一种生物活性肽Gly‑Leu‑Pro‑Asn及其制备与应用制造技术

本发明专利技术涉及蛋白领域，具体涉及一种生物活性肽Gly‑Leu‑Pro‑Asn及其制备与应用，生物活性肽Gly‑Leu‑Pro‑Asn具有促进机体免疫力活性的功能，在制备用于促进机体免疫力活性的药物、食品或保健品中具有应用价值。本发明专利技术验证了多肽GLPN能够调节机体免疫力，增强淋巴细胞和巨噬细胞的体外增殖能力，促进巨噬细胞一氧化氮诱生量增加，提高TNF‑α、IL‑1β和IL‑6的水平，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，而且不会引起机体的免疫排斥反应，对开发具有调节免疫功能的食品和保健品具有十分重要的意义。

The preparation and application of a biologically active peptide Gly Leu Pro Asn and its preparation

The present invention relates to the field of protein, specifically relates to preparation and application of a biologically active peptide Gly Pro and Asn Leu, bioactive peptide Gly Leu Pro Asn can improve the immunity activity function, in preparation for the promotion of valuable drugs, the immunity activity of food or health products. The present invention verifies the polypeptide GLPN can regulate immunity, enhance the proliferation ability of lymphocytes and macrophages, promote macrophage nitric oxide induced increase, improve TNF alpha and IL beta and IL 1 6 level, improve the ability to resist pathogen infection, reduce the incidence of the body, and the body will not cause immune rejection of development has very important significance in foods and health care products in regulating immune function.

【技术实现步骤摘要】
一种生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn及其制备与应用
本专利技术涉及蛋白领域，尤其是涉及一种生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn及其制备与应用。
技术介绍
生物活性肽(BioactivePeptides，BAP)是一类具有多种生物学功能、对动物机体的生命活动有益的肽类化合物。食物中的蛋白质在被动物消化吸收利用过程中，会变为多肽或者游离的氨基酸，通过小肠上皮细胞的吸收转运直接进入动物的血液循环。在这些多肽中，有一部分具有特殊的生理功能，例如促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等功能，被称为“生物活性肽”。生物活性肽是一种极具应用前景的功能物质，因此，也是当前国际食品界最热门的研究课题。免疫活性肽是继阿片肽发现后首次从乳蛋白中获得并证明其生理活性的一类生物活性肽。1981年Jolles等人首次发现，利用胰蛋白酶水解人乳蛋白，可以得到一个氨基酸序列为Val-Glu-Pro-Ile-Pro-Tyr的六肽，体外实验证明该肽能够增强小鼠腹腔巨噬细胞对绵羊红细胞的吞噬作用。Migliore-Samour等人发现来自酪蛋白的六肽Thr-Thr-Met-Pro-Leu-Trp能够刺激绵羊血红细胞对小鼠腹膜巨噬细胞的吞噬作用以及增强对于肺炎克雷伯菌的抵抗。李素萍等人用合成的乳源免疫调节肽(PGPIPN)饲喂大鼠发现大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用和红细胞相关的免疫调节功能有显著的增强。研究表明，免疫活性肽不仅能够调节机体免疫力，刺激机体淋巴细胞的增殖，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进细胞因子的释放、提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，而且不会引起机体的免疫排斥反应。目前关于生物活性多肽的研究有很多，比如中国专利CN105254738A公布了一种来源于β-酪蛋白的乳源性生物活性多肽DELQDKIH，中国专利CN105254739A公布了一种来源于αs1-酪蛋白的乳源性生物活性多肽GTQYTD，中国专利CN105254740A公布了一种来源于αs2-酪蛋白的乳源性生物活性多肽NQFYQKF。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了提供一种生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn及其制备与应用。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：本专利技术第一方面，提供一种生物活性肽，其氨基酸序列为Gly-Leu-Pro-Asn(简写表达形式为GLPN)，见SEQIDNO：1。较优的，所述生物活性肽具有促进机体免疫力活性或调节机体免疫力的功能。本专利技术第二方面，提供一种编码所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn的核苷酸片段，所述核苷酸片段的序列如SEQIDNO：2所示。本专利技术第三方面，提供所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn的制备方法，包括采用化学合成的方法合成所述生物活性多肽GLPN。本专利技术第四方面，提供所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn的应用。本专利技术所述生物活性肽具有促进机体免疫力活性或调节机体免疫力的功能。因此，本专利技术提供了前述生物活性肽在制备具有提高机体免疫力的食品或者保健品以及提高机体免疫力药物中的应用。本专利技术第五方面，提供提高机体免疫力的药物、食品或保健品，其包含所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn或所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn的衍生物。所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn的衍生物，是指在多肽的氨基酸侧链基团上、氨基端或羧基端进行羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、磷酸化、酯化或糖基化等修饰，得到的多肽衍生物。与现有技术相比，本专利技术的生物活性肽GLPN具有较好的促进机体免疫力的生物活性；本专利技术的生物活性肽GLPN能够调节机体免疫力，增强淋巴细胞和巨噬细胞的体外增殖能力，促进巨噬细胞一氧化氮诱生量增加，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，而且不会引起机体的免疫排斥反应，对开发具有调节免疫功能的乳制品和保健品具有十分重要的意义。附图说明图1：质量色谱图；图2：一级质谱图；图3：分子式分析图。具体实施方式在进一步描述本专利技术具体实施方式之前，应理解，本专利技术的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULARCLONING：ALABORATORYMANUAL，Secondedition，ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989andThirdedition，2001；Ausubel等，CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY，JohnWiley&Sons，NewYork，1987andperiodicupdates；theseriesMETHODSINENZYMOLOGY，AcademicPress，SanDiego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTUREANDFUNCTION，Thirdedition，AcademicPress，SanDiego，1998；METHODSINENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.WassarmanandA.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，SanDiego，1999；和METHODSINMOLECULARBIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)HumanaPress，Totowa，1999等。下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明。实施例1生物活性肽的合成一、生物活性肽的合成1.称取RINK树脂3g(取代度0.3mmol/g)于150ml的反应器中，用50ml的二氯甲烷(DCM)浸泡。2.2小时后，用3倍树脂体积的氮-二甲基甲酰胺(DMF)洗涤树脂，然后抽干，如此重复四次，将树脂抽干后待用。3.向反应器中加入一定量的20％哌啶(哌啶/DMF＝1:4,v:v)，放在脱色摇床上摇晃20min，以此来脱去树脂上的Fmoc保护基团。脱完保护后用3倍树脂体积的DMF洗涤四次，然后抽干。4.取少量树脂用茚三酮(九井水合茚三酮)法检测(检A、检B各两滴，100℃反应1min)，树脂有颜色，说明脱保护成功。5.称取氨基酸Gly适量和1-羟基-苯骈三唑(HOBT)适量于50ml的离心管中，加入20ml的DMF将其溶解，然后加入3ml的N,N二异丙基碳二亚胺(DIC)振荡摇匀1min，待溶液澄清后加入到反本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物活性肽Gly‑Leu‑Pro‑Asn，其特征在于，其氨基酸序列为Gly Leu Pro Asn。

【技术特征摘要】
1.一种生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn，其特征在于，其氨基酸序列为GlyLeuProAsn。2.编码权利要求1所述生物活性多肽Gly-Leu-Pro-Asn的核苷酸片段，其特征在于，所述核苷酸片段的序列如SEQIDNO：2所示。3.一种如权利要求1所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn的制备方法，其特征在于，采用化学合成的方法合成所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn。4.一种如权利要求1所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn在制备用于促进机体免疫力活性的药物、食品或保健品中的应用。5.一种提高机体免疫力的药物，其特征在于，包含如权利要求1所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn或所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn的衍生物。6.根据权利要求5所述提高机体免疫力的药物，其特征在于，所述生物活性肽Gly-Leu-Pro-Asn的衍生物，是指在多肽的氨基酸侧链基团上、氨基端或羧基端进行羟基化、羧基化、羰基化、甲基...

【专利技术属性】
技术研发人员：张少辉，李婉茹，陈静，汪超，李阜烁，袁芳豪，范梦珠，
申请(专利权)人：浙江辉肽生命健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33