用于特异性诱导针对靶细胞的T细胞细胞毒性的免疫缀合物制造技术

本发明专利技术涉及用于特异性诱导针对靶细胞的T细胞细胞毒性的免疫缀合物,其包含至少一个经可切割键与靶细胞结合模块偶联的经MHC I类可呈递的T细胞应答引发肽,及其生成和使用方法。

Immune conjugates for specific induction of cytotoxicity of T cells against target cells

The present invention relates to immunoconjugates T cell cytotoxicity induced by specific target cells, comprising at least a cutting key and target cells combined with MHC I class presentation T cell response module coupling caused by peptides, and methods of generating and using same.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于特异性诱导针对靶细胞的T细胞细胞毒性的免疫缀合物专利
本专利技术涉及用于特异性诱导针对靶细胞的T细胞细胞毒性的免疫缀合物,其包含至少一个与靶细胞结合模块偶联的经MHCI类可呈递的T细胞应答引发肽,及其生成和使用方法。专利技术背景与B细胞形成对比,T细胞识别经主要组织相容性复合物(MHC)的自体细胞表面分子在细胞表面上呈递的自已加工抗原衍生的肽。经MHCII类(MHCII)的抗原呈递的当前想法是外源蛋白经由吞噬和胞吞接近MHCII,而内源蛋白经由自噬接近MHCII。抗原加工成适宜长度(～10-16个氨基酸)的肽抗原(肽表位),结合吞噬体,内体或自噬体中的MHCII分子。未加载的MHCIIαβ链二聚体在内质网(ER)中作为与不变链(Ii)的九聚复合物装配,不变链(Ii)针对前溶酶体隔室中的过早肽或蛋白质相互作用提供保护。这种复合物运输至溶酶体MHCII隔室,在那里不变链进行顺序蛋白水解。最终的切割产物,一种称作II类相关Ii肽(CLIP)的肽,占据肽结合沟且必须在给MHCII分子加载高亲和力肽(MHCII限制肽)之前释放(WearschPandCreswellP,Nat.Rev.Immunol.:Antigenprocessingandpresentation,Posteravailableonline,http://www.nature.com/nri/posters/antigenprocessing)。通过引发幼稚CD4T细胞极化成效应T细胞(Th1,Th2,Th17)或记忆T细胞,幼稚CD4T细胞对细胞表面上加载了肽的MHCII的结合介导针对抗原的免疫接种。或者,取决于APC的微环境中的局部环境(例如细胞因子平衡)，通过引发幼稚CD4T细胞极化成调节T细胞(Treg)，幼稚CD4T细胞对加载了肽的MHCII的结合可介导针对抗原的免疫耐受。虽然MHCII分子在正常情况下只发生在抗原呈递细胞上,但是与巨噬细胞,B细胞和树突细胞一样,MHCI类(MHCI)发生在所有有核细胞上。经MHCI类(MHCI)的抗原呈递的当前假设机制是内源抗原,诸如在细胞内部生成的病毒蛋白或自体蛋白,在胞质溶胶内部由蛋白酶体和胞质溶胶蛋白酶加工成肽。然后这些肽经由称作抗原加工相关转运蛋白(TAP)复合物的特异性泵转运入ER,在那里它们由ER氨肽酶(ERAP)进一步修整以生成8-12个氨基酸的肽。已经证明内在化入细胞,优选专门抗原呈递细胞(APC),像树突细胞或巨噬细胞的外源蛋白的肽表位也能由MHCI呈递。这归于外源蛋白中包含的支持所述蛋白自吞噬体或内体逆转运并由此将该蛋白引导入细胞的胞质的转运域的存在(DonnellyJJetal.ProcNatlAcadSciUSA.1993Apr15；90(8):3530-4；WearschPandCreswellP,Nat.Rev.Immunol.:Antigenprocessingandpresentation，Posteravailableonline,http://www.nature.com/nri/posters/antigenprocessing)。MHCI重链-β2-微球蛋白异二聚体与短肽的装配由肽加载复合物协调,肽加载复合物由tapasin和ERp57的二硫化物连接的二聚体,钙网蛋白(CRT)和TAP分子构成。Tapasin也支持肽编辑以选择稳定的肽-MHCI复合物在细胞表面上的呈递(WearschPandCreswellP,Nat.Rev.Immunol.:Antigenprocessingandpresentation,Posteravailableonline,http://www.nature.com/nri/posters/antigenprocessing)。一旦肽加载到MHCI分子上,肽加载复合物分解且加载了肽的MHCI经由分泌途径离开ER以到达细胞表面。在ER的内腔中未能结合MHCI分子的肽经sec61通道自ER去除而进入胞质溶胶,在那里它们可能进行尺寸上的进一步修整,而且可能由TAP转运回入ER,结合MHCI分子(KoopmannJO,AlbringJ,HüterE,etal.(July2000)Immunity,13(1):117-27.；AlbringJ,KoopmannJO,GJ,MomburgF(January2004),Mol.Immunol.40(10):733-41)。细胞表面上的MHCI分子将它们加载的肽呈递给细胞毒性CD8T淋巴细胞(CD8T细胞,也称作CTL)。CTL触发经MHCI呈递肽表位的细胞通过凋亡进行编程性细胞死亡。由此,MHCI介导细胞介导的免疫,它是免疫系统解决细胞内病原体，也是解决表达突变型或异常蛋白的自身细胞的主要手段。过去几年里研究的一个焦点是利用诱导细胞介导的免疫的机制来诱导对多种不受细胞内病原体影响的患病细胞(例如肿瘤细胞)的杀伤。由于所有有核细胞均表达MHCI,因此诱导经MHCI呈递细胞内病原体的抗原是一种有希望的对患病细胞群体,例如肿瘤细胞诱导经CTL的编程性细胞死亡的办法。在这点上，已经开发了多种办法,通过由结合靶细胞的结合配偶和细胞内病原体的肽部分构成的免疫缀合物将自细胞内病原体,例如病毒衍生的抗原投递至某种患病细胞群体以诱导所投递肽的已加工片段经MHCI在患病细胞的表面上的呈递。然后患病细胞会被CTL清除。一种办法披露于EP0659439A1。EP0659439A1披露了一种免疫缀合物,其中病毒衍生肽(已修饰流感基质肽57-68)或细菌衍生肽(伯格氏疟原虫(Plasmodiumbergei)肽249-260)与靶细胞结合抗体偶联。通过添加N端半胱氨酸残基及随后经SPDP接头交联至抗体,各肽与抗体偶联以生成免疫缀合物。一旦内在化,包括所添加的N端半胱氨酸残基的各肽自缀合物分离,在细胞内进一步加工并由MHCI呈递。然而,该免疫缀合物的IC50值很高(0.5μmol/l)。如依照EP0659439A1的办法中描述的,一项主要挑战是刺激针对外源抗原的MHCI限制性CTL应答。在外源提供抗原的大多数情况中,它没有传送至胞质,从那里它能转运至MHCI途径。EP0659439A1提出了一种方法学来改善包括一旦加工能经MHCI呈递的肽的免疫缀合物的IC50值。在这里,推荐在免疫缀合物中包括转运域从而经逆转运将免疫缀合物传送至胞质。然而,EP0659439A1没有显示关于这种方法学的结果。因此,仍然需要改良的办法,通过诱导细胞介导的免疫来诱导对靶细胞的杀伤。专利技术概述本专利技术涉及一种免疫缀合物,其包含至少一个经可切割键与靶细胞结合模块偶联的经MHCI类可呈递的T细胞应答引发肽。在免疫缀合物内,可切割键安排成使得一旦切割,经MHCI类分子直接可呈递的所述T细胞应答引发肽自免疫缀合物释放。本专利技术的一个实施方案涉及一种免疫缀合物,其中T细胞应答引发肽是天然发生T细胞应答引发肽。本专利技术的一个实施方案涉及一种免疫缀合物,其中T细胞应答引发肽是包含至少一个半胱氨酸残基的天然发生T细胞应答引发肽。本专利技术的一个实施方案涉及一种免疫缀合物,其中可切割键是在靶细胞的内体隔室内可切割的。本专利技术的一个实施方案涉及一种免疫缀合物,其中免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫缀合物,其包含至少一个经可切割键与靶细胞结合模块偶联的经MHC I类可呈递的T细胞应答引发肽,其中该可切割键安排成使得一旦切割,经MHC I类分子直接可呈递的所述T细胞应答引发肽自该免疫缀合物释放。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.18 EP 15155598.4;2015.12.10 EP 15199306.01.一种免疫缀合物,其包含至少一个经可切割键与靶细胞结合模块偶联的经MHCI类可呈递的T细胞应答引发肽,其中该可切割键安排成使得一旦切割,经MHCI类分子直接可呈递的所述T细胞应答引发肽自该免疫缀合物释放。2.依照前述权利要求任一项的免疫缀合物,其中该T细胞应答引发肽是天然发生T细胞应答引发肽。3.依照前述权利要求任一项的免疫缀合物,其中该T细胞应答引发肽包含至少一个半胱氨酸残基。4.依照前述权利要求任一项的免疫缀合物,其中该可切割键是通过化学,pH依赖性或酶促切割可切割的。5.依照前述权利要求任一项的免疫缀合物,其中该可切割键是在该靶细胞的内体隔室内可切割的。6.依照前述权利要求任一项的免疫缀合物,其中该靶细胞是肿瘤细胞。7.依照前述权利要求任一项的免疫缀合物,其能够内在化入该靶细胞。8.依照前述权利要求任...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·齐亚代克，A·利夫克，F·利夫克，L·希尔林豪斯，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH