大肠癌早期相关DNA检测方法、相关检测探针组合物及检测试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种大肠癌早期相关DNA检测方法，其特点是，包括步骤：a、提取血浆或血清样品的循环DNA；b、将循环DNA进行甲基化修饰；c、采用PCR引物对和TaqMan?MGB荧光探针对步骤b得到的循环DNA进行荧光定量PCR，其中PCR引物对是SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列，TaqMan?MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列；d、根据荧光定量PCR中收集的荧光信号而形成的实时扩增曲线，分析循环DNA中是否存在大肠癌早期相关DNA。还涉及相关的检测探针组合物和试剂盒。本发明专利技术的大肠癌早期相关DNA检测方法设计巧妙，相对传统大肠癌检测技术具有发现早，灵敏度高，周期短等显著优点，检测结果准确可靠，从而可作为医师治疗和用药的参考依据，适于大规模推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疾病相关DNA检测
，更具体地，涉及大肠癌早期相关DNA检测方法
，特别是指一种大肠癌早期相关DNA检测方法、相关检测探针组合物及检测试剂盒。
技术介绍
结肠癌是发生于结肠部位的常见的消化道恶性肿瘤。据世界流行病学调查，结肠癌在欧美人群中发病率很高，居内脏种瘤第二位。随着我国人民生活水平的提高，饮食结构的改变，其发病率在国内也呈逐年上各趋势。目前的结肠癌诊断技术有X线检查，纤维结肠镜检查，CT检查等可视化物理诊断方法和潜血试验，血清癌胚抗原测定，血红蛋白测定，组织病理学检查等生化技术。可视化物理诊断方法往往到癌症发展后期才能检出，并对检测人员的技术，经验要求较高。 血清癌胚抗原对结肠癌的诊断阳性率不高(50% -60% )，尤其对早期肠癌的敏感性很差 (10% -20% )，故无法将它用于无症状人群的结肠癌筛选。组织病理学检查等是侵入性检查，具有不同程度的风险性。荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，能实时监控反应过程，并结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品的初始模板量的PCR技术。循环DNA是指存在于血浆或血清中的游离DNA。肿瘤细胞在增殖，转移和凋亡中都会不断的释放DNA进入血液循环中，因此癌症相关循环血DNA是监测肿瘤的生理和病理变化，细胞代谢分化的重要指标。因此，如果能够采用循环血DNA PCR定量技术对大肠癌早期相关DNA进行检测，则循环血DNA PCR定量技术检测相对目前主流的结肠癌诊断技术来说，具有快速、准确、直观的特点。
技术实现思路
本专利技术的主要目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种大肠癌早期相关 DNA检测方法、相关检测探针组合物及检测试剂盒，该检测方法设计巧妙，相对传统大肠癌检测技术具有发现早，灵敏度高，周期短等显著优点，检测结果准确可靠，从而可作为医师治疗和用药的参考依据，适于大规模推广应用。为了实现上述目的，在本专利技术的第一方面，提供了一种大肠癌早期相关DNA检测方法，其特点是，包括步骤a.提取血浆或血清样品的循环DNA ;b.将所述循环DNA进行甲基化修饰；c.采用PCR弓丨物对和TaqMan MGB荧光探针对所述步骤b得到的循环DNA进行荧光定量PCR，其中所述PCR引物对是SEQ ID N0:1和SEQ ID NO :2所示的核苷酸序列，所述TaqMan MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列；d.根据所述荧光定量PCR中收集的荧光信号而形成的实时扩增曲线，分析所述循环DNA中是否存在大肠癌早期相关DNA。较佳地，在所述步骤b中，采用重亚硫酸盐对所述循环DNA进行甲基化修饰。在本专利技术的第二方面，提供了一种大肠癌早期相关DNA检测探针组合物，其特点是，包括PCR引物对和TaqMan MGB荧光探针，其中所述PCR引物对是SEQ ID NO :1和SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，所述TaqMan MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO 3 所示的核苷酸序列。在本专利技术的第三方面，提供了一种大肠癌早期相关DNA检测试剂盒，其特点是，包括引物容器和荧光探针容器，所述引物容器内具有PCR引物对干燥粉末或溶液，所述荧光探针容器内具有TaqMan MGB荧光探针干燥粉末或溶液，其中所述PCR引物对是SEQ ID NO: I和SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，所述TaqMan MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO :3所示的核苷酸序列。本专利技术的创新点在于通过荧光定量PCR技术检测人体血浆或血清中是否存在大肠癌早期相关DNA，设计巧妙，相对传统大肠癌检测技术具有发现早，灵敏度高，周期短等显著优点，检测结果准确可靠，从而可作为医师治疗和用药的参考依据，适于大规模推广应用。具体实施例方式为更好的理解本专利技术的内容，下面结合具体实施例作进一步说明。I 试剂I. I 定量 PCR 探针定量PCR使用的引物探针(序列如下)溶解在TE缓冲液中，浓度5μΜ.-20 冻存。权利要求1.一种大肠癌早期相关DNA检测方法，其特征在于，包括步骤a.提取血浆或血清样品的循环DNA；b.将所述循环DNA进行甲基化修饰；c.采用PCR弓I物对和TaqManMGB荧光探针对所述步骤b得到的循环DNA进行荧光定量 PCR，其中所述PCR引物对是SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2所示的核苷酸序列，所述TaqMan MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列；d.根据所述荧光定量PCR中收集的荧光信号而形成的实时扩增曲线，分析所述循环 DNA中是否存在大肠癌早期相关DNA。2.根据权利要求I所述的大肠癌早期相关DNA检测方法，其特征在于，在所述步骤b 中，采用重亚硫酸盐对所述循环DNA进行甲基化修饰。3.一种大肠癌早期相关DNA检测探针组合物，其特征在于，包括PCR引物对和TaqMan MGB荧光探针，其中所述PCR引物对是SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2所示的核苷酸序列，所述TaqMan MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO :3所示的核苷酸序列。4.一种大肠癌早期相关DNA检测试剂盒，其特征在于，包括引物容器和荧光探针容器， 所述弓I物容器内具有PCR弓丨物对干燥粉末或溶液，所述荧光探针容器内具有TaqMan MGB荧光探针干燥粉末或溶液，其中所述PCR引物对是SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，所述TaqMan MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO :3所示的核苷酸序列。全文摘要本专利技术涉及一种大肠癌早期相关DNA检测方法，其特点是，包括步骤a、提取血浆或血清样品的循环DNA；b、将循环DNA进行甲基化修饰；c、采用PCR引物对和TaqMan MGB荧光探针对步骤b得到的循环DNA进行荧光定量PCR，其中PCR引物对是SEQ ID NO1和SEQ ID NO2所示的核苷酸序列，TaqMan MGB荧光探针具有的核苷酸序列是SEQ ID NO3所示的核苷酸序列；d、根据荧光定量PCR中收集的荧光信号而形成的实时扩增曲线，分析循环DNA中是否存在大肠癌早期相关DNA。还涉及相关的检测探针组合物和试剂盒。本专利技术的大肠癌早期相关DNA检测方法设计巧妙，相对传统大肠癌检测技术具有发现早，灵敏度高，周期短等显著优点，检测结果准确可靠，从而可作为医师治疗和用药的参考依据，适于大规模推广应用。文档编号C12N15/11GK102586441SQ201210052819公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月2日 优先权日2011年3月18日专利技术者赵翊均 申请人:赵翊均本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵翊均，
申请(专利权)人：赵翊均，
类型：发明
国别省市：