用于T细胞或NK细胞活化和扩增的可溶性抗体复合物制造技术

本公开提供了用于使用可溶性单特异性抗体复合物来活化和扩增人T细胞或NK细胞的组合物和方法。

Soluble antibody complex for activation and expansion of T cells or NK cells

The present disclosure provides compositions and methods for activation and amplification of human T cells or NK cells using soluble single specific antibody complexes.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于T细胞或NK细胞活化和扩增的可溶性抗体复合物相关申请案本申请要求于2014年9月4日提交的第62/045,591号美国临时专利申请的优先权，该专利的内容通过引用整体并入本文。领域本公开涉及用于人T细胞或NK细胞活化和扩增的可溶性单特异性抗体复合物的方法和组合物。背景宿主耐受性和适应性免疫是人类健康的复杂和关键组成部分。T淋巴细胞包含各种亚群，包括：调节性T细胞，其在维持宿主耐受性方面起重要作用；效应子亚群，诸如根据环境刺激进行免疫应答的CD4+T辅助细胞和CD8+细胞毒性T细胞。用于T细胞体外生长和繁殖的方法基于许多不同的途径。在一些情况下，通过使用辅助细胞和外源性生长因子(诸如抗原递呈细胞和IL-2)来活化和扩增T细胞。这需要在T细胞活化和/或扩增过程中存在和补充辅助细胞和生长因子。或者，用于T细胞的活化和扩增的试剂由在固相表面(例如板或磁珠)上直接或间接固定抗CD3抗体的组合组成。除了由固定的抗CD3抗体提供的原代T细胞活化信号之外，还需要由抗CD28抗体提供的次级共刺激信号。还可以加入外源性生长因子或细胞因子(诸如IL-2)来增强T细胞增殖。抗CD3抗体是许多多克隆T细胞刺激方案中的关键组分。首先Dixon等人证实，固定的抗CD3可在不存在由T细胞受体进行的同源抗原识别的情况下介导人T细胞活化和扩增。抗CD3通过交联T细胞表面上的T细胞受体复合物的组分来启动活化和增殖信号级联放大；因此它们需要固定。随后Baroja等人表明，来自固定或可溶性抗CD28刺激物的第二信号以及固定抗CD3是完全T细胞活化所需的。通过附着配体(诸如CD2、LFA-1)以及其它TNF家族成员(诸如CD137(4-1BB))提供的附加共刺激信号可以向T细胞提供附加的增殖或存活信号(Smith-Garvin等人)。用于使用涂覆有固定抗CD3抗体的组织培养板进行T细胞活化的商品可购自Corning公司(BioCoatTMT细胞活化板，产品目录号354725)，并且由研究者使用本领域的技术人员已知的标准方法广泛制备。可以外源添加可溶性抗CD28抗体来提供启动T细胞活化和增殖所需的共刺激信号(Kruisbeek等人)。美国专利6,352,694描述了一种使用固定在4.5um直径磁性颗粒上的抗CD3和抗CD28抗体进行T细胞活化和扩增的方法。美国专利8,012,750B2描述了一种用于活化T细胞的可生物降解设备。类似于先前的公开，该方法使用间接包被有能够结合和活化T细胞的抗体的可生物降解微球体。美国专利申请14/035,089描述使用具有固定抗CD3和/或抗CD28的柔性纳米基质来向T细胞提供活化信号。它们公开了大小在1-500nm之间的葡聚糖基质，所述葡聚糖基质用作可模塑到具有固定的T细胞活化抗体的T细胞的表面上的柔性支架。与固定抗体不同，可溶性抗体复合物可以向T细胞提供更温和的活化信号。美国专利公布no.US2007/0036783描述了可溶性双特异性四聚抗体复合物(TAC)的使用，所述TAC由一种抗CD3抗体与第二抗CD28抗体复合而成，所述第二抗CD28抗体能够启动T细胞活化和扩增。它们声称，与固定抗体方法相比，这种方法提供了更温和的刺激，从而产生更少的活化诱导的细胞死亡。此申请的专利技术人并未充分证实四聚抗体复合物确实是可溶的并且在刺激过程中不吸附到培养塑料上。此外，其专利技术人特别指出双特异性四聚抗体复合物的使用参与经刺激的T细胞的活化和扩增。专利技术概要本专利技术人已经开发了一种用于使用可溶性单特异性四聚抗体复合物来体外活化和扩增原代人T细胞或NK细胞的方法。具体地，本专利技术人已经确定，与使用双特异性四聚抗体复合物相比，使用可溶性单特异性四聚抗体复合物导致更大的T细胞活化。本专利技术人还已经确定，与在不存在可溶性单特异性四聚抗体复合物的情况下培养的NK细胞相比，使用可溶性单特异性四聚抗体复合物导致NK细胞活化的改善。可溶性单特异性TAC具有优于固定抗体方法的优点，因为在扩增后不需要去除大的磁性颗粒，并且可以洗涤细胞以去除任何未结合的可溶性TAC复合物；也不需要专门的涂覆有抗体的板或基质。因此，本公开涉及一种用于活化T细胞或NK细胞的方法，该方法包括用包含至少一种可溶性单特异性复合物的组合物培养含有T细胞或NK细胞的样品，其中每种可溶性单特异性复合物包含两个结合蛋白，这两个结合蛋白连接并结合至T细胞或NK细胞上的相同抗原。在一个实施方案中，所述组合物包含至少两种不同的单特异性抗体复合物，其中一种单特异性抗体复合物结合至T细胞或NK细胞上的第一抗原，而另一种单特异性抗体复合物结合至T细胞或NK细胞上的第二抗原。任选地，所述组合物包含至少三种不同的单特异性抗体复合物，其中第一单特异性抗体复合物结合至T细胞或NK细胞上的第一抗原，第二单特异性抗体复合物结合至T细胞或NK细胞上的第二抗原，而第三单特异性抗体复合物结合至T细胞或NK细胞上的第三抗原。在一个实施方案中，本文所述结合至T细胞或NK细胞上的抗原的结合蛋白是抗体或其片段。在一个实施方案中，可溶性单特异性复合物是四聚抗体复合物(TAC)。在一个实施方案中，TAC由来自一个物种的两个抗体与来自第二物种的两个抗体分子结合构成，所述第二物种的两个抗体分子结合至所述第一动物物种的抗体的FC部分。在一个实施方案中，本文所述的方法用于活化T细胞。在一个实施方案中，该方法包括用组合物培养含有T细胞的样品，该组合物包含一种结合至T细胞上的第一抗原的单特异性抗体复合物和另一种结合至T细胞上的第二抗原的单特异性抗体复合物。在一个实施方案中，第一抗原选自CD3、CD28、CD2、CD7、CD11a、CD26、CD27、CD30L、CD40L、OX-40、ICOS、GITR、CD137、以及HLA-DR，而第二抗原为选自CD3、CD28、CD2、CD7、CD11a、CD26、CD27、CD30L、CD40L、OX-40、ICOS、GITR、CD137、以及HLA-DR的不同抗原。在一个实施方案中，第一抗原是CD3。在一个实施方案中，第二抗原是CD28。在一个实施方案中，第三抗原是CD2。在一个实施方案中，T细胞活化是增强的T细胞增殖、增强的细胞因子产生和/或增强的T细胞表达。在一个实施方案中，本公开描述了使用靶向人CD3、CD28和CD2的可溶性单特异性四聚抗体复合物，来诱导人T细胞的最佳体外多克隆活化和扩增。在此类实施方案中，组合物包含靶向CD3、CD28和CD2的三种不同的可溶性单特异性复合物。在另一个实施方案中，本文所述的方法用于活化NK细胞。在一个实施方案中，该方法包括用组合物培养含有NK细胞的样品，该组合物包含一种结合至NK细胞上的第一抗原的单特异性抗体复合物和另一种结合至NK细胞上的第二抗原的单特异性抗体复合物。在一个实施方案中，第一抗原选自CD335、CD2、NKG2D、NKp44、NKp30、CD16、LFA-1、以及CD27，而第二抗原为选自CD335、CD2、NKG2D、NKp44、NKp30、CD16、LFA-1、以及CD27的不同抗原。在一个实施方案中，第一抗原是CD335。在一个实施方案中，第二抗原是CD2。在一个实施方案中，NK细胞活化是增强的NK细胞增殖、增强的细胞因子产本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种活化T细胞或NK细胞的方法，所述方法包括用包含至少一种可溶性单特异性复合物的组合物培养含有T细胞或NK细胞的样品，其中每种可溶性单特异性复合物包含两个结合蛋白，所述两个结合蛋白连接并结合至所述T细胞或所述NK细胞上的相同抗原。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.04 US 62/045,5911.一种活化T细胞或NK细胞的方法，所述方法包括用包含至少一种可溶性单特异性复合物的组合物培养含有T细胞或NK细胞的样品，其中每种可溶性单特异性复合物包含两个结合蛋白，所述两个结合蛋白连接并结合至所述T细胞或所述NK细胞上的相同抗原。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含至少两种不同的单特异性抗体复合物，其中一种单特异性抗体复合物结合至所述T细胞或NK细胞上的第一抗原，而另一种单特异性抗体复合物结合至所述T细胞或NK细胞上的第二抗原。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述组合物包含至少三种不同的单特异性抗体复合物，其中第一单特异性抗体复合物结合至所述T细胞或NK细胞上的第一抗原，第二单特异性抗体复合物结合至所述T细胞或NK细胞上的第二抗原，而第三单特异性抗体复合物结合至所述T细胞或NK细胞上的第三抗原。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述结合蛋白是抗体或其片段。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述可溶性单特异性复合物是四聚抗体复合物。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述四聚抗体复合物(TAC)由来自一个物种的两个抗体与来自第二物种的两个抗体分子结合构成，所述第二物种的所述两个抗体分子结合至所述第一动物物种的所述抗体的Fc部分。7.根据权利要求2至6中任一项所述的用于活化T细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·I·柯卡吉，
申请(专利权)人：干细胞技术公司，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA