用于细胞内递送病毒的肽和纳米颗粒制造技术

本发明专利技术涉及用于将一种或多种病毒(诸如，重组病毒，如，重组AAV)递送入细胞内和/或掩蔽该一种或多种病毒上的抗原表位的含肽复合物/纳米颗粒。

Peptides and nanoparticles for intracellular delivery of viruses

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于细胞内递送病毒的肽和纳米颗粒相关申请本申请要求2017年8月10日提交的法国申请号1757647的权益以及优先权。该法国申请的内容通过引用全文并入本文。
本专利技术涉及用于将一种或多种病毒(诸如重组病毒，如重组AAV)递送至细胞内和/或掩蔽该一种或多种病毒上的抗原表位的含肽复合物/纳米颗粒。
技术介绍
在此引用的所有出版物、专利、专利申请和公开的专利申请的公开内容均通过引用全文并入本文。
技术实现思路
本申请提供了包含细胞穿透肽的复合物和纳米颗粒，其可用于将一种或多种病毒(诸如重组病毒，如重组AAV)递送至细胞内和/或掩蔽该一种或多种病毒上的抗原表位。在一些实施方式中，病毒包含转基因，并且病毒的细胞内递送允许将转基因转移到细胞基因组中。在一些实施方式中，转基因编码蛋白质，例如治疗性蛋白质。在一些实施方式中，转基因编码抑制性RNA(RNAi)，例如靶向内源性基因(如疾病相关的内源性基因)的RNAi。在一些实施方式中，转基因编码嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方式中，提供了用于细胞内递送病毒的病毒递送复合物，其包含与该病毒缔合的细胞穿透肽。在一些实施方式中，提供了用于细胞内递送病毒的病毒递送复合物，其包含与该病毒缔合的细胞穿透肽，其中细胞穿透肽选自PEP-1肽、PEP-2肽、PEP-3肽、VEPEP-3肽、VEPEP-6肽、VEPEP-9肽和ADGN-100肽。在一些实施方式中，病毒是重组病毒，包括重组腺伴随病毒(AAV)、腺病毒、慢病毒、逆转录病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、痘病毒、埃巴病毒(EBV)、痘苗病毒和人巨细胞病毒(hCMV)。在一些实施方式中，根据上述任意病毒递送复合物，细胞穿透肽是VEPEP-3肽。在一些实施方式中，细胞穿透肽包含选自SEQIDNO:1-14的氨基酸序列。在一些实施方式中，细胞穿透肽包含SEQIDNO:75或76的氨基酸序列。在一些实施方式中，细胞穿透肽是VEPEP-6肽。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括选自SEQIDNO:15-40的氨基酸序列。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括SEQIDNO:77的氨基酸序列。在一些实施方式中，根据上述任意病毒递送复合物，细胞穿透肽是VEPEP-9肽。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括选自SEQIDNO:41-52的氨基酸序列。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括SEQIDNO:78的氨基酸序列。在一些实施方式中，根据上述任意病毒递送复合物，细胞穿透肽是ADGN-100肽。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括选自SEQIDNO:53-70的氨基酸序列。在一些实施方式中，细胞穿透肽包括SEQIDNO:79或80的氨基酸序列。在一些实施方式中，根据上述任意病毒递送复合物，细胞穿透肽进一步包含与细胞穿透肽的N-末端共价连接的一个或多个部分，并且其中该一个或多个部分选自乙酰基、脂肪酸、胆固醇、聚乙二醇、核定位信号、核输出信号、抗体、多糖和靶向分子。在一些实施方式中，细胞穿透肽包含共价连接至其N-末端的乙酰基基团。在一些实施方式中，细胞穿透肽进一步包含与细胞穿透肽的C-末端共价连接的一个或多个部分，并且其中该一个或多个部分选自半胱胺、半胱氨酸、硫醇、酰胺、任选取代的次氮基三乙酸、羧基、任选取代的直链或分枝的C1-C6烷基、伯胺或仲胺、糖苷衍生物(osidicderivative)、脂质、磷脂、脂肪酸、胆固醇、聚乙二醇、核定位信号、核输出信号、抗体、多糖和靶向分子。在一些实施方式中，细胞穿透肽包含共价连接至其C-末端的半胱胺基团。在一些实施方式中，根据上述任意病毒递送复合物，病毒递送复合物中至少一些细胞穿透肽被经由键连接至靶向分子。在一些实施方式中，键是共价的。在一些实施方式中，根据上述任意病毒递送复合物，细胞穿透肽与病毒(如，以Vg、pfu或MOI计)的摩尔比在约1:1和约1x108:1之间。在一些实施方式中，根据上述任意病毒递送复合物，病毒递送复合物的平均直径在约20nm和约1000nm之间。在一些实施方式中，提供了包含芯的纳米颗粒，芯包含根据上述任意实施方式的病毒递送复合物。在一些实施方式中，芯进一步包含根据上述任意实施方式的一种或多种另外的病毒。在一些实施方式中，纳米颗粒中的至少一些细胞穿透肽通过键连接至靶向部分。在一些实施方式中，芯包被有壳，壳包含外围细胞穿透肽。在一些实施方式中，壳中的至少一些外围细胞穿透肽通过键连接至靶向分子。在一些实施方式中，键是共价的。在一些实施方式中，外围细胞穿透肽选自PEP-1肽、PEP-2肽、PEP-3肽、VEPEP-3肽、VEPEP-6肽、VEPEP-9肽和ADGN-100肽。在一些实施方式中，外围细胞穿透肽包括选自SEQIDNO:1-80的氨基酸序列。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均直径在约20nm和约1000nm之间。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均直径在约50nm和约800nm之间。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均直径在约100nm和约500nm之间。在一些实施方式中，提供了药物组合物，其包括根据上述任意实施方式的病毒递送复合物或根据上述任意实施方式的纳米颗粒、和药学上可接受的载体。在一些实施方式中，药物组合物被配制用于静脉内、肿瘤内、动脉内、局部、眼内(intraocular)、眼科(ophthalmic)、门静脉、颅内、脑内、脑室内、鞘内、囊泡内、皮内、皮下、肌内、鼻内、气管内、肺部、腔内、或口服施用。在一些实施方式中，药物组合物是冻干的。在一些实施方式中，提供了制备根据上述任意实施方式的病毒递送复合物的方法，包含使细胞穿透肽与病毒组合，由此形成病毒递送复合物。在一些实施方式中，细胞穿透肽与病毒(如，以Vg、pfu或MOI计)分别以约1:1至约1x108:1的比组合。在一些实施方式中，提供了将一种或多种病毒递送至细胞内的方法，包含使细胞与根据上述任意实施方式的病毒递送复合物或根据上述任意实施方式的纳米颗粒接触，其中病毒递送复合物和/或纳米颗粒包含一种或多种病毒。在一些实施方式中，细胞与病毒递送复合物和/或纳米颗粒的接触体内进行。在一些实施方式中，细胞与病毒递送复合物和/或纳米颗粒的接触离体进行。在一些实施方式中，细胞与病毒递送复合物和/或纳米颗粒的接触体外进行。在一些实施方式中，细胞是粒细胞、肥大细胞、单核细胞,、树突细胞、B细胞、T细胞、天然杀伤细胞、成纤维细胞、肌肉细胞、心细胞或肝细胞。在一些实施方式中，细胞是T细胞。在一些实施方式中，细胞是成纤维细胞。在一些实施方式中，细胞是肝细胞。在一些实施方式中，细胞是肺祖细胞。在一些实施方式中，细胞是神经元细胞。在一些实施方式中，病毒靶向选自以下的基因中的序列：PD-1、PD-L1、PD-L2、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、CTLA-4、TIGIT、4-1BB、OX40、CD27、TIM-1、CD28、HVEM、GITR、和ICOS。在一些实施方式中，病毒包含编码外源蛋白的核酸分子。在一些实施方式中，外源蛋白是能够在细胞的表面上表达的重组受体。在一些本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于细胞内递送病毒的病毒递送复合物，其包含细胞穿透肽和所述病毒，其中所述细胞穿透肽选自PEP-1肽、PEP-2肽、PEP-3肽、VEPEP-3肽、VEPEP-6肽、VEPEP-9肽、和ADGN-100肽。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170810 FR 17/576471.用于细胞内递送病毒的病毒递送复合物，其包含细胞穿透肽和所述病毒，其中所述细胞穿透肽选自PEP-1肽、PEP-2肽、PEP-3肽、VEPEP-3肽、VEPEP-6肽、VEPEP-9肽、和ADGN-100肽。


2.根据权利要求1所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽是VEPEP-3肽。


3.根据权利要求2所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽包括选自SEQIDNO:1-14的氨基酸序列。


4.根据权利要求2所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽包括SEQIDNO:75或76的氨基酸序列。


5.根据权利要求1所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽是VEPEP-6肽。


6.根据权利要求5所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽包括选自SEQIDNO:15-40的氨基酸序列。


7.根据权利要求5所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽包括SEQIDNO:77的氨基酸序列。


8.根据权利要求1所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽是VEPEP-9肽。


9.根据权利要求8所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽包括选自SEQIDNO:41-52的氨基酸序列。


10.根据权利要求8所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽包括SEQIDNO:78的氨基酸序列。


11.根据权利要求1所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽是ADGN-100肽。


12.根据权利要求11所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽包括选自SEQIDNO:53-70的氨基酸序列。


13.根据权利要求11所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽包括SEQIDNO:79或80的氨基酸序列。


14.根据权利要求1所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽是PEP-1、PEP-2或PEP-3肽。


15.根据权利要求14所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽包括SEQIDNO:71-73中任一个的氨基酸序列。


16.根据权利要求1所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽共价连接至所述病毒。


17.根据权利要求1-16中任一项所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽进一步包含与所述细胞穿透肽的N-末端共价连接的一个或多个部分，并且其中所述一个或多个部分选自：乙酰基、脂肪酸、胆固醇、聚乙二醇、核定位信号、核输出信号、抗体、多糖和靶向分子。


18.根据权利要求1-17中任一项所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽进一步包含与所述细胞穿透肽的C-末端共价连接的一个或多个部分，并且其中所述一个或多个部分选自：半胱胺、半胱氨酸、硫醇、酰胺、任选取代的次氮基三乙酸、羧基、任选取代的直链或分枝的C1-C6烷基、伯胺或仲胺、糖苷衍生物、脂质、磷脂、脂肪酸、胆固醇、聚乙二醇、核定位信号、核输出信号、抗体、多糖和靶向分子。


19.根据权利要求1-18中任一项所述的病毒递送复合物，其中所述病毒递送复合物中至少一些所述细胞穿透肽通过键连接至靶向部分。


20.根据权利要求1-19中任一项所述的病毒递送复合物，其中所述病毒是重组病毒。


21.根据权利要求20所述的病毒递送复合物，其中所述重组病毒是重组腺伴随病毒(AAV)、腺病毒、慢病毒、逆转录病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、痘病毒、埃巴病毒(EBV)、痘苗病毒或人巨细胞病毒(hCMV)。


22.根据权利要求1-21中任一项所述的病毒递送复合物，其中所述细胞穿透肽与所述病毒(以Vg、pfu或MOI计)的摩尔比在约1:1和约1x108:1之间。


23.根据权利要求1-22中任一项所述的病毒递送复合物，其中所述病毒递送复合物的...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·德赛，G·迪维塔，
申请(专利权)人：阿迪根有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US