一种抗PD-L1抗体及应用、制备方法、试剂盒和药物技术

本发明专利技术公开一种抗PD‑L1抗体及应用、制备方法、试剂盒和药物，涉及生物检测和治疗技术领域。本发明专利技术提供的抗PD‑L1抗体，其含有重链可变区和轻链可变区，其中，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。该抗PD‑L1抗体可以特异性识别结合PD‑L1重组蛋白、以及表达PD‑L1分子的炎症组织细胞或肿瘤组织细胞，具有较高的特异性以及亲和力，可用于免疫印迹、酶联免疫吸附、免疫组织化学以及流式细胞术检测，也可以用于肿瘤、自身免疫性疾病和慢性感染性疾病等疾病的治疗。

An anti PD antibody and L1 application, preparation method, and pharmaceutical kit

The invention discloses an anti L1 antibody and PD application, preparation methods, kits and pharmaceutical, relates to the biological detection and treatment technology. Anti PD L1 antibody provided by the invention, which contains the variable region of heavy chain and light chain variable region of the heavy chain variable region of amino acid sequence of SEQ ID NO.5 shows, the amino acid sequence of the variable region of light chain as shown in SEQ ID NO.6. The L1 anti PD antibody could identify with PD L1 recombinant protein, and the expression of PD L1 molecules in inflammatory tissue cells or tumor cells, with high specificity and affinity, but Western blot, enzyme-linked immunosorbent assay, immunohistochemistry and flow cytometry for the treatment of disease, can also be for cancer, autoimmune diseases and chronic infectious diseases.

【技术实现步骤摘要】
一种抗PD-L1抗体及应用、制备方法、试剂盒和药物
本专利技术涉及生物检测和治疗
，具体而言，涉及一种抗PD-L1抗体及应用、制备方法、试剂盒和药物。
技术介绍
程序性细胞死亡因子配体1(Programmedcelldeath1ligand1，PD-L1)是一个由290个氨基酸组成的跨膜糖蛋白。PD-L1属于B7家族，具有IgV和IgC样区、跨膜区及胞浆区尾部，PD-L1与其T细胞上的程序性细胞死亡因子1(Programmedcelldeath1，PD-1)相互作用，在免疫应答的负性调控方面发挥着重要作用(RileyJL.PD-1signalinginprimaryTcells[J].ImmunolRev.2009，229(1):114-1125.)，广泛的低表达在正常免疫和非免疫细胞的表面，过表达于部分肿瘤细胞。在正常免疫系统中，PD-L1在免疫耐受方面，起着极其重要的作用。研究表明PD-L1表达在牙周膜细胞表面，促进T细胞的凋亡并抑制炎症细胞对牙周膜细胞的损伤作用(张杰华.炎性诱导牙周膜细胞表面表达的PD-L1是对抗牙周炎的一种保护性机制.第九届全国免疫学学术大会论文集.2014)。在肿瘤方面，在淋巴瘤、绒毛膜癌、黑色素瘤、食管癌等大多数肿瘤细胞系都检测到了PD-L1的表达，致使T细胞的凋亡，清除活化的T细胞(DongH.Tumor-associatedB7-H1promotesT-cellapoptosis:apotentialmechanismofimmuneevasion[J].NatMed,2002,8(8):793-800.)。PD-L1在乳腺癌(MuenstS.Expressionofprogrammeddeathligand1(PD-L1)isassociatedwithpoorprognosisinhumanbreastcancer[J].BreastCancerResTreat,2014,146(1):15-24.)、胃癌(KimJW,Prognosticimplicationsofimmnosuppressiveproteinexpressionintumorsaswellasimmunecellinfiltrationwithinthetumormicroenvironmentingastriccancer[J/OL].GastricCancer,2014.)、肾癌(ChoueiriTK.PD-L1Expressioninnon-clear-cellrenalcellcarcinoma[J].Annoncol,2014,25(11):2178-2184)等多种肿瘤中表达上调，而在正常组织中低表达或不表达。肿瘤细胞免疫逃逸是肿瘤躲避免疫系统清除的重要原因之一。表达于肿瘤细胞表面的PD-L1与PD-1结合抑制T细胞的激活，使其不能发现肿瘤。抗PD-L1单抗能有效结合癌细胞表面的PD-L1，阻断信号通路，激活T细胞，并杀死肿瘤细胞。阻断PD-L1/PD-1通路能提高T细胞的反应(BlankC.BlockadeofPD-L1(B7-H1)augmentshumantumor-specificTcellresponsesinvitro[J].IntJCancer,2006,119(2):317-327.)研究发现(刘志华.负性共刺激分子PD-L1在非肌层浸润性膀胱癌的表达及其对术后膀胱灌注治疗的影响.中山大学学报(医学科学版).2015,36(2):221-225.))，PD-L1在非肌层浸润性膀胱癌细胞表达水平与肿瘤病理分期相关，根据PD-L1的表达选择药物，可以提高治疗效果。下调肺腺癌A549细胞PD-L1的mRNA表达，可以增强杀伤细胞对A549细胞的杀伤作用(蒋涛.CIK细胞对RNAi沉默PD-L1基因的肺腺癌A549细胞的体外抑制作用.现代肿瘤医学.2015.23(12):1641-1643)PD-L1蛋白是非小细胞肺癌中预测肿瘤术后进展的重要指标(刘明东.PD-L1、Ki67预测非小细胞肺癌术后进展的研究.现代肿瘤医学.2017.885-889)。PD-L1的预后指标作用在其他肿瘤的研究中也有相关报道。在慢性病毒感染性疾病方面，研究结果显示，在PD-L1基因敲除小鼠中，大量CD8+T细胞聚集在肝内，使活化T细胞的清除率下降，导致自身免疫性肝炎的发病率上升(DongH.B7-H1determinesaccumulationanddeletionofintrahepaticCD8+Tlymphocytes[J].Immunity,2004,20(3):327-336.)。研究发现，在活化的T细胞或者在病毒感染期，干扰素上调PD-L1在肝细胞上的表达，并与与表达在T细胞上PD-1共同作用，诱导T细胞凋亡(MühlbauerM.PD-L1isinducedinhepatocytesbyviralinfectionandbyinterferon-αand-γandmediatesTcellapoptosis[J].JHepatol,2006,45(4):520-528.)研究慢性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒感染小鼠(DanielLBarber.RestoringfunctioninexhaustedCD8Tcellsduringchronicviralinfection[J].Nature，2006，439(7077):682-687.)结果表明，对功能受损病毒特异性CD8+T细胞进行基因表达分析比较，发现PD-L1在感染的细胞上也高表达，对PD-1/PD-L1信号通路进行阻断，可以增强T细胞的反应性，恢复CD8+T细胞部分功能。此机制有助于为慢性感染性疾病制定治疗策略。抗体药物是以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程技术制备的药物，具有特异性高，机制明确，疗效显著，毒副作用少等优点，在各种疾病治疗、特别是对肿瘤治疗有非常广阔的前景。目前美国FDA已经批准使用的抗PD-L1的单抗药物为罗氏(Roche/Genentech)的Atezolizumab(Tecentriq)，在临床上用于治疗膀胱癌和非小细胞肺癌。基于基因的检测方法只能在核酸水平上反映样品中基因含量，不能检测其是处于沉默还是表达，因此，其检测结果与蛋白的实际含量并无直接关联。加之，基因在加工过程中会因降解掉而难以检测，而核酸检测方法必须经过专门的核酸提取和纯化过程，增加了额外的工作量。基于蛋白的免疫学分析方法，采用高度特异性的抗原抗体反应，实现样本快速、准确、高效的检测，其技术关键是制备具有高度特异性的抗体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗PD-L1抗体，其可特异性结合PD-L1蛋白，具有较高的特异性，可用于免疫印迹(WesternBlot)、酶联免疫吸附(ELISA)、免疫组织化学(IHC)以及流式细胞术(FACS)检测，也可以用于肿瘤、自身免疫性疾病和慢性感染性疾病等疾病的治疗。本专利技术的另一目的在于提供一种抗PD-L1的抗体片段，其具有与上述抗PD-L1抗体等同的效果，可特异性结合PD-L1蛋白，具有较高的特异性。本专利技术的另一目的在于提供上述抗PD-L1抗体以及抗PD-L1的抗体片段的在检测和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗PD‑L1抗体，其特征在于，其含有重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

【技术特征摘要】
1.一种抗PD-L1抗体，其特征在于，其含有重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.6所示。2.根据权利要求1所述的抗PD-L1抗体，其特征在于，所述抗PD-L1抗体由小鼠杂交瘤细胞系3A7分泌得到。3.根据权利要求2所述的抗PD-L1抗体，其特征在于，所述小鼠杂交瘤细胞系3A7由抗原肽免疫小鼠得到的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合得到，所述抗原肽的氨基酸序列如SEQIDNO.2中的第29-290位所示。4.一种抗PD-L1的抗体片段，其特征在于，所述抗体片段是由权利要求1-3任一项所述的抗PD-L1抗体的抗体片段形成的Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、双抗体、线性抗体、单链抗体分子或多特异性抗体。5.权利要求1-3任一项所述的抗PD-L1抗体或权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王新华，
申请(专利权)人：联合益康北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11