一种猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒及其检测方法，属于生物领域，以解决现有血清抗体ELISA试剂盒是只适合单一病原产生的抗体检测，无法同时检测多种病原产生的血清抗体的问题。本发明专利技术利用SPA蛋白具有特异性结合猪血清中所有IgG抗体的生物学功能。SPA蛋白可以特异性结合猪血清样品中的所有类型IgG抗体，如果待检测样品中存在抗三种病原编码的4种蛋白的抗体，也能够与SPA蛋白发生特异性结合，实现一种抗原同时捕获3种病原感染或免疫后产生的4血清IgG抗体(抗CSFV的E2蛋白抗体、抗PCV2的Cap蛋白抗体和抗PrV的gB和gE蛋白抗体的)的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒及其检测方法
本专利技术属于生物领域，具体涉及一种猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
病毒性传染病已成为威胁我国生猪养殖健康发展的严重障碍，其爆发和流行给养猪业者造成了极大经济损失。目前，包括猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病毒(PrV)是养猪业重点防控的病毒性疫病。在生猪疾病的预防工作中，通过实时检测和评价疫苗免疫后血清中抗体水平和区分抗体来源是评价疫苗接种效果、保护猪群健康的关键环节。猪病毒性传染性疾病的血清抗体检测方法主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、乳胶凝集试验、血凝试验、病毒中和试验、单层酶联免疫吸附实验等。由于ELISA方法操作简单、成本低廉、对试验条件要求低、敏感性和稳定性好、可以评价抗体水平和种类、适合规模化检测血清样本且结果判定可标准化，因此，是目前应用动物疫病血清抗体水平监控和评价体系中应用最广泛的检测手段。常用血清抗体检测ELISA方法基本原理是，利用预先包被在微孔板中来自待检测疫病的抗原(重组抗原或灭活完整病原颗粒)结合血清样本中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒，其特征在于包括预包被SPA蛋白的检测板、血清样品稀释液、洗涤液、显色液、终止液、四种病原的阴阳性标准对照血清、以及HRP分别标记的CSFV的E2抗原、PCV2的Cap抗原、PrV的gB和gE抗原。

【技术特征摘要】
1.一种猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒，其特征在于包括预包被SPA蛋白的检测板、血清样品稀释液、洗涤液、显色液、终止液、四种病原的阴阳性标准对照血清、以及HRP分别标记的CSFV的E2抗原、PCV2的Cap抗原、PrV的gB和gE抗原。2.根据权利要求1所述的一种猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒，其特征在于:所述预包被SPA蛋白的检测板所包被SPA蛋白的包被量为2ng～28ng/孔，包被稀释液为50mmol/L的pH值为9.6的碳酸盐缓冲液。3.根据权利要求1或2所述的所述的猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒，其特征在于:所述预包被SPA蛋白的检测板中包被用碳酸盐缓冲液每毫升的组成为1.59mgNa2CO3和2.93mgNaHCO3，去离子水充分溶解后保存于4℃温度下。4.根据权利要求3所述猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒，其特征在于:所述预包被SPA蛋白的检测板中采用的封闭液组分为质量浓度为1-5％海藻糖、质量浓度0.5-2.0％明胶、体积浓度1-8％马血清，1×PBST，pH7.3，200μl/孔。5.根据权利要求4所述的猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒，其特征在于:所述洗涤液为体积浓度为0.5％的吐温-20的0.1mol/L的pH值为7.2的磷酸盐缓冲液，去污洗涤液为质量浓度1％EDTA加50mmoL/L的pH值为7.2的磷酸盐缓冲液，100μL/孔室温作用1-15min。6.根据权利要求5所述的猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒，其特征在于:所述预包被SPA蛋白的检测板中，标准阴、阳性血清和待检测血清样本均以原倍浓度100μl/孔加入到对应的孔中，室温作用60min。7.根据权利要求6所述的猪病毒性传染病血清IgG抗体多重ELISA检测试剂盒，其特征在于:所述HRP标记的CSFV的E2抗原、PCV2的Cap抗原、PrV的gB和PrV的gE抗原使用浓度分别为1∶4000、...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹双辉，杨顺利，蔡建平，尚佑军，袁莉，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62