铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物领域，具体公开了铜绿假单胞菌的新用途，即铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的新应用。本发明专利技术通过实验证明铜绿假单胞菌可高效降解棒曲霉素，铜绿假单胞菌作为棒曲霉素降解的生物材料，在开发新的生物降解菌剂和生物降解无菌制剂方面都具有很好的应用前景。

Application of Pseudomonas aeruginosa in degradation of patulin

The present invention relates to the field of microorganisms, specifically discloses a new application of Pseudomonas aeruginosa, the new application of Pseudomonas aeruginosa in degradation of patulin in. The present invention is proved by experiments that Pseudomonas aeruginosa can efficiently degrade patulin, Pseudomonas aeruginosa as patulin degradation of biological material, has good application prospects in the development of new biodegradable and biodegradable aseptic preparation agent.

【技术实现步骤摘要】
铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的应用
本专利技术涉及微生物领域，具体地说，涉及铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的应用。
技术介绍
棒曲霉素(patulin)，又称展青霉素，是一种具有神经毒性的真菌代谢产物，广泛存在于多种食品、饲料加工原料中，在以苹果为加工原料的产品中尤为突出。大量的研究表明，棒曲霉素具有基因毒性、细胞毒性、免疫毒性和生殖毒性，能够导致哺乳动物细胞的DNA损伤，染色体畸变和微核形成，并且会损害动物的肾脏、肝脏和肠等器官组织，严重危害人及动物的健康。随着苹果汁、苹果浓缩汁、苹果酒等在人们日常饮食中所占比例的不断增加，世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)对食品中棒曲霉素的最低限量做了严格规定(＜50μg·L-1)，并有不断降低的趋势。棒曲霉素去毒方法可分为物理、化学和生物三大类，其中生物法因具有效率高、特异性强以及对食品、饲料和环境没有污染的特点，利用生物手段进行棒曲霉素的降解则成为近年来棒曲霉素毒素降解研究的热点。现有技术公开了铜绿假单胞菌在降解高效氯氰菊酯、玉米赤霉烯酮、黄曲霉素、赭曲霉素等方面的应用，但尚未见到铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素方面的研究和报道。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的新应用。为了实现本专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：本专利技术首先提供了一种铜绿假单胞菌的新用途，即铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的应用。本专利技术保护铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物在降解棒曲霉素中的应用。本专利技术还保护铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物在制备产品中的应用；所述产品的用途为降解棒曲霉素。本专利技术还保护一种降解棒曲霉素的方法，为使用铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物对棒曲霉素进行降解处理。所述方法中，降解处理的方式为将铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物与含有棒曲霉素的样品混合。本专利技术还保护一种产品，其活性成分为铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物；所述产品的用途为降解棒曲霉素。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述铜绿假单胞菌，具体为保藏编号为：CGMCCNo.8511的铜绿假单胞菌N17-1。本专利技术涉及到的原料或试剂均为普通市售产品，涉及到的操作如无特殊说明均为本领域常规操作。本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过实验证明，首次发现了铜绿假单胞菌可高效降解棒曲霉素。铜绿假单胞菌作为棒曲霉素降解的生物材料，在开发新的生物降解菌剂和生物降解无菌制剂方面都具有很好的应用前景。附图说明图1为本专利技术实施例1中LC检测结果图。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。铜绿假单胞菌N17-1(Pseudomonasaeruginosa)：保藏编号：CGMCCNo.8511。记载并保护“铜绿假单胞菌N17-1”的专利的申请号为：201410001212.1，授权公告号为CN103710292B(授权公告日为2016.01.20)。ppb：μg/L。棒曲霉素，标准品:Sigma-Aldrich,产品编号：P1639。棒曲霉素的结构式如下：实施例1、铜绿假单胞菌N17-1对棒曲霉素的降解作用NB液体培养基：由溶剂和溶质组成；溶质为蛋白胨、牛肉膏和NaCl，溶剂为水；蛋白胨在NB液体培养基中的浓度为1g/100ml，牛肉膏在NB液体培养基中的浓度为0.3g/100ml，NaCl在NB液体培养基中的浓度为0.5g/100ml。1、将铜绿假单胞菌N17-1接种于液体NB培养基中至初始OD600nm＝0.05，37℃条件下，200rpm(旋转半径20mm)震荡培养24h，收集全部菌液(即含有菌体和上清在内的整个培养体系)。2、将1mg棒曲霉素标准品溶解于10ml色谱纯甲醇中获得浓度为100ppm的棒曲霉素溶液。3、制备实验组溶液：菌悬液充分混匀后，取1.0ml步骤1收集的菌液，置于1.5ml离心管中，10000g离心10min，弃上清，加入1mlPBS(pH4.0，0.05mol/L)，涡旋混匀，再次于10000g离心10min，反复洗涤3次。弃上清，加入0.99mLPBS溶液，涡旋混合使菌体分散开，向离心管中加入10μL步骤2得到的棒曲霉素溶液，充分混匀后于恒温振荡器中37℃，200r/min避光培养72小时，得到实验组溶液。4、制备对照组溶液：以0.99mlPBS加入10μL的棒曲霉素溶液(100ppm)作为对照组，记作对照组溶液。5、效果检测：实验组溶液和对照组溶液分别作为待测溶液，进行如下步骤：(1)待测溶液经过10000g离心10min后，吸取上清液，0.22μm滤膜过滤，避光冻存，以备HPLC分析。(2)取步骤(1)得到的上清液，进行LC(液相色谱)。Waters2695高效液相色谱系统(Waters2478紫外检测器)，色谱柱：AgilentTC-C18，4.6×250mm，粒径5μm；流动相：乙腈/水(10:90，V/V)；检测波长：276nm；流速：1.0ml/min；柱温：室温；进样量：20μl。用棒曲霉素标准品的梯度稀释液代替样品液进行上述步骤。计算棒曲霉素降解率，计算方法为：降解率(％)＝(对照组棒曲霉素含量-实验组棒曲霉素含量)/对照组棒曲霉素含量×100％。实验重复三次，结果取平均值。LC检测结果如图1所示。图1中，A为棒曲霉素标准品的分析结果，B为对照组溶液的分析结果，C为实验组溶液的分析结果。结果表明，铜绿假单胞菌N17-1对棒曲霉素有较好的降解效果，经过统计降解率为93.4±0.4％。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本专利技术作了详尽的描述，但在本专利技术基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本专利技术精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本专利技术要求保护的范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的应用。

【技术特征摘要】
1.铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的应用。2.铜绿假单胞菌发酵液或铜绿假单胞菌代谢产物在降解棒曲霉素中的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCCNo.8511。4.一种降解棒曲霉素的方法，其特征在于，使用铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物对棒曲霉素进行降...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘阳，赵月菊，黄思琦，宗英，邢福国，王龑，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11