A method for preparing placenta stem cells combined with silk protein dressings, which belongs to the biological composite material preparation field, including: chorionic villi of placenta derived mesenchymal stem cells (CMSCs) cultured in vitro, silk fibroin nano fiber membrane preparation, chorionic villi of placenta derived mesenchymal stem cells (CMSCs) vaccination. The placenta stem cell prepared by the invention has the advantages that the silk fibroin dressing material is convenient, and the utility model does not involve social ethics, etc. the utility model can accelerate the skin repair and has the advantages of good tissue repair.
【技术实现步骤摘要】
一种胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料的制备方法
本专利技术属于复合生物材料制备领域,具体涉及一种胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料的制备方法。
技术介绍
近年来,具有增殖和分化潜能的干细胞己经成为皮肤组织工程中好的种子细胞。胚胎干细胞在皮肤组织工程中应用研究,为构建组织工程皮肤在皮肤损伤修复的应用提供了理论依据。但是胚胎干细胞在医学应用上存在道德伦理问题和致瘤性等限制因素,而具有多向分化潜能的多能干细胞一一间充质干细胞(MesenchymalStemCells,MSCs)作为良好的种子细胞,在皮肤组织工程研究中倍受关注。以往的研究主要是集中于骨髓来源的BMSCs但BMSCs需要通过骨髓穿刺而获得,且数量随年龄增长而下降,这都限制了BMSCs的应用,且支架材料的选择和应用一直影响该技术发展的重要难题。
技术实现思路
根据现有技术中存在问题,本专利技术采用新生儿娩后“废弃物”的胎盘组织获取CMSCs,并选用丝素蛋白作为支架材料,制得胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料。本专利技术采用以下技术方案:一种胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料的制备方法,包括以下步骤:步骤一:机械剥除胎盘羊膜组织,将剥离后剩下的绒毛组织,过质量浓度75%的酒精,再用PBS冲洗洗尽血渍,并将其剪成1mm2小块后,浸没于含有质量浓度0.1%的IV型胶原酶的低糖基础培养基(L-DMEM)中,37℃消化15-45分钟,得细胞组织液;步骤二:细胞组织液经200目筛网过筛后转移至干净的离心管,1200rpm离心lOmin,弃上清液后接种于含有质量浓度10%的胎牛血清的低糖基础培养基(L-DMEM)中,于37℃、5%CO2的培养箱中培 ...
【技术保护点】
一种胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一:机械剥除胎盘羊膜组织,将剥离后剩下的绒毛组织,过质量浓度75%的酒精,再用PBS冲洗洗尽血渍,并将其剪成1mm
【技术特征摘要】
1.一种胎盘干细胞复合蚕丝蛋白敷料的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一:机械剥除胎盘羊膜组织,将剥离后剩下的绒毛组织,过质量浓度75%的酒精,再用PBS冲洗洗尽血渍,并将其剪成1mm2小块后,浸没于含有质量浓度0.1%的IV型胶原酶的低糖基础培养基中,37℃消化15-45分钟,得细胞组织液;步骤二:细胞组织液经200目筛网过筛后转移至干净的离心管,1200rpm离心lOmin,弃上清液后接种于含有质量浓度10%的胎牛血清的低糖基础培养基中,于37℃、5%CO2的培养箱中培养5天后进行第一次换液,随后每隔两天进行换液,待细胞融合至90%使用质量浓度0.25%的胰酶进行消化,得胎盘绒毛膜来源间充质干细胞(CMSCs);步骤三:将2L去离子水烧热至沸腾,加入4g碳酸钠及5g家蚕生丝,煮沸30min后,用去离子水清洗干净并烘干,再用9.3mol/L的LiBr溶液溶解蚕丝,溶解浓度20wt%,待完全溶解后将溶液装入透析袋,去离子水透析72h,9000r/min离心20min,重复两次,得丝素蛋白溶液;步骤四:将丝素蛋白溶液注入聚乙烯皿中,自然风干后获得丝素蛋白膜;步骤五:将丝素蛋白膜溶于质量浓度98%甲酸中,然后装入注射器中进行静电纺丝,纺丝针头内径0.9mm,调整纺丝电压在10-15KV,距离在8-15cm,速度为0.1...
【专利技术属性】
技术研发人员:张春松,吴长应,
申请(专利权)人:芜湖扬展新材料科技服务有限公司,
类型:发明
国别省市:安徽,34
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