一种基因编辑T细胞及其用途制造技术

提供了一种通用型T细胞及其制备方法。所述通用型T细胞包括CAR‑T和TCR‑T细胞，是通过CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除了T细胞的TCR和/或HLA和/或PD‑1蛋白获得的，其中通用型CAR‑T可在体内、体外持续杀伤靶细胞。

A gene editing T cell and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种基因编辑T细胞及其用途交叉引用本申请要求享有2017年9月18日提交的中国专利申请201710842264.5和201710841323.7的优先权，该中国专利申请的公开内容以其整体通过引用并入本申请。
本专利技术涉及T细胞，具体涉及经过基因编辑的单基因、双基因及三基因敲除的T细胞，包括通用型T细胞、CAR-T细胞和TCR-T细胞，及其制备方法和用途。
技术介绍
恶性肿瘤已成为严重威胁身体健康和生命安全的疾病，肿瘤的治愈一直是人类的梦想。近年来，肿瘤免疫疗法获得了广泛的关注，尤其是CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T Cells)技术的出现使得对肿瘤的控制得到了里程碑式的发展。从1989年CAR-T技术首次应用，到2012年宾夕法尼亚大学Carl June教授带领团队治愈的Emily Whitehead，再到2017年FDA肿瘤药物专家咨询委员会(ODAC)以10:0的压倒优势投票结果一致推荐批准诺华CAR-T药物CTL019用于青少年晚期B细胞急性淋巴性白血病(r/rAll)治疗。一般地，传统本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备基因改造的T细胞的方法，包括：通过基因编辑技术破坏所述T细胞中：/n(i)14号染色体第23016448位至第23016490位的TRAC基因组区域；/n(ii)15号染色体第45003745位至第45003788位的B2M基因组区域；和/或/n(iii)2号染色体第242800936位至第242800978位的PD-1基因组区域，或2号染色体第242795009位至第242795051位的PD-1基因组区域./n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170918 CN 2017108422645;20170918 CN 201710841323一种制备基因改造的T细胞的方法，包括：通过基因编辑技术破坏所述T细胞中：
(i)14号染色体第23016448位至第23016490位的TRAC基因组区域；
(ii)15号染色体第45003745位至第45003788位的B2M基因组区域；和/或
(iii)2号染色体第242800936位至第242800978位的PD-1基因组区域，或2号染色体第242795009位至第242795051位的PD-1基因组区域.


权利要求1中的方法，其中所述TRAC基因组区域、B2M基因组区域和PD-1基因组区域均被编辑。


权利要求1或2中所述的方法，其中所述基因编辑技术为基于锌指核酸酶的基因编辑技术、TALEN基因编辑技术或CRISPR/Cas基因编辑技术。


权利要求3所述的方法，其中所述基因编辑技术为CRISPR/Cas9基因编辑技术。


权利要求1-4中任一项所述的方法，其中:
(i)所述TRAC基因组的靶核苷酸序列与选自SEQ ID NOs：2-5中任一的序列互补；
(ii)所述B2M基因组的靶核苷酸序列与选自SEQ ID NOs：6-13中任一的序列互补；和/或
(iii)所述PD-1基因组的靶核苷酸序列与选自SEQ ID NOs：14-22中任一的序列互补。


权利要求4中所述的方法，其中:
(i)将包含靶向所述TRAC基因组的sgRNA导入该T细胞以实现对所述TRAC基因组区域的编辑；
(ii)将包含靶向所述B2M基因组的sgRNA导入该T细胞以实现对所述B2M基因组区域的编辑；和/或
(iii)将包含靶向所述PD-1基因组的sgRNA导入该T细胞以实现对所述PD-1基因组区域的编辑。


权利要求6中所述的方法，包含：
(i)将包含选自SEQ ID NOs：2-5中任一序列的sgRNA导入T细胞以实现对所述TRAC基因组区域的编辑；
(ii)将包含选自SEQ ID NOs：6-14中任一序列的sgRNA导入该T细胞以实现对所述B2M基因组区域的编辑；和/或
(iii)将包含选自SEQ ID NOs：15-22中任一序列的sgRNA导入该T细胞以实现对所述PD-1基因组区域的编辑。


权利要求7或8中所述的方法,包含同时向该T细胞导入所述靶向TRAC的sgRNA、靶向B2M的sgRNA和靶向PD-1的sgRNA.


权利要求6－8中任一项所述的方法,其中所述sgRNA是经过2’-O-甲基类似物和/或核苷酸间3’硫代修饰的。


权利要求9中所述的方法,其中所述化学修饰为所述sgRNA的5’端前一个、二个和/或三个碱基和/或3’端的最后一个碱基的2’-O-甲基类似物修饰。


权利要求6-10中任一项所述的方法，其中将所述sgRNA与Cas9编码核苷酸序列共同导入该T细胞。


权利要求11中所述的方法,将所述sgRNA与Cas9编码核苷酸序列通过电转方式共同导入该T细胞，优选所述电转条件包括选自如下的任一项：150-250V，0.5-2ms；150V，2ms；160V，2ms；170V，2ms；180V，2ms；190V，1ms；200V，1ms；210V，1ms；220V，1ms；230V，1ms；240V，1ms；和250V，0.5ms。


权利要求1-12中任一项的方法，还包括从经过基因编辑的T细胞中筛选TRAC,B2M和/或PD-1表达量低的T细胞。


权利要求1-13任一项的方法，其中所述TRAC、B2M或PD-1基因敲除的效率为90％以上；所述TRAC与B2M基因的同时敲除效率在75％以上；或所述TRAC、B2M和PD-1基因的同时敲除效率在65％以上。


权利要求1-14任一项的方法，其中T细胞来源于健康受试者。


通过权利要求1-15任一项的方法制备的基因改造的T细胞。


一种基...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁鹏飞，王飞，于玲玲，董曦，
申请(专利权)人：博雅辑因北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11