大肠癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及大肠癌检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种大肠癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及大肠癌检测试剂盒。hsa‑miR‑92a‑1‑5p、hsa‑miR‑125b‑5p和hsa‑miR‑218‑5p的表达量高低与大肠癌存在密切的关联性，因此，hsa‑miR‑92a‑1‑5p、hsa‑miR‑125b‑5p和hsa‑miR‑218‑5p能够作为大肠癌的生物标志物应用在制备大肠癌检测试剂、大肠癌检测试剂盒或大肠癌检测装置中。基于上述生物标志物研发的大肠癌检测试剂，对大肠癌的检测具有较高的敏感度和较强的特异性，有利于大肠癌的筛查和早期诊断。

Colorectal cancer associated miRNA as a biomarker and colorectal cancer detection kit

The invention relates to the application of a miRNA related to colorectal cancer as a biomarker and a kit for detecting colorectal cancer. The expression level of HSA in colorectal cancer and miR 92a 1 5p, HSA 5p and 125b miR HSA miR 218 5p are related closely, therefore, HSA miR 92a 1 5p, HSA 5p and 125b miR HSA miR 218 5p can be used as colorectal cancer biomarkers applied in the preparation of colorectal cancer, colorectal cancer detection reagent kit or colorectal cancer detection device. Based on the above biomarkers, colorectal cancer detection reagent has high sensitivity and strong specificity for the detection of colorectal cancer, which is conducive to the screening and early diagnosis of colorectal cancer.

【技术实现步骤摘要】
大肠癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及大肠癌检测试剂盒
本专利技术涉及分子诊断领域，特别是涉及一种大肠癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及大肠癌的检测试剂盒。
技术介绍
大肠癌(Colorectalcancer，CRC)是由大肠粘膜上皮起源的恶性肿瘤，为常见的消化道恶性肿瘤，包括结肠癌和直肠癌(都是大肠的一部分)。大肠癌是世界上第三大肿瘤，其年新发病例大约为一百万，年死亡人数超过五十万。近年来，由于我国人民生活方式、饮食结构、环境因素等的改变，大肠癌的发病率及死亡率呈逐年上升趋势。大肠癌诊断主要有三类：X线检查、乙状结肠镜和纤维结肠镜检查以及癌胚抗原(CEA)试验。X线检查是诊断大肠癌的有效手段，但对于直径小于2cm的早期癌显示常有困难。癌胚抗原试验由于特异性、敏感性有限，对早期病例的诊断价值也不大。乙状结肠镜和纤维结肠镜检查虽然准确性高，但乙状结肠镜和纤维结肠镜检均具有一定的痛苦，患者难以接受，且乙状结肠镜和纤维结肠镜检均对早期的大肠癌不敏感。随着人体基因组测序完成及高通量测序技术的高速发展，基因筛查成为大肠癌诊断的方向。其中，癌胚抗原(CEA)对大肠癌的检测缺乏特异性及敏感度，不利于对早期大肠癌的诊断。MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为18～25个核苷酸的非编码单链RNA分子，miRNA能够与靶基因mRNA的3’端完全或部分匹配互补结合，导致靶mRNA降解或抑制其翻译从而调控靶基因的表达。然而，传统的大肠癌的检测试剂或试剂盒特异性和敏感度较低，需要同时检测大量的miRNA，才能得到初步的判断，操作相对比较复杂，工作量较大。
技术实现思路
基于此，有必提供一种具有较高特异性和较高敏感度且操作简单的大肠癌检测试剂盒。此外，还提供一种大肠癌相关的miRNA作为生物标志物的应用。hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p作为生物标志物在制备大肠癌检测试剂、大肠癌检测试剂盒或大肠癌检测装置中的应用。hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p均属于miRNA。专利技术人在大肠癌的生物标志物方面进行了大量的探索，预料不到地发现，hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p在大肠癌病人和健康人的体内的表达差异较大，hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p的表达量与大肠癌具有较高相关性，且hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p在体外很稳定，因此，能够作为生物标志物应用于制备大肠癌检测试剂、大肠癌检测试剂盒或大肠癌检测装置中。经实验验证，通过基于上述生物标志物研发的大肠癌检测试剂盒对hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p的联合检测，得到的结果对大肠癌的检测具有较高的敏感度和特异性，能够应用于大肠癌的筛查和早期诊断。此外，过基于上述生物标志物研发的大肠癌检测试剂盒仅需要对hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p三个miRNA进行检测，即可得到对大肠癌的检测具有较高的敏感度和特异性的结果，操作简单且方便，工作量小。一种大肠癌检测试剂盒，包括与生物标志物特异性结合的检测物，所述生物标志物包括hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p。其中一个实施例中，所述与生物标志物特异性结合的检测物包括能够扩增所述生物标志物的引物或能够检测所述生物标志物的探针。其中一个实施例中，所述与生物标志物特异性结合的检测物包括生物标志物PCR扩增正向引物和生物标志物PCR扩增反向引物；所述生物标志物PCR扩增正向引物包括第一正向引物、第二正向引物和第三正向引物，所述第一正向引物针对所述hsa-miR-92a-1-5p逆转录后得到的cDNA设计，所述第二正向引物针对所述hsa-miR-125b-5p逆转录后得到的cDNA设计，所述第三正向引物针对所述hsa-miR-218-5p逆转录后得到的cDNA设计。其中一个实施例中，所述第一正向引物的碱基序列如SEQIDNo.1所示；及/或，所述第二正向引物的碱基序列如SEQIDNo.2所示；及/或，所述第三正向引物的碱基序列如SEQIDNo.3所示。其中一个实施例中，所述生物标志物PCR扩增反向引物为通用反向扩增引物，所述生物标志物PCR扩增反向引物的碱基序列如SEQIDNo.4所示。其中一个实施例中，还包括RNA提取试剂、加A尾试剂和RNA逆转录试剂；所述RNA提取试剂用于提取待测样品中的RNA；所述加A尾试剂用于在提取的所述RNA的一端加A碱基；所述RNA逆转录试剂用于将加A尾后的所述RNA逆转录成cDNA。其中一个实施例中，所述RNA逆转录试剂包括RNA逆转录引物，所述RNA逆转录引物为通用RNA逆转录引物，所述通用RNA逆转录引物的碱基序列如SEQIDNo.5所示。其中一个实施例中，还包括能够检测内参基因的试剂，所述内参基因选自U6、GAPDH及β-actin中的至少一种。其中一个实施例中，所述能够检测内参基因的试剂包括内参基因RNA逆转录引物、内参基因PCR扩增正向引物和内参基因PCR扩增反向引物，其中，所述内参基因PCR扩增正向引物针对所述内参基因逆转录后得到的cDNA设计。附图说明图1为测试一中生物标志物hsa-miR-92a-1-5p在大肠癌病人和健康人的血浆中表达水平的分布图；图2为测试一中生物标志物hsa-miR-125b-5p在大肠癌病人和健康人的血浆中表达水平的分布图；图3为测试一中生物标志物hsa-miR-218-5p在大肠癌病人和健康人的血浆中表达水平的分布图；图4为采用实施例1的大肠癌的检测试剂盒检测区分大肠癌病人和健康人的敏感性和特异性的ROC曲线图；图5为采用实施例2的大肠癌的检测试剂盒检测区分大肠癌病人和健康人的敏感性和特异性的ROC曲线图；图6为采用实施例3的大肠癌的检测试剂盒检测区分大肠癌病人和健康人的敏感性和特异性的ROC曲线图；图7为采用实施例4的大肠癌的检测试剂盒检测区分大肠癌病人和健康人的敏感性和特异性的ROC曲线图。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例及附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。未特别说明，序列表中的碱基序列均为从5’端到3’端的顺序。一实施方式的应用，hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p作为生物标志物在制备大肠癌检测试剂、大肠癌检测试剂盒或大肠癌检测装置中的应用。具体地，生物标志物是指可以标记系统、器官、组织及细胞结构或功能的改变或可能发生的改变的生化指标。具体地，hsa-miR-92a-本文档来自技高网...

【技术保护点】
hsa‑miR‑92a‑1‑5p、hsa‑miR‑125b‑5p和hsa‑miR‑218‑5p作为生物标志物在制备大肠癌检测试剂、大肠癌检测试剂盒或大肠癌检测装置中的应用。

【技术特征摘要】
1.hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p作为生物标志物在制备大肠癌检测试剂、大肠癌检测试剂盒或大肠癌检测装置中的应用。2.一种大肠癌检测试剂盒，其特征在于，包括与生物标志物特异性结合的检测物，所述生物标志物包括hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-125b-5p和hsa-miR-218-5p。3.根据权利要求1所述的大肠癌检测试剂盒，其特征在于，所述与生物标志物特异性结合的检测物包括能够扩增所述生物标志物的引物或能够检测所述生物标志物的探针。4.根据权利要求1所述的大肠癌检测试剂盒，其特征在于，所述与生物标志物特异性结合的检测物包括生物标志物PCR扩增正向引物和生物标志物PCR扩增反向引物；所述生物标志物PCR扩增正向引物包括第一正向引物、第二正向引物和第三正向引物，所述第一正向引物针对所述hsa-miR-92a-1-5p逆转录后得到的cDNA设计，所述第二正向引物针对所述hsa-miR-125b-5p逆转录后得到的cDNA设计，所述第三正向引物针对所述hsa-miR-218-5p逆转录后得到的cDNA设计。5.根据权利要求3所述的大肠癌检测试剂盒，其特征在于，所述第一正向引物的碱基序列如SEQIDNo.1所示；及/或，所述第二正向引物的碱...

【专利技术属性】
技术研发人员：李炯，何箫梦，刘林泉，丁浩，
申请(专利权)人：深圳市恩普电子技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44