用于检测孢子丝菌病的试剂盒制造技术

本案涉及一种用于检测孢子丝菌病的试剂盒，包括有独立分装的预包被有标志抗原的反应板、酶标标志抗原、显色液和终止液。本案通过对特异性抗原的设计，利用双抗原夹心法Elisa实现血清样本中抗体的检测，有效克服了从菌株中直接提取标志抗原含量不足、纯度不高等缺陷，进而解决了由其引起的检测敏感性不足、耗时较长等问题；本试剂盒操作简单，程序简化，易于重复，易于自动化检测。

A kit for the detection of sporosis

This case involves a kit for detecting sporo myceliosis. It contains separate packaging, pre labeled labeled reaction plates, enzyme labelled antigen, chromogenic fluid and stop liquid. In this case through the design of specific antigen, sandwich Elisa detection antibody in serum samples using a double antigen, effectively overcomes the lack of content, the purity of antigens of higher quality directly extracted from strains, so as to solve the problem of detection sensitivity caused by the insufficient and time-consuming problems; the kit has the advantages of simple operation, the program is simplified, easy to repeat, easy automation detection.

【技术实现步骤摘要】
用于检测孢子丝菌病的试剂盒
本专利技术属于生物试剂盒领域，特别涉及一种用于检测孢子丝菌病的试剂盒。
技术介绍
孢子丝菌病是由孢子丝菌复合体中的一种真菌感染所致慢性化脓性肉芽肿性的疾病，可以引起皮肤、皮下组织及附近淋巴系统的亚急性或慢性感染,另外也可引起黏膜、骨骼甚或系统性病变。孢子丝菌复合体包括：申克氏孢子丝菌，白色孢子丝菌、巴西孢子丝菌、球形孢子丝菌、卢里孢子丝菌和墨西哥孢子丝菌。当前该病的诊断方法主要为真菌培养和组织病理检查，其中，真菌培养是孢子丝菌病诊断的金标准。但是这两种方法存在耗时长、操作繁琐、技术要求高等缺点，同时阳性率、特异性均较低。
技术实现思路
针对现有技术的不足之处，本专利技术的目的在于提供一种用于检测孢子丝菌病的试剂盒，本试剂盒基于孢子丝菌的六种亚种表面抗原的筛选分析，选择了一种共同的标志性抗原，通过构建体外真核表达系统，实现特异性抗原的量产，并据此研发灵敏度高、稳定性好的孢子丝菌病酶联免疫试剂盒，以期彻底解决传统诊断技术中敏感性不足和耗时较长等问题。为实现上述目的，本专利技术的技术方案概述如下：一种用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其包括有独立分装的预包被有标志抗原的反本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，包括有独立分装的预包被有标志抗原的反应板、酶标标志抗原、显色液和终止液；其中，所述标志抗原的序列为：MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAHPTSGHYYDDAESEACLNGKAVYVTSNTEHNSVVAIPIARNGSLLLNHATSTATGGRGGNGINPRGMPAGPDALFSQGSITSAGNYLFAVNAGSNTVTMLAIDEHDPTKVTVVGEPAELPGEFPTTVGASDKFNLVCVG...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，包括有独立分装的预包被有标志抗原的反应板、酶标标志抗原、显色液和终止液；其中，所述标志抗原的序列为：MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAHPTSGHYYDDAESEACLNGKAVYVTSNTEHNSVVAIPIARNGSLLLNHATSTATGGRGGNGINPRGMPAGPDALFSQGSITSAGNYLFAVNAGSNTVTMLAIDEHDPTKVTVVGEPAELPGEFPTTVGASDKFNLVCVGLTGAKAGVSCASYSWYGLGPFDELRTFDLHQTTPPHGPTNTVSHVFFSGDQETVFTTVKGDPAVNNTGFLAAYPVEHIHSSCYAIPSVSHKGVISSPDGTAVLFGSTPIPDTTNLFVTDASFGAAILGIDDYEEASTLYKTVIPGQDATCWVAICPATHTAFVTDIRMNRLVEMSLVNAEIIGEPIDLTTFNTDPGLTEIRSGGSFVYALSPGNGTTEAWITVLNALTKKPVQHALLTPLGLDRNAMGMAILV。2.根据权利要求1所述的用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，所述酶标标志抗原通过将辣根过氧化物酶采用过碘酸钠法偶联于所述标志抗原上制得。3.根据权利要求1所述的用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，所述显色液为TMB显色液。4.根据权利要求1所述的用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，所述终止液为2mol/L的硫酸。5.根据权利要求1所述的用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，所述预包被有标志抗原的反应板通过以下步骤制得：1)包被：选用透明96孔酶标板，以pH＝9.6的碳酸盐溶液作为包被缓冲液，将5μg/mL的所述标志抗原加入96孔酶标板中包被，4℃过夜孵育；2)洗涤：用PBST缓冲液洗涤，拍干后于4℃保存；3)封闭：向96孔酶标板中加入蛋白保护剂，以塑料膜封口，于37℃水浴2h，随后以PBST缓冲液洗涤，拍干，于4℃保存。6.根据权利要求5所述的用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，所述蛋白保护剂包括有氯化钾、甘油和PBST缓冲液。7.根据权利要求6所述的用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，所述氯化钾的比重为0.4-0.6％。8.根据权利要求6所述的用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，所述甘油的比重为3-4％。9.根据权利要求1所述的用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，所述标志抗原通过以下方法制得：将基因序列克隆至酵母表达载体pPICZalphaB，随后电转至毕赤酵母X-33，利用毕赤酵母X-33持续表达标志抗原。10.根据权利要求9所述的用于检测孢子丝菌病的试剂盒，其特征在于，所述基因序列为：CTCGAGAAAAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：田晶晶，尹焕才，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32