一种改造的热稳定无机焦磷酸酶制造技术

本发明专利技术公开了一种热稳定无机焦磷酸酶，其特征在于，所述焦磷酸酶是由序列为SEQ ID NO:1的无机焦磷酸酶改造而来，其改造方法为下述方法中的至少一种：1）将第6位氨基酸T改造为氨基酸S；2）将第11位氨基酸E改为氨基酸K；3）将第72位氨基酸L改为氨基酸I；4）将第73位氨基酸V改为氨基酸I；5）将第124位氨基酸D改造为氨基酸A；6）将第160位氨基酸A改造为Q或K。经过改造以后，获得的无机焦磷酸酶具有更高的扩增效率，热稳定性也更好。

【技术实现步骤摘要】
一种改造的热稳定无机焦磷酸酶
本专利技术涉及酶的改造，特别涉及一种热稳定无机焦磷酸酶的改造。
技术介绍
在生物体内，NTPs/dNTPs参与核酸的生物合成会生成副产物焦磷酸盐，体内存在的焦磷酸盐会在焦磷酸酶的催化作用下分解，减少焦磷酸累积可能造成的负面效应。PCR利用嗜热酶模拟体内核酸复制的体外反应，伴随dNTPs的参入，焦磷酸的累积同样会降低PCR扩增的效率。焦磷酸的积累，会导致反应混合物的pH降低，影响荧光染料的稳定性(罗氏，200510099911.5)。为了去除这些焦磷酸对PCR的抑制，人们在PCR反应中添加无机焦磷酸酶，用以将焦磷酸(PPi)会水解为正磷酸(Pi)。这种反应，会使反应混合液的pH增加，并是的荧光染料变得更稳定。为了适应PCR的高温，这种焦磷酸酶必须能耐受95℃的高温。赵丹彤等人重组表达了超嗜热古菌(Pyrococcushorikoshii)的PPase基因(赵丹彤.重组超嗜热无机焦磷酸酶的表达、纯化及酶学性质研究[D].吉林大学,2003.)，这种酶最适温度为88℃，最适pH为10.3，并不适合PCR的使用。牟航等人重组表达了嗜热栖热菌(Thermusthe本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种热稳定无机焦磷酸酶，其特征在于，所述无机焦磷酸酶是由序列为SEQ ID NO:1的无机焦磷酸酶改造而来，其改造方法为下述方法中的至少一种：1)将第6位氨基酸T改造为氨基酸S；2)将第11位氨基酸E改为氨基酸K；3)将第72位氨基酸L改为氨基酸I；4）将第73位氨基酸V改为氨基酸I；5）将第124位氨基酸D改造为氨基酸A；6）将第160位氨基酸A改造为Q或K。

【技术特征摘要】
1.一种热稳定无机焦磷酸酶，其特征在于，所述无机焦磷酸酶是由序列为SEQIDNO:1的无机焦磷酸酶改造而来，其改造方法为下述方法中的至少一种：1)将第6位氨基酸T改造为氨基酸S；2)将第11位氨基酸E改为氨基酸K；3)将第72位氨基酸L改为氨基酸I；4）将第73位氨基酸V改为氨基酸I；5）将第124位氨基酸D改造为氨基酸A；6）将第160位氨基酸A改造为Q或K。2.一种热稳定无机焦磷酸酶，其特征在于，所述无机焦磷酸酶的氨基酸序列为：MANLKSLPVGKKAPEVVNMVIEVPRGSGNKYEYDPGLGVIKLDRVLPGAQFYPGDYGFIPSTLAEDGDPLDGIVLSTYPLLPGVVVEVRVVGLLLM...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓玮，彭春梅，邓可基，李家导，张嘉，李海茵，陈凤英，乐小炎，林志豪，林敏深，林若琳，谢丽娟，罗园香，石壮壮，王法，王星，张新，莫静嫣，陈观芝，
申请(专利权)人：广州海力特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44