一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒及其检测方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒及其检测方法
本专利技术属于生物领域，具体涉及一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒及其检测方法。
技术介绍
猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的是严重威胁养猪业，可导致各生长阶段猪的死亡，给养猪业造成经济损失。CSFV同属还包括有牛病毒性腹泻病毒和羊边界病毒，其中CSFV与牛病毒性腹泻病毒血清之间存在交叉反应。CSFV是有囊膜的RNA病毒，基因组长约12.3kb，含一个开放式阅读框架(ORF)，翻译成一条约含3898个氨基酸残基的多聚前体蛋白，其中C、Erns(E0)、E1、E2为结构蛋白，E2蛋白是研制CSFV血清抗体诊断试剂的首选抗原。近年来，国内自主研发的用于检测CSFV血清抗体的试剂盒在猪瘟防控方面起到了重要作用，但核心技术缺乏直接导致国产诊断试剂与国外同类产品之间存在显著差异，不仅体现在价格上，还存在产品的稳定性差，包括批间和批内的变异系数过大、试剂的保质期较短、操作程序不友好等问题。更为重要的是，出口CSFV抗体检测试剂盒的国家都是“灭猪瘟的地区”，这些试剂盒均以抗体定性为判定标准...
【技术保护点】
一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒，其特征在于：将特异性鉴定和筛选来自猪瘟病毒疫苗株C‑株编码的E2蛋白两个重复的抗原结构域A通过柔性氨基酸接头、半胱氨酸、疏水氨基酸进行融合串联，并在大肠杆菌E.coli中成功获得重组表达蛋白，重组蛋白命名为r2E2，以其作为抗原建立的定量检测抗猪瘟病毒E2蛋白IgG抗体竞争ELISA试剂盒；试剂盒包括抗原包被板、血清样品稀释液、洗涤液、TMB底物液、终止液；抗原包被板包括预包被r2E2抗原、抗原稳定剂、酶标板、封闭液、标准IgG样品；所述抗原为：5`‑domainA‑TGT‑dA15‑linker‑dA15‑TGT‑dom...
【技术特征摘要】
1.一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒，其特征在于：将特异性鉴定和筛选来自猪瘟病毒疫苗株C-株编码的E2蛋白两个重复的抗原结构域A通过柔性氨基酸接头、半胱氨酸、疏水氨基酸进行融合串联，并在大肠杆菌E.coli中成功获得重组表达蛋白，重组蛋白命名为r2E2，以其作为抗原建立的定量检测抗猪瘟病毒E2蛋白IgG抗体竞争ELISA试剂盒；试剂盒包括抗原包被板、血清样品稀释液、洗涤液、TMB底物液、终止液；抗原包被板包括预包被r2E2抗原、抗原稳定剂、酶标板、封闭液、标准IgG样品；所述抗原为：5`-domainA-TGT-dA15-linker-dA15-TGT-domainA-3`或氨基酸：5`-domainA-Cys-Lys5-linker-Lys5-Cys-domainA-3`。2.根据权利要求1所述的一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒，其特征在于：酶标板所包被抗原的包被浓度为1ng～10ng/mL。3.根据权利要求1或2所述的一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒，其特征在于：抗原稳定剂组成为，体积浓度为0.01％多聚甲醛PBS缓冲液，50μl/孔，室温，作用5min。4.根据权利要求3所述的一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒，其特征在于：封闭液组分为质量浓度为0.5-10％蔗糖、质量浓度1.0-8.0％明胶、质量浓度0.1-6.0％的酪蛋白，1×PBST，pH7.2，200μl/孔。5.根据权利要求4所述的一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒，其特征在于：HRP-IgG酶标记抗体在ELISA中的工作浓度为1∶10,000～1∶100,000，HRP-IgG质量含量为0.425ng/mL～4.25ng/mL。6.根据权利要求5所述的一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒，其特征在于：标准IgG样品为0μg/ml，15μg/ml，50μg/ml，250μg/ml样品和待检测血清样本，均以50μl/孔加入到对应孔中，同时加入100μl/孔酶标记抗体HRP-IgG，37℃孵育60min。7.根据权利要求6所述的一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试剂盒，其特征在于：TMB底物液反应体积为100μl/孔，避光室温作用25-30min显色，TMB底物液为底物A和底物B按照1:1混合使用，底物A为5mg/mLDMSO溶液；底物B为500ml双蒸水溶解13.608gCH3COONa·3H2O，用1mol/L柠檬酸调pH至6.0，加入1mL30％双氧水，定容至1000ml。8.根据权利要求7所述的一种定量检测猪瘟病毒IgG抗体竞争ELISA试...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨顺利，尹双辉，尚佑军，袁莉，吴锦艳，蔡建平，刘湘涛，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62
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