基因组工程制造技术

提供了使用缺少重复序列的TALEN或Cas9的细胞中基因组工程的方法。

【技术实现步骤摘要】

技术介绍

1、已知通过序列特异性核酸酶的基因组编辑。参见参考文献1、2和3，通过引用将其全部内容结合于此。可以通过两种主要机制修复基因组中断裂的核酸酶介导的双链dna(dsdna)：非同源性末端接合(non-homologous end joining，nhej)，其通常导致引入非特异性的插入和缺失(插入缺失(indels))，或同源介导修复(hdr)，其引入作为修复模板的同源链。参见参考文献4，通过引用将其全部内容结合于此。当序列特异性核酸酶与包含所希望突变的同源供体dna构建体一同递送时，与仅单独的供体构建体相比，基因靶向效率增加了1000倍。参见参考文献5，通过引用将其全部内容结合于此。已经报告了将单链寡脱氧核糖核酸(“ssodn”)用作dna供体。参见参考文献21和22，通过引用将其全部内容结合于此。

2、尽管基因编辑工具上有较大进步，但是对于在人类诱导多能干细胞(“hipsc”)工程中使用定制设计的核酸酶存在许多挑战和问题。首先，尽管它们设计简化，但是转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-lik本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种改变真核细胞中靶DNA的方法，包括：

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述基因靶向核酸酶是RNA-引导的基因靶向核酸酶，所述方法还包括给予所述真核细胞向导RNA，所述向导RNA含有所述靶DNA的靶序列的互补序列；

3.如权利要求2所述的方法，其中，所述RNA-引导的基因靶向核酸酶含Cas9核酸酶。

4.如权利要求1所述的方法，其中，所述基因靶向核酸酶含转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述ssODN的长度为50至90nt。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述供体核酸序列包...

【技术特征摘要】

1.一种改变真核细胞中靶dna的方法，包括：

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述基因靶向核酸酶是rna-引导的基因靶向核酸酶，所述方法还包括给予所述真核细胞向导rna，所述向导rna含有所述靶dna的靶序列的互补序列；

3.如权利要求2所述的方法，其中，所述rna-引导的基因靶向核酸酶含cas9核酸酶。

4.如权利要求1所述的方法，其中，所述基因靶向核酸酶含转录激活因子样效应物核酸酶(talen)。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述ssodn的长度为50至90nt。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述供体核酸序列包含相对于所述靶dna的错配。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述供体核酸序列插入所述靶dna之后，所述改变了的dna中的所述错配距离所述靶位点...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔治·M·丘奇，杨璐菡，马克·格尔·卡戈尔，乔伊斯·利奇·扬，
申请(专利权)人：哈佛大学校长及研究员协会，
类型：发明
国别省市：