一种菜豆环氧化物水解酶及其异源表达方法技术
Bean epoxide epoxide hydrolase and heterologous expression method thereof
The invention discloses a bean epoxide hydrolase and a heterologous expression method thereof, belonging to the technical field of biological engineering. Bean epoxide hydrolase gene nucleotide sequence of the invention is SEQ ID NO:1, the amino acid sequence of SEQ ID NO:2. The invention also discloses the construction of PvEH4 engineering bacteria and the method for measuring the activity of recombinant PvEH4. 6mM racemic styrene oxide as substrate, recombinant PvEH4 engineering bacteria whole cell catalysis, 220r/min reaction at the temperature of 25, 4h, SO (R) to obtain excess enantiomers (EES) and yield were 99.9% and 32.1% (R) PED enantiomeric excess (EEP) and yield 92.7% and 65.4% respectively.
【技术实现步骤摘要】
一种菜豆环氧化物水解酶及其异源表达方法
本专利技术涉及一种菜豆环氧化物水解酶及其异源表达方法，属于生物工程
技术介绍
手性环氧化物及其水解产物邻二醇可用于合成手性药物中间体等物质，在医药等领域可发挥重要作用。两个不同构型的物质，有时一个可发挥药理作用的同时，另一个构型会产生毒害作用，如沙利度胺的(R)-对映体有镇静作用，可治疗妇女妊娠反应，但(S)-对映体及其代谢产物有严重的胚胎毒性和致畸作用。因此用于合成手性药物中间体的物质最好以光学异构体的形式应用。手性纯环氧化物及邻位二醇可通过化学法和生物法获得，化学法主要可分为不对称合成法、选择吸附拆分法、结晶拆分法、化学拆分法、动力学拆分法和色谱分离法，但都对催化的底物类型要求严格、并且反应过程中易造成环境污染，不符合绿色环保的生产理念；相比于化学法，生物法更加高效专一，并且反应条件温和、绿色、经济，因此逐渐受到重视。生物法中，获得环氧化物及邻二醇的生物法主要有直接加氧途径、间接环氧化途径和酶解拆分合成途径。环氧化物水解酶(Epoxidehydrolase，EHs)和酯酶均可参与到酶解拆分途径中，但环氧化物水解...
【技术保护点】
一种菜豆来源的环氧化物水解酶，其特征在于，氨基酸序列如(a)或(b)所示：(a)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有环氧化物水解活性的由(a)衍生的蛋白质。
【技术特征摘要】
1.一种菜豆来源的环氧化物水解酶，其特征在于，氨基酸序列如(a)或(b)所示：(a)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有环氧化物水解活性的由(a)衍生的蛋白质。2.编码权利要求1所述环氧化物水解酶的基因。3.一种基因工程菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主，表达SEQIDNO.1所示的环氧化物水解酶。4.根据权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，以pET-28a(+)为载体。5.根据权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，所述宿主包括E.coliBL21、E.coliJM109、E.coliDH5α、E....
【专利技术属性】
技术研发人员：邬敏辰，石小玲，阚婷婷，李闯，李剑芳，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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