工程改造的肉毒杆菌神经毒素制造技术

本文公开了一种具有经修饰的受体结合结构域(HC)的肉毒杆菌神经毒素(BoNT)多肽，所述经修饰的受体结合结构域具有改变所述BoNT与受体的结合的一个或多个氨基酸突变。还公开了特定的突变和突变组合。还公开了分离的经修饰的HC、包含所述经修饰的HC的多肽、嵌合分子、药物组合物及其制备和使用方法。另外公开了鉴定另外的此类经修饰的受体结合结构域的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程改造的肉毒杆菌神经毒素相关申请本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2015年3月26日提交的美国临时申请序列号62/138,818的权益，该临时申请的内容以引用方式整体并入本文。政府支持本专利技术根据国家卫生研究院(NationalInstituteofHealth)所授予的NIHNCRRRR000168在政府支持下完成。政府享有本专利技术的某些权利。专利
本专利技术涉及经修饰的神经毒素及其用于治疗医学和/或美学病症的用途的领域。专利技术背景肉毒杆菌神经毒素是一种细菌毒素，其包括七种主要血清型(BoNT/A-G)1。这些毒素通过以下方式来发挥作用：阻断神经递质自神经元释放，由此麻痹动物和人。近年来，BoNT已广泛用于治疗愈来愈多的医学病状：局部注射微量毒素可减弱靶向区域中的神经元活性，这可有益于许多医学病状且有益于美容目的2-4。BoNT/A和BoNT/B是当前经FDA批准用于人的仅有的两种BoNT2-4。这些是纯化自细菌且未进行任何序列修饰的毒素(定义为野生型WT)。随着BoNT的应用愈加广泛，已报道其局限性和不良反应。主要局限性在于患者会生成中和抗体，这致使此后的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肉毒杆菌神经毒素(BoNT)多肽，其包含：a)蛋白酶结构域；b)蛋白酶裂解位点；c)移位结构域；和d)肉毒梭菌血清型B的经修饰的受体结合结构域(B‑Hc)，其包含对应于血清型B菌株1中的选自以下的取代突变的一个或多个取代突变：E1191C、E1191V、E1191L、E1191Y、S1199W、S1199E、S1199H、W1178Y、W1178Q、W1178A、W1178S、Y1183C、Y1183P及其组合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.26 US 62/138,8181.一种肉毒杆菌神经毒素(BoNT)多肽，其包含：a)蛋白酶结构域；b)蛋白酶裂解位点；c)移位结构域；和d)肉毒梭菌血清型B的经修饰的受体结合结构域(B-Hc)，其包含对应于血清型B菌株1中的选自以下的取代突变的一个或多个取代突变：E1191C、E1191V、E1191L、E1191Y、S1199W、S1199E、S1199H、W1178Y、W1178Q、W1178A、W1178S、Y1183C、Y1183P及其组合。2.根据权利要求1所述的BoNT多肽，其中所述经修饰的(B-Hc)包含对应于血清型B菌株1中的选自以下的取代突变的一个取代突变：E1191C、E1191V、E1191L、E1191Y、S1199E、S1199H、W1178Y、W1178Q、W1178A、W1178S、Y1183C和Y1183P。3.根据权利要求2所述的BoNT多肽，其中所述经修饰的(B-Hc)包含对应于血清型B菌株1中的E1191C的取代突变。4.根据权利要求2所述的BoNT多肽，其中所述经修饰的(B-Hc)包含对应于血清型B菌株1中的E1191V的取代突变。5.根据权利要求1所述的BoNT多肽，其中所述经修饰的(B-Hc)包含两个取代突变。6.一种肉毒杆菌神经毒素(BoNT)多肽，其包含：a)蛋白酶结构域；b)蛋白酶裂解位点；c)移位结构域；和d)肉毒梭菌血清型B的经修饰的受体结合结构域(B-Hc)，其包含对应于血清型B菌株1中的取代突变的两个或更多个取代突变，其中所述取代突变中的一个选自：E1191Q、E1191M、E1191C、E1191V、E1191L和E1191Y。7.根据权利要求6所述的BoNT多肽，其中所述取代突变中的另一个对应于血清型B菌株1中的S1199W、S1199E、S1199H、S1199Y、W1178Y、W1178Q、W1178A、W1178S、Y1183C、Y1183P、S1199F或S1199L。8.根据权利要求5-7中任一项所述的BoNT多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191M和S1199W、E1191M和W1178Q、E1191C和S1199W、E1191C和S1199Y、E1191C和W1178Q、E1191Q和S1199W、E1191V和S1199W、E1191V和S1199Y或E1191V和W1178Q。9.根据权利要求5-8中任一项所述的BoNT多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191M和S1199W。10.根据权利要求5-8中一项所述的BoNT多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191M和W1178Q。11.根据权利要求5-8中一项所述的BoNT多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191C和S1199W。12.根据权利要求5-8中一项所述的BoNT多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191C和S1199Y。13.根据权利要求5-8中一项所述的BoNT多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191C和W1178Q。14.根据权利要求5-8中一项所述的BoNT多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191Q和S1199W。15.根据权利要求5-8中一项所述的BoNT多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191V和S1199W。16.根据权利要求5-8中一项所述的BoNT多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191V和S1199Y。17.根据权利要求5-8中一项所述的BoNT多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191V和W1178Q。18.根据权利要求6所述的BoNT多肽，其中所述经修饰的(B-Hc)包含三个取代突变。19.根据权利要求18所述的BoNT多肽，其中所述三个取代突变在对应于血清型B菌株1的E1191、Y1183和S1199，或E1191、S1199和W1178的位置处。20.根据权利要求19所述的BoNT多肽，其中所述三个取代突变对应于血清型B菌株1的E1191M、S1199W和W1178Q。21.一种肉毒杆菌神经毒素(BoNT)多肽，其包含：a)蛋白酶结构域；b)蛋白酶裂解位点；c)移位结构域；和d)肉毒梭菌血清型B的经修饰的受体结合结构域(B-Hc)，其在对应于血清型B菌株1的S1199或S1201的位置处包含取代突变。22.根据权利要求1-21中任一项所述的BoNT多肽，其中所述经修饰的B-Hc来自菌株1。23.根据权利要求1-22中任一项所述的BoNT多肽，其中所述蛋白酶结构域、移位结构域和蛋白酶裂解位点来自选自以下的血清型：A、B、C、D、E、F、G及其组合。24.根据权利要求23所述的BoNT多肽，其中所述蛋白酶结构域、移位结构域和蛋白酶裂解位点来自血清型B菌株1。25.根据权利要求23所述的BoNT多肽，其中所述蛋白酶结构域、移位结构域和蛋白酶裂解位点来自血清型A菌株1。26.一种多肽，其包含肉毒梭菌血清型B的经修饰的受体结合结构域(B-Hc)，所述经修饰的受体结合结构域包含对应于血清型B菌株1中的选自以下的取代突变的一个或多个取代突变：E1191C、E1191V、E1191L、E1191Y、S1199W、S1199E、S1199H、W1178Y、W1178Q、W1178A、W1178S、Y1183C、Y1183P及其组合。27.根据权利要求26所述的多肽，其中所述经修饰的(B-Hc)包含两个取代突变。28.一种多肽，其包含肉毒梭菌血清型B的经修饰的受体结合结构域(B-Hc)，所述经修饰的受体结合结构域包含对应于血清型B菌株1中的取代突变的两个或更多个取代突变，其中所述取代突变中的一个选自：E1191Q、E1191M、E1191C、E1191V、E1191L和E1191Y。29.根据权利要求26所述的多肽，其中所述取代突变中的一个对应于血清型B菌株1中的S1199W、S1199E、S1199H、S1199Y、W1178Y、W1178Q、W1178A、W1178S、Y1183C、Y1183P、S1199F或S1199L。30.根据权利要求27-29中任一项所述的多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191M和S1199W、E1191M和W1178Q、E1191C和S1199W、E1191C和S1199Y、E1191C和W1178Q、E1191Q和S1199W、E1191V和S1199W、E1191V和S1199Y或E1191V和W1178Q。31.根据权利要求27-30中任一项所述的多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191M和S1199W。32.根据权利要求27-30中任一项所述的多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191M和W1178Q。33.根据权利要求27-30中任一项所述的多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191C和S1199W。34.根据权利要求27-30中任一项所述的多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191C和S1199Y。35.根据权利要求27-30中任一项所述的多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191C和W1178Q。36.根据权利要求27-30中任一项所述的多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191Q和S1199W。37.根据权利要求27-30中任一项所述的多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191V和S1199W。38.根据权利要求27-30中任一项所述的多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191V和S1199Y。39.根据权利要求27-30中任一项所述的多肽，其中所述两个取代突变对应于血清型B菌株1中的E1191V和W1178Q。40.根据权利要求30所述的多肽，其中所述经修饰的(B-Hc)包含三个取代突变。41.根据权利要求40所述的多肽，其中所述三个取代突变在对应于血清型B菌株1的E1191、Y1183和S1199，或E1191、S1199和W1178的位置处。42.根据权利要求41所述的多肽，其中所述三个取代突变对应于血清型B菌株1的E1191M、S1199W和W1178Q。43.根据权利要求26-42中任一项所述的多肽，其中所述经修饰的B-Hc来自菌株1。44.一种嵌合分子，其包含第一部分，所述第一部分是连接至第二部分的肉毒梭菌血清型B的经修饰的受体结合结构域(B-Hc)，...

【专利技术属性】
技术研发人员：董民，彭立胜，陶亮，
申请(专利权)人：哈佛大学校长及研究员协会，
类型：发明
国别省市：美国,US