基质金属蛋白酶可切割且丝氨酸蛋白酶可切割底物及其使用方法技术

本发明专利技术一般地涉及包括作为至少一种基质金属蛋白酶(MMP)的底物的至少第一可切割部分(CM1)和作为至少一种丝氨酸蛋白酶(SP)的底物的至少第二可切割部分(CM2)的多肽，涉及这些包括作为至少一种MM蛋白酶的底物的至少CM1和作为至少一种SP蛋白酶的底物的至少CM2的多肽的可活化抗体和其它更大分子，和涉及在各种治疗、诊断和预防适应症中制备和使用这些包括作为至少一种MM蛋白酶的底物的至少CM1和作为至少一种SP蛋白酶的底物的至少CM2的多肽的方法。

Matrix metalloproteinase can be cut and serine protease can be cut substrate and its use method

The present invention relates generally to include at least one as matrix metalloproteinase (MMP) substrate at least a first cutting part (CM1) and at least as a serine protease (SP) at least second of the substrate cutting part (CM2) of the peptide, involving these including at least CM1 for at least one of the MM protease the substrate and at least one of at least CM2 peptides as SP protease substrate the activation of antibodies and other larger molecules, and involved in various kinds of treatment, diagnosis and prevention to the preparation and use of methods including at least CM2 of these polypeptides as at least one MM protease substrate CM1 and at least as at least one SP the enzyme substrate for the disease.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基质金属蛋白酶可切割且丝氨酸蛋白酶可切割底物及其使用方法相关申请本申请要求享有2015年1月20日提交的美国临时申请号62/105,490、2015年11月20日提交的美国临时申请号62/258,015和2016年1月14日提交的美国临时申请号62/278,713的权益，所述申请各自的内容全文通过引用并入本文。序列表的并入在2016年1月15日创建且大小为456KB的命名为“CYTM037001WO_ST25”的文本文件的内容以其整体通过引用并入本文。专利
本专利技术总体涉及包括作为至少一种基质金属蛋白酶(MMP)的底物的至少第一可切割部分(CM1)和作为至少一种丝氨酸蛋白酶(SP)的底物的至少第二可切割部分(CM2)的多肽，包括这些至少包括作为至少一种MM蛋白酶的底物的CM1和作为至少一种SP蛋白酶的底物的CM2的多肽的可活化抗体和其它更大分子，并涉及各种治疗、诊断和预防适应症中制备和使用这些至少包括作为至少一种MM蛋白酶的底物的CM1和作为至少一种SP蛋白酶的底物的CM2的多肽的方法。专利技术背景蛋白酶是通过切割氨基酸残基之间的肽键来降解蛋白的酶。蛋白酶天然存在于所有生物体中，并且涉及从简单降解至高度调节的途径的各种生理反应。已知一些蛋白酶基于蛋白内特定氨基酸序列的存在而破坏特定的肽键。因此，需要鉴定蛋白酶的新底物并且在各种治疗、诊断和预防适应症中使用这些底物。专利技术概述本专利技术提供了包括作为至少一种基质金属蛋白酶(MMP)的底物的至少第一可切割部分(CM1)和作为至少一种丝氨酸蛋白酶(SP)的底物的至少第二可切割部分(CM2)的氨基酸序列。这些氨基酸序列在本文中统称为“CM1-CM2底物”。该术语不旨在传达关于作为至少一种基质金属蛋白酶(MMP)的底物的第一可切割部分(CM1)和作为至少一种丝氨酸蛋白酶(SP)的底物的至少第二可切割部分(CM2)的取向或其它结构排列的任何要求。因此，术语“CM1-CM2底物”涵盖具有如下的N-端至C-端的结构排列的CM1-CM2底物：CM1-CM2或CM2-CM1。术语“CM1-CM2底物”还涵盖其中CM1序列的至少一部分与CM2序列的至少一部分重叠的底物。本文所述的CM1-CM2底物可用于各种治疗、诊断和预防性适应症中。例如，这些CM1-CM2底物可用于可活化抗体，其包括抗体或其抗原结合片段(AB)，其包括与AB的至少一个抗原或表位结合结构域连接的至少一个掩蔽部分(MM)，使得MM的偶联降低AB结合其靶标的能力。在一些实施方案中，可活化抗体至少包括第一CM(CM1)和第二CM(CM2)。在一些实施方案中，CM1底物序列的至少部分与CM2序列的至少部分重叠。在一些实施方案中，CM1底物序列和CM2底物序列共有至少一个共同氨基酸残基。在一些实施方案中，CM1底物序列和CM2底物序列共有至少两个共同氨基酸残基。在一些实施方案中，CM1底物序列和CM2底物序列共有至少三个共同氨基酸残基。在一些实施方案中，CM1底物序列和CM2底物序列共有三个或更多个共同氨基酸残基。在一些实施方案中，CM1和CM2是可操作连接在一起的分开的多肽。在一些实施方案中，CM1和CM2是直接连接在一起的分开的多肽，即，一个底物的N-端与另一底物多肽的C-端直接连接。在一些实施方案中，CM1的N-端与CM2的C-端直接连接。在一些实施方案中，CM2的N-端与CM1的C-端直接连接。在一些实施方案中，CM1和CM2是经由至少一个连接部分可操作连接在一起的分开的多肽。在一些实施方案中，未切割状态下的可活化抗体中的第一可切割部分CM1和第二可切割部分CM2具有如下的从N-端至C-端的结构排列：MM-CM1-CM2-AB、AB-CM2-CM1-MM、MM-CM2-CM1-AB或AB-CM1-CM2-MM。在一些实施方案中，可活化抗体包括CM1和CM2之间的连接肽(LP')。在一些实施方案中，可活化抗体包括掩蔽部分(MM)和CM1之间的连接肽(LP'')。在一些实施方案中，可活化抗体包括CM2和AB之间的连接肽(LP''')。在一些实施方案中，可活化抗体包括MM和CM1之间的连接肽(LP'')和CM2和AB之间的连接肽(LP''')。在一些实施方案中，可活化抗体包括MM和CM1之间的连接肽(LP'')和CM1和CM2之间的连接肽(LP')。在一些实施方案中，可活化抗体包括CM1和CM2之间的连接肽(LP')和CM2和AB之间的连接肽(LP''')。在一些实施方案中，可活化抗体包括MM和CM1之间的连接肽(LP'')、CM1和CM2之间的连接肽(LP')和CM2和AB之间的连接肽(LP''')。在一些实施方案中，可活化抗体包括CM1和CM2之间的连接肽(LP')。在一些实施方案中，可活化抗体包括AB和CM1之间的连接肽(LP'')。在一些实施方案中，可活化抗体包括CM2和掩蔽部分(MM)之间的连接肽(LP''')。在一些实施方案中，可活化抗体包括AB和CM1之间的连接肽(LP'')和CM2和MM之间的连接肽(LP''')。在一些实施方案中，可活化抗体包括AB和CM1之间的连接肽(LP'')和CM1和CM2之间的连接肽(LP')。在一些实施方案中，可活化抗体包括CM1和CM2之间的连接肽(LP')和CM2和MM之间的连接肽(LP''')。在一些实施方案中，可活化抗体包括AB和CM1之间的连接肽(LP'')、CM1和CM2之间的连接肽(LP')和CM2和MM之间的连接肽(LP''')。在一些实施方案中，LP'是GG。在一些实施方案中，LP'是GGSGGS(SEQIDNO:350)。在一些实施方案中，CM1是至少一种基质金属蛋白酶(MMP)的底物。MMP的实例包括MMP1；MMP2；MMP3；MMP7；MMP8；MMP9；MMP10；MMP11；MMP12；MMP13；MMP14；MMP15；MMP16；MMP17；MMP19；MMP20；MMP23；MMP24；MMP26；和MMP27。在一些实施方案中，CM1是MMP2、MMP9、MMP14、MMP1、MMP3、MMP13、MMP17、MMP11和/或MMP19的底物。在一些实施方案中，CM1是MMP2的底物。在一些实施方案中，CM1是MMP9的底物。在一些实施方案中，CM1是MMP14的底物。在一些实施方案中，CM1是两种或更多种MMP的底物。在一些实施方案中，CM1是至少MMP9和MMP14的底物。在一些实施方案中，CM1是至少MMP2和MMP9的底物。在一些实施方案中，CM1是至少MMP2和MMP14的底物。在一些实施方案中，CM1是三种或更多种MMP的底物。在一些实施方案中，CM1是至少MMP2、MMP9和MMP14的底物。在一些实施方案中，CM1包含相同的MMP的两种或更多种底物。在一些实施方案中，CM1包含至少两种或更多种MMP2底物。在一些实施方案中，CM1包含至少两种或更多种MMP9底物。在一些实施方案中，CM1包含至少两种或更多种MMP14底物。在一些实施方案中，CM1是MMP的底物且至少包括序列ISSGLLSS(SEQIDNO:20)；QNQALRMA(SEQIDNO:21)；AQNLLGMV(SEQIDNO:351)；STFPFGM本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含CM1‑CM2底物的分离的多肽，所述CM1‑CM2底物包含作为至少一种基质金属蛋白酶(MMP)的底物的至少第一可切割部分(CM1)和作为至少一种丝氨酸蛋白酶(SP)的底物的至少第二可切割部分(CM2)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.20 US 62/105490;2015.11.20 US 62/258015;201.一种包含CM1-CM2底物的分离的多肽，所述CM1-CM2底物包含作为至少一种基质金属蛋白酶(MMP)的底物的至少第一可切割部分(CM1)和作为至少一种丝氨酸蛋白酶(SP)的底物的至少第二可切割部分(CM2)。2.权利要求1的分离的多肽，其中CM1和CM2经由连接肽连接。3.权利要求1的分离的多肽，其中CM1和CM2共有至少一个氨基酸残基。4.权利要求1的分离的多肽，其中CM1和CM2彼此直接连接。5.权利要求1-4中任一项的分离的多肽，其中所述CM1-CM2底物包含选自SEQIDNO:1-17、22、469-471、483-490、515-522、555和557的氨基酸序列。6.权利要求1-5中任一项的分离的多肽，其中所述MMP是MMP2、MMP9或MMP14。7.权利要求1-6中任一项的分离的多肽，其中所述SP是uPA或matriptase。8.一种分离的多肽，其包含结合靶标的抗体或其抗原结合片段(AB)，以及作为至少一种基质金属蛋白酶(MMP)的底物的至少第一可切割部分(CM1)和作为至少一种丝氨酸蛋白酶(SP)的底物的至少第二可切割部分(CM2)。9.权利要求8的分离的多肽，其中CM1和CM2经由连接肽连接。10.权利要求8的分离的多肽，其中CM1和CM2共有至少一个氨基酸残基。11.权利要求8的分离的多肽，其中CM1和CM2彼此直接连接。12.权利要求8-11中任一项的分离的多肽，其中所述CM1-CM2底物包含选自SEQIDNO:1-17、22、469-471、483-490、515-522、555和557的氨基酸序列。13.权利要求8-12中任一项的分离的多肽，其中所述MMP、SP或MMP和SP两者与靶标共同定位于组织中。14.权利要求8-13中任一项的分离的多肽，其中其抗原结合片段选自Fab片段、F(ab')2片段、scFv、scab、dAb、单结构域重链抗体和单结构域轻链抗体。15.权利要求8-14中任一项的分离的多肽，其中所述AB与所述CM1连接。16.权利要求15的分离的多肽，其中所述AB与所述CM1直接连接。17.权利要求15的分离的多肽，其中所述AB经由连接肽与所述CM1连接。18.权利要求8-14中任一项的分离的多肽，其中所述AB与CM2连接。19.权利要求18的分离的多肽，其中所述AB与CM2直接连接。20.权利要求18的分离的多肽，其中所述AB经由连接肽与所述CM1连接。21.权利要求8-20中任一项的分离的多肽，其中所述MMP是MMP2、MMP9或MMP14。22.权利要求8-21中任一项的分离的多肽，其中所述SP是uPA或matriptase。23.权利要求8-22中任一项的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含掩蔽部分(MM)。24.权利要求8-23中任一项的分离的多肽，其中所述MM与AB结合的解离常数大于AB与靶标结合的解离常数。25.权利要求23或权利要求24的分离的多肽，其中所述MM是不超过40个氨基酸长的多肽。26.权利要求23或权利要求24的分离的多肽，其中所述MM与所述CM1连接，使得未切割状态下的分离的多肽包含如下的N-端至C-端的结构排列：MM-CM1-CM2-AB或AB-CM2-CM1-MM。27.权利要求26的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含所述MM和所述CM1之间的连接肽。28.权利要求26的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含CM2和所述AB之间的连接肽。29.权利要求23或权利要求24的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含CM1和CM2之间的连接肽。30.权利要求23或权利要求24的分离的多肽，其中所述MM与CM2连接，使得未切割状态下的分离的多肽包含如下的N-端至C-端的结构排列：MM-CM2-CM1-AB或AB-CM1-CM2-MM。31.权利要求30的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含所述MM和CM2之间的连接肽。32.权利要求30的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含CM1和所述AB之间的连接肽。33.权利要求30的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含CM1和CM2之间的连接肽。34.权利要求23或权利要求24的分离的多肽，其中所述分离的多肽包含第一连接肽(LP1)和第二连接肽(LP2)，且其中未切割状态下的分离的多肽具有如下的N-端至C-端的结构排列：MM-LP1-CM1-CM2-LP2-AB、AB-LP2-CM2-CM1-LP1-MM、MM-LP1-CM2-CM1-LP2-AB或AB-LP2-CM1-CM2-LP1-MM。35.权利要求34的分离的多肽，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：SJ摩尔，MTL阮，DR霍斯特特，O瓦西尔耶瓦，JG萨格特，JA特雷特，JW韦斯特，
申请(专利权)人：西托姆克斯治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US