一种樱桃酵素脂质体的制备方法技术

一种樱桃酵素脂质体的制备方法，其主要是先由安琪酵母菌、植物乳杆菌和奥尔兰醋杆菌共同发酵樱桃，之后对发酵液进行多次快速反复冻结和融解，以破坏其中发酵菌的细胞壁，使细胞内酶类溶出，制得樱桃酵素；再以磷脂和豆甾醇作为膜材料，通过薄膜水化法包载樱桃酵素，表面使用聚乙二醇修饰，最终制得樱桃酵素脂质体，该纳米微囊可以增加酵素体内循环时间，并实现酵素的缓释。本发明专利技术的樱桃酵素脂质体，利于人体的消化吸收，同时通过脂质体的包载，避免酵素酶被胃液破坏，保持结构和活性的稳定、增加其在体内的循环时间，促进人体对樱桃酵素的利用率。

Method for preparing cherry enzyme liposome

A cherry enzyme liposome preparation method, which is mainly by Angel yeast, Lactobacillus plantarum and Acetobacter Halloran co fermentation of cherry, after the fermentation liquid of several fast repeated freezing and thawing, to destroy the cell wall of the bacteria, the intracellular enzymes digestion, prepared by cherry enzyme; phospholipid and stigmasterol as membrane material, carrying through the cherry enzyme film hydration method, surface modification of polyethylene glycol, finally obtained the cherry enzyme liposomes, nanoparticles can increase the enzyme circulation time and enzyme release. Cherry enzyme invention liposome, conducive to human digestion and absorption, at the same time by liposome entrapped enzyme, avoid gastric damage, maintain the structure and activity of stability, increase the circulation time in vivo, promote the body's utilization rate of cherry enzyme.

【技术实现步骤摘要】
一种樱桃酵素脂质体的制备方法
本专利技术属于保健食品
，特别涉及一种樱桃酵素脂质体及其制备方法。
技术介绍
随着人们逐渐开始注重养生调理，酵素产品受到人们越来越多的关注。酵素又称酶，合理适量地补充酶对于人体健康十分有益。然而传统酵素类产品以口服为主要摄取方式，经过胃液的消化作用，酶的结构遭到破坏，活性受到抑制，丧失保健养生功效。因此研发一种有利于酵素口服吸收的制剂，以保存其有益功能十分必要。如专利技术专利《一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法》中所描述使用脂质体包载有效成分避免胃液的消化作用破坏功能性因子。脂质体是一种由天然可食用原料通过自组装形成的纳米微囊，作为食品营养成分的理想载体，具有良好的生物相容性以及可生物降解等特性；能够提高包载成分的稳定性、生物利用度并延长体内循环时间。常规脂质体使用磷脂与胆固醇作为膜材料，过多的胆固醇摄入会引发一系列健康问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种不含胆固醇、利于人体消化吸收、能够保持酵素酶结构和活性的稳定、延长其在体内的循环时间的樱桃酵素脂质体的制备方法。本专利技术主要是将三种菌混合发酵得到的樱桃酵素包载于磷脂和豆甾醇自组装形成的脂质体中。本专利技术的制备方法如下：一、混合菌发酵制备樱桃酵素原料按质量计量，包括以下组分：安琪酵母菌1-5份，植物乳杆菌2-8份，奥尔兰醋杆菌1-3份，樱桃5000-7000份，白砂糖1000-6000份。所述安琪酵母菌菌数大于1-2×109个/g，植物乳杆菌菌数大于2×108个/g，奥尔兰醋杆菌菌数大于2×108个/g。(1)将樱桃洗净晾干去核去蒂，将发酵容器洗净灭菌烘干；(2)按照上述比例，将三株菌种按质量浓度0.05-0.2g/mL分别溶于樱桃汁，25-35℃恒温水浴中均速搅拌10-40min以活化菌株；(3)将樱桃和白砂糖装入发酵容器中反复堆叠至容器体积的70-75％，加入容器体积15-20％的无菌水，将步骤(2)中活化后的三种菌液加入到瓶中，于28-35℃环境中密封保存；(4)15-20天后将瓶中发酵液取出过滤除去滤渣；(5)将发酵液在干冰-水体系和35℃温水中循环浸泡2-5次，使发酵液经历迅速冻结和融解的循环，以破坏发酵菌和樱桃的细胞壁结构，获取其内酶类；(6)对步骤(5)制得的酵素采用0.45μm无菌微孔滤膜过滤除菌，于4℃保存。二、樱桃酵素脂质体的制备原料按质量计量，包括以下组分：磷脂40-60份，豆甾醇4-7份，聚乙二醇3-8份，樱桃酵素6000-15000份。(1)将磷脂、豆甾醇、聚乙二醇溶于无水乙醇中，在温度30-60℃，转速30-80rpm条件下，真空旋蒸1.5-6h除去无水乙醇，在瓶壁形成透明脂质薄膜；(2)将步骤一制得的樱桃酵素倒入到步骤(1)的脂质薄膜中，在温度40-50℃，转速50-120rpm条件下，常压旋转水化0.5-2h，形成脂质体乳浊液；(3)对步骤(2)得到的乳浊液进行超声处理，使用水浴超声或者冰浴探头超声，水浴超声时间为15-30min，冰浴探头超声功率为300-600w，超声模式为工作2-5秒/间歇2-5秒，时间为5-15min，得到脂质体溶液；(4)将步骤(3)得到的脂质体溶液经过无菌微孔滤膜除菌后，在-20℃冷冻长期保存，或者放置4℃冰箱随时饮用。本专利技术与现有技术相比具有如下优点：食品级脂质体包载由三种菌共同发酵而成的樱桃酵素，形成纳米级脂质体，利于人体的消化吸收，同时通过脂质体的包载，避免酵素酶被胃液破坏，保持结构和活性的稳定、增加其在体内的循环时间，促进人体对樱桃酵素的利用率。附图说明图1是本专利技术实施例1制得的樱桃酵素脂质体的电镜图。图2是本专利技术实施例2制得的樱桃酵素脂质体的电镜图。图3是本专利技术实施例3制得的樱桃酵素脂质体的电镜图。图4是本专利技术实施例1制得的樱桃酵素脂质体的粒径分布图。图5是本专利技术实施例2制得的樱桃酵素脂质体的粒径分布图。图6是本专利技术实施例3制得的樱桃酵素脂质体的粒径分布图。具体实施方式实施例1称量1g安琪酵母，2g植物乳杆菌，1g奥尔兰醋杆菌，分别溶于10mL樱桃汁中，35℃恒温水浴搅拌10min，以活化菌株，安琪酵母菌数大于1-2×109个/g，植物乳杆菌菌数大于2×108个/g，奥尔兰醋杆菌菌数大于2×108个/g；将5kg樱桃洗净晾干对半切开去核去蒂，装入洗净灭菌的8L广口瓶中，将樱桃和1kg白砂糖反复堆叠几层装至瓶中70％处，加入1.6L无菌水；将上述活化后的三种菌液加入到瓶中，于35℃恒温通风干燥环境中密封保存；每日观察一次确保未染菌，15天后取出瓶中产物过滤收集发酵液。将发酵液经干冰-水和35℃温水浸泡反复循环冻融三次后加压过0.45μm微孔滤膜。置于冰箱4℃保存。将55mg大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)、5mg豆甾醇(购自上海源叶生物科技有限公司)、6mg聚乙二醇(购自天津市光复化工研究所)，溶解于4mL无水乙醇中。接上旋转蒸发仪，调节温度30℃，转速30rpm，开启真空泵旋蒸6h，除去无水乙醇，瓶壁出现脂质薄膜。取10mL樱桃酵素溶液作为水化液，倒入烧瓶中与脂质薄膜充分接触，再接上旋蒸仪，调整温度50℃，转速120rpm，常压旋转水化0.5h，形成脂质体乳浊液。将乳浊液倒入烧杯中，放入超声清洗机内，开启100％功率超声15min后取出，得到脂质体溶液；将得到的得到脂质体溶液加压经过0.45μm微孔滤膜后，置于4℃环境中保存。应用透射电子显微镜对樱桃酵素脂质体进行形貌表征，如图1所示，纳米脂质体呈球形，可见脂质体粒径在80-100nm之间。经动态光散射系统测量平均粒径100nm，见图4。实施例2称量2g安琪酵母，3g植物乳杆菌，2g奥尔兰醋杆菌，分别溶于10mL樱桃汁中，25℃恒温水浴搅拌40min，以活化菌株，安琪酵母菌数大于1-2×109个/g，植物乳杆菌菌数大于2×108个/g，奥尔兰醋杆菌菌数大于2×108个/g；将5.5kg樱桃洗净晾干对半切开去核去蒂，装入洗净灭菌的8L广口瓶中，将樱桃和2kg白砂糖反复堆叠几层装至瓶中75％处，加入1.2L无菌水；将上述活化后的三种菌液加入到瓶中，于30℃恒温通风干燥环境中密封保存；每日观察一次确保未染菌，17天后取出瓶中产物过滤收集发酵液。将发酵液经干冰-水和35℃温水浸泡循环反复冻融四次后加压过0.45μm微孔滤膜。置于冰箱4℃保存。将40mg大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)、4mg豆甾醇(购自上海源叶生物科技有限公司)、3mg聚乙二醇(购自天津市光复化工研究所)，溶解于4mL无水乙醇中。接上旋转蒸发仪，调节温度60℃，转速80rpm，开启真空旋蒸1.5h，除去无水乙醇，瓶壁出现脂质薄膜。取6mL樱桃酵素溶液作为水化液，倒入烧瓶中与脂质薄膜充分接触，再接上旋蒸仪，调整温度40℃，转速50rpm，常压旋转水化2h，形成脂质体乳浊液。将乳浊液倒入烧杯中，放入超声清洗机内，开启100％功率超声30min后取出，得到脂质体溶液；将得到的得到脂质体溶液加压经过0.45μm微孔滤膜后，在-20℃冷冻保存。应用透射电子显微镜对樱桃酵素脂质体进行形貌表征，如图2所示，纳米脂质体呈球形，可见脂质体粒径在70-110nm之间。经动态光散射测量平均粒径125nm，见图5。实施例3称量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种樱桃酵素脂质体的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：一、混合菌发酵制备樱桃酵素原料按质量计量，包括以下组分：安琪酵母菌1‑5份，植物乳杆菌2‑8份，奥尔兰醋杆菌1‑3份，樱桃5000‑7000份，白砂糖1000‑6000份；(1)将樱桃洗净晾干去核去蒂，将发酵容器洗净灭菌烘干；(2)按照上述比例，将三株菌种按质量浓度0.05‑0.2g/mL分别溶于樱桃汁，25‑35℃恒温水浴中均速搅拌10‑40min以活化菌株；(3)将樱桃和白砂糖装入发酵容器中反复堆叠至容器体积的70‑75％，加入容器体积15‑20％的无菌水，将步骤(2)中活化后的三种菌液加入到瓶中，于28‑35℃环境中密封保存；(4)15‑20天后将瓶中发酵液取出过滤除去滤渣；(5)将发酵液在干冰‑水体系和35℃温水中循环浸泡2‑5次，使发酵液经历迅速冻结和融解的循环，以破坏发酵菌和樱桃的细胞壁结构，获取其内酶类；(6)对步骤(5)制得的酵素采用0.45μm无菌微孔滤膜过滤除菌，于4℃保存；二、樱桃酵素脂质体的制备原料按质量计量，包括以下组分：磷脂40‑60份，豆甾醇4‑7份，聚乙二醇3‑8份，樱桃酵素6000‑15000份；(1)将磷脂、豆甾醇、聚乙二醇溶于无水乙醇中，在温度30‑60℃，转速30‑80rpm条件下，真空旋蒸1.5‑6h除去无水乙醇，在瓶壁形成透明脂质薄膜；(2)将步骤一制得的樱桃酵素倒入到步骤(1)的脂质薄膜中，在温度40‑50℃，转速50‑120rpm条件下，常压旋转水化0.5‑2h，形成脂质体乳浊液；(3)对步骤(2)得到的乳浊液进行超声处理，使用水浴超声或者冰浴探头超声，水浴超声100％功率，时间为15‑30min；冰浴探头超声功率为300‑600w，超声模式为工作2‑5秒/间歇2‑5秒，时间为5‑15min，得到脂质体溶液；(4)将步骤(3)得到的脂质体溶液经过无菌微孔滤膜除菌后，在‑20℃冷冻长期保存，或者放置4℃冰箱随时饮用。...

【技术特征摘要】
1.一种樱桃酵素脂质体的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：一、混合菌发酵制备樱桃酵素原料按质量计量，包括以下组分：安琪酵母菌1-5份，植物乳杆菌2-8份，奥尔兰醋杆菌1-3份，樱桃5000-7000份，白砂糖1000-6000份；(1)将樱桃洗净晾干去核去蒂，将发酵容器洗净灭菌烘干；(2)按照上述比例，将三株菌种按质量浓度0.05-0.2g/mL分别溶于樱桃汁，25-35℃恒温水浴中均速搅拌10-40min以活化菌株；(3)将樱桃和白砂糖装入发酵容器中反复堆叠至容器体积的70-75％，加入容器体积15-20％的无菌水，将步骤(2)中活化后的三种菌液加入到瓶中，于28-35℃环境中密封保存；(4)15-20天后将瓶中发酵液取出过滤除去滤渣；(5)将发酵液在干冰-水体系和35℃温水中循环浸泡2-5次，使发酵液经历迅速冻结和融解的循环，以破坏发酵菌和樱桃的细胞壁结构，获取其内酶类；(6)对步骤(5)制得的酵素采用0.45μm无菌微孔滤膜过滤除菌，于4℃保存；二、樱桃酵素脂质体的制备原料按质量计量，包括以...

【专利技术属性】
技术研发人员：高大威，李磊，朱瑞艳，
申请(专利权)人：燕山大学，
类型：发明
国别省市：河北,13