一种具有降血糖作用的PACAP多肽类似物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有降血糖作用的PACAP多肽类似物的制备方法。其是解决现有PACAP天然结构稳定性差的问题。其先是根据PACAP基因以及对基因中重要位点的分析，设计出既具有降糖活性，又能延长半衰期的PACAP类似物，采用全合成的方法获得该种类似物的基因，再通过扩增克隆入表达载体进行原核表达，获得了PACAP多肽类似物。本发明专利技术采用原核表达的方法获取PACAP多肽类似物的原核表达产物，其价格低廉，易于操作，降低生产成本；所获得的PACAP多肽类似物稳定性好，同时具有降糖作用，可用于后期产品加工利用。

【技术实现步骤摘要】
一种具有降血糖作用的PACAP多肽类似物的制备方法
本专利技术属于基因工程
，特别涉及一种具有降血糖作用的PACAP多肽类似物的制备方法。
技术介绍
糖尿病是人体营养代谢障碍导致的内分泌疾病，以持续高血糖为其基本生化特征，因胰岛素在靶细胞内不能发挥正常生理作用，以及胰岛素供给不足，使蛋白质、脂肪和单糖转化失调，导致患者的水、电解质代写紊乱的全身性疾病。分为Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病。Ⅱ型糖尿病是最常见的一类，多发于成年人。目前，区别于之前完全使用药物治疗的单一方式，2015年，采用药物和保健复合治疗的糖尿病患者人数比2012年增加了一倍，2015年的中国糖尿病保健品市场比2012年增加了3倍多。垂体腺苷酸环化酶激活肽（PituitaryAdenylateCyclaseActivitingPoly-peptidePACAP）是Miyata等于1989年在寻找新的下丘脑促激素时从羊下丘脑发现的神经肽，因其对大鼠垂体细胞腺苷酸环化酶（AC）的高激活作用而得名，包括PACAP38和PACAP27两种，分别由38和27个氨基酸组成，后者的氨基酸顺序与PACAP38的N末端1～27个氨基酸残基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有降血糖作用的PACAP多肽类似物的制备方法，其特征在于：其经过下列工艺步骤：（1）、基因设计与合成全合成点突变后的PACAP类似物基因，全长为84bp；其两端分别引入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点；其中，上述类似物基因序列如下：5’‑cactcagacgctgttttcactgacaactacactcgactccgaaagcagatggcagtaaagaagtacctcaactcaatcctaaac‑3’；（2）、酶切将步骤（1）中合成得到的PACAP类似物基因和PGEX‑6P‑1载体分别采用BamHⅠ和EcoRⅠ进行双酶切，酶切温度为37℃，作用2～4h；（3）、连接将步骤（2）中得...

【技术特征摘要】
1.一种具有降血糖作用的PACAP多肽类似物的制备方法，其特征在于：其经过下列工艺步骤：（1）、基因设计与合成全合成点突变后的PACAP类似物基因，全长为84bp；其两端分别引入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点；其中，上述类似物基因序列如下：5’-cactcagacgctgttttcactgacaactacactcgactccgaaagcagatggcagtaaagaagtacctcaactcaatcctaaac-3’；（2）、酶切将步骤（1）中合成得到的PACAP类似物基因和PGEX-6P-1载体分别采用BamHⅠ和EcoRⅠ进行双酶切，酶切温度为37℃，作用2～4h；（3）、连接将步骤（2）中得到的酶切片段与载体采用PROMEG公司的回收试剂盒回收后，16℃连接过夜；（4）、转化将步骤（3）得到的连接产物转化大肠杆菌XL1-Blue，挑...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建文，孙治政，姜军强，王菁，
申请(专利权)人：山东明鑫集团有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37