胞穿透肽是VEPEP
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6肽。在一些实施方式中，VEPEP
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6肽包括选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:15
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40、77、85、92
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100、105、107
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109和129
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139。在一些实施方式中，第一和/或第二细胞穿透肽是VEPEP
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9肽。在一些实施方式中，VEPEP
‑
9肽包括选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:41
‑
52、78和116
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120。在一些实施方式中，第一和/或第二细胞穿透肽是ADGN
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100肽。在一些实施方式中，ADGN
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100肽包括选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:53
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70、79、80、86
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91、101
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104、106、110
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112和121
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128。在一些实施方式中，第一和第二细胞穿透肽是相同的。在一些实施方式中，货物分子选自核酸、病毒、多肽、蛋白质/核酸复合物、病毒样颗粒、和蛋白质复合物。在一些实施方式中，货物分子是核酸。在一些实施方式中，核酸选自siRNA、miRNA、shRNA、gRNA、mRNA、DNA、DNA质粒、寡核苷酸及其类似物。在一些实施方式中，核酸包括mRNA。在一些实施方式中，核酸包括或进一步包括RNAi。在一些实施方式中，核酸包括mRNA和RNAi，并且其中mRNA编码用于治疗疾病或状况的治疗性蛋白质，并且其中RNAi靶向RNA，其中RNA的表达与疾病或状况相关。在一些实施方式中，细胞穿透肽与核酸的摩尔比在约1:1与约100:1之间。在一些实施方式中，货物递送复合物的平均直径在约20nm与约1000nm之间。在一些实施方式中，第一细胞穿透肽与第二细胞穿透肽的比约为50:1。在一些实施方式中，PEG部分是线性PEG。在一些实施方式中，PEG部分是支化PEG。在一些实施方式中，PEG部分的分子量为约5kDa至约10kDa。在一些实施方式中，PEG部分由约一至十个乙二醇单元组成。在一些实施方式中，PEG部分与第二细胞穿透肽的N
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于货物分子的细胞内递送的货物递送复合物，所述货物递送复合物包括：a)包括第一细胞穿透肽的第一肽；b)包括第二细胞穿透肽的第二肽；和c)货物分子，其中所述第二肽包括与所述第二细胞穿透肽共价连接的聚乙二醇(PEG)部分，并且其中所述第一肽不具有PEG部分。2.根据权利要求1所述的货物递送复合物，其中所述第一细胞穿透肽和所述第二细胞穿透肽选自CADY、PEP
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1肽、PEP
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2肽、PEP
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3肽、VEPEP
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3肽、VEPEP
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6肽、VEPEP
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9肽和ADGN
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100肽。3.根据权利要求1或权利要求2所述的货物递送复合物，其中所述第一细胞穿透肽和所述第二细胞穿透肽选自VEPEP
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3肽、VEPEP
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6肽、VEPEP
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9肽和ADGN
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100肽。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的货物递送复合物，其中所述第一细胞穿透肽和/或所述第二细胞穿透肽是VEPEP
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3肽。5.根据权利要求4所述的货物递送复合物，其中所述VEPEP
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3肽包括选自SEQ ID NO:1
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14、75和76的氨基酸序列。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的货物递送复合物，其中所述第一细胞穿透肽和/或所述第二细胞穿透肽是VEPEP
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6肽。7.根据权利要求6所述的货物递送复合物，其中所述VEPEP
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6肽包括选自SEQ ID NO:15
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40和77的氨基酸序列。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的货物递送复合物，其中所述第一细胞穿透肽和/或所述第二细胞穿透肽是VEPEP
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9肽。9.根据权利要求8所述的货物递送复合物，其中所述VEPEP
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9肽包括选自SEQ ID NO:41
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52和78的氨基酸序列。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的货物递送复合物，其中所述第一细胞穿透肽和/或所述第二细胞穿透肽是ADGN
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100肽。11.根据权利要求10所述的货物递送复合物，其中所述ADGN
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100肽包括选自SEQ ID NO:53
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70、79和80的氨基酸序列。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的货物递送复合物，其中所述第一细胞穿透肽和所述第二细胞穿透肽是相同的。13.根据权利要求1
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12中任一项所述的货物递送复合物，其中所述货物分子选自核酸、病毒、多肽、蛋白质/核酸复合物、病毒样颗粒、和蛋白质复合物。14.根据权利要求13所述的货物递送复合物，其中所述货物分子是核酸。15.根据权利要求14所述的货物递送复合物，其中所述核酸选自siRNA、miRNA、shRNA、gRNA、mRNA、DNA、DNA、DNA质粒、寡核苷酸及其类似物。16.根据权利要求15所述的货物递送复合物，其中所述核酸包括mRNA。17.根据权利要求15或权利要求16所述的货物递送复合物，其中所述核酸包括RNAi。18.根据权利要求16或权利要求17所述的货物递送复合物，其中所述核酸包括mRNA及RNAi，并且其中所述mRNA编码用于治疗疾病或状况的治疗性蛋白质，并且其中所述RNAi靶向RNA，其中所述RNA的表达与所述疾病或状况相关联。19.根据权利要求14
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18中任一项所述的货物递送复合物，其中所述细胞穿透肽与所述核酸的摩尔比在约1:1与约100:1之间。
20.根据权利要求14
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19中任一项所述的货物递送复合物，其中所述货物递送复合物的平均直径在约20nm与约1000nm之间。21.根据权利要求1
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20中任一项所述的货物递送复合物，其中所述第一细胞穿透肽与所述第二细胞穿透肽的比为约20:1至约1:1。22.根据权利要求1
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21中任一项所述的货物递送复合物，其中所述PEG部分是线性PEG。23.根据权利要求1
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21中任一项所述的货物递送复合物，其中所述PEG部分是支化PEG。24.根据权利要求1
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23中任一项所述的货物递送复合物，其中所述PEG部分的分子量为约0.05kDa至约50kDa。25.根据权利要求1
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24中任一项所述的货物递送复合物，其中所述PEG部分由约一至十个乙二醇单元组成。26.根据权利要求1
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25中任一项所述的货物递送复合物，其中所述PEG部分与所述第二细胞穿透肽的N
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末端或C
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末端缀合。27.根据权利要求1
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25中任一项所述的货物递送复合物，其中所述PEG部分与所述第二细胞穿透肽内的位点缀合。28.根据权利要求1
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27中任一项所述的货物递送复合物，其中所述第一肽和/或所述第二肽进一步包括选自以下的一个或多个部分：乙酰基、硬脂酰基、脂肪酸、胆固醇、核定位信号、核输出信号、抗体或其抗体片段、肽、多糖、和靶向序列，其中所述一个或多个部分共价连接到所述第一细胞穿透肽或所述第二细胞穿透肽的N
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末端，或所述PEG部分。29.根据权利要求28所述的货物递送复合物，其中所述一个或多个部分通过连接体与所述第一细胞穿透肽、所述第二细胞穿透肽的N
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末端或所述PEG部分共价连接。30.根据权利要求28所述的货物递送复合物，其中所述一个或多个部分包括靶向序列。31.根据权利要求30所述的货物递送复合物，其中所述靶向序列选自GY、YV、VS、SK、GYV、YVS、VSK、GYVS、YVSK、YI、IG、GS、SR、YIG、IGS、GSR、YIGS和IGSR。32.根据权利要求31所述的货物递送复合物，其中所述靶向序列选自GYVSK、GYVS、YIGS和YIGSR。33.根据权利要求30
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32中任一项所述的货物递送复合物，其中所述靶向序列通过连接体与所述第一细胞穿透肽或所述第二细胞穿透肽共价连接。34.根据权利要求28
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33中任一项所述的货物递送复合物，其中所述一个或多个部分包括乙酰基和/或硬脂酰基。35.根据权利要求1
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34中任一项所述的货物递送复合物，其中所述第一肽和/或所述第二肽进一步包括选自以下的一个或多个部分：半胱酰胺、半胱氨酸、硫醇、酰胺、任选地取代的次氮基三乙酸、羧基、任选地取代的线性或分支C1‑
C6烷基、伯胺或仲胺、糖苷衍生物、脂质、磷脂、脂肪酸、胆固醇、核定位信号、核输出信号、抗体、多糖和靶向序列，其中所述一个或多个部分共价连接到所述第一细胞穿透肽、所述第二细胞穿透肽的C
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末端或所述PEG部分。36.根据权利要求35所述的货物递送复合物，其中所述一个或多个部分通过连接体共价连接到所述第一细胞穿透肽、所述第二细胞穿透肽的C
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末端或所...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：阿迪根有限公司，
类型：发明
国别省市：