一种体外高效扩增NK细胞的方法技术

本发明专利技术提供一种利用基因修饰的K562滋养细胞扩增NK细胞的方法，利用慢病毒转载系统将IL‑21、IL‑27和CD70基因同时转染K562细胞，获得稳定表达IL‑21、IL‑27和CD70蛋白的K562工程细胞，将该细胞灭活后与PBMC混合进行培养，在低浓度IL‑2存在下即可在无血清培养基中扩增NK细胞，扩增倍数在800‑1100左右，且该NK细胞有效纯度达到91%，IFN‑γ的分泌量是普通方法培养出的NK细胞的5倍，在效靶比10:1的情况下该NK细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤率达到88.5%，比常规条件下培养的NK细胞的杀伤率高出约20%，说明此方法培养出的NK细胞具有较高的杀伤能力。

A method of high efficient expansion of NK cells in vitro

【技术实现步骤摘要】
一种体外高效扩增NK细胞的方法
本专利技术属于细胞扩增领域，具体涉及一种体外高效扩增NK细胞的方法。
技术介绍
自然杀伤细胞（naturalkillercell，NK细胞）是一类不同于T、B细胞的特殊淋巴细胞群体。NK细胞对靶细胞的杀伤表现为一种速发效应（immediateeffect），无须预先致敏，与靶细胞混合后4小时内即发挥杀伤效应。NK细胞不仅可以无需主要组织相容性复合物（MHC）限制性直接杀伤靶细胞，还可以通过分泌IFN-γ和TNF-α等细胞因子来干扰病毒复制和进一步活化吞噬细胞，也可以通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒性效应（antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，ADCC）杀伤被特异性IgG包被的瘤细胞。因此，NK细胞在抗感染及抗肿瘤治疗中具有十分重要的作用。然而，NK细胞作为淋巴细胞中的稀有细胞亚群，在人的外周血淋巴细胞中只占5%-15%，因此需要在体外对其进行扩增然后回输到体内。体外扩增的NK细胞在临床应用中存在的问题是如何获得大量的可杀死肿瘤细胞的高纯度NK细胞。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达IL-21、IL-27和CD70蛋白的K562工程细胞，其特征在于，所述IL-21、IL-27和CD70蛋白均在细胞膜表面表达。/n

【技术特征摘要】
1.一种表达IL-21、IL-27和CD70蛋白的K562工程细胞，其特征在于，所述IL-21、IL-27和CD70蛋白均在细胞膜表面表达。


2.一种如权利要求1所述的K562工程细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
利用携带IL-21、IL-27和CD70基因的病毒载体转染K562细胞，获得同时表达IL-21、IL-27和CD70蛋白的K562工程细胞。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述IL-21和IL-27基因序列的5’端均添加信号肽，3’端均添加跨膜区基因。


4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述信号肽选自OSM、VSV-G、trypsinogen-2、IL-2、CD8的信号肽；优选为CD8信号肽；
所述跨膜区选自CD3epsilon、CD4、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD137、CTLA-4、PD-1或LAG-3的跨膜区；优选为CD8跨膜区。


5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述病毒载体可以为腺病毒、慢病毒；优选为慢病毒。

【专利技术属性】
技术研发人员：梁晨，谭毅，
申请(专利权)人：山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37